DIS3表达调控对人骨髓瘤细胞集落形成及内皮细胞成管能力的影响

目的:探究DIS3表达调控对人骨髓瘤细胞集落形成及内皮细胞成管能力的影响及相关机制。方法:选取人骨髓瘤细胞株NCI-H929、RPMI-8226和U266为研究对象,分别设计并构建DIS3基因过表达载体和DIS3-siRNA。3种细胞实验均分成5组:对照(control)组、siRNA阴性对照(siRNA-NC)组、siRNA-DIS3组、空载体(empty vector)组以及DIS3过表达(over-DIS3)组。平板集落形成实验检测各组细胞的集落形成能力;Western blot检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和HIF-3α蛋白表达的变化;RT-qPCR及Western blot检测血管形成相关基因Ang1、Ang2及VEGF-A在mRNA和蛋白水平上的表达;Matrigel法检测各组细胞培养上清液对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)管形结构生成能力的影响。结果:下述检测指标的变化趋势在NCI-H929、RPMI-8226和U266 3种细胞中存在相似性:与空载体组比较,DIS3过表达组的细胞集落形成能力被显著抑制(P<0.05);而与siRNA-NC组比较,siRNA-DIS3显著增强细胞的集落形成能力(P<0.01)。DIS3过表达降低了HIF-1α和HIF-3α蛋白的表达(P<0.05),敲减DIS3表达则显著促进了HIF-1α和HIF-3α蛋白的表达(P<0.05)。此外,DIS3过表达显著降低了Ang1和Ang2及VEGF-A的mRNA和蛋白水平(P<0.05),而siRNA-DIS3则显著促进了Ang1和Ang2及VEGF-A的表达(P<0.05)。与空载体组比较,DIS3过表达组细胞培养上清液显著抑制了HUVECs的成管能力(P<0.01);而与siRNA-NC组比较,siRNA-DIS3组细胞培养上清液则显著提高了HUVECs的成管能力(P<0.05)。结论:DIS3过表达能显著抑制人骨髓瘤细胞的集落形成能力及HUVECs的成管能力,这可能与其对HIF-1α和HIF-3α蛋白表达的调控密切相关。

尿道底板切开成管术治疗先天性尿道下裂

目的探讨尿道底板切开成管术(TIP)治疗尿道下裂的效果.方法选择性对7例阴茎型尿道下裂患者行TIP术,术后留置支架管和导尿管,7～10 d后拔除.结果术后阴茎伸直,外形美观,尿道口开口正位,排尿通畅,未出现尿瘘及尿道狭窄.结论 TIP术作为治疗阴茎型尿道下裂的理想手术方法之一,手术操作相对简单,手术时间短,术后整形效果好.

复方黄柏液对内皮细胞增殖迁移成管影响的机制研究

目的:探索复方黄柏液对内皮细胞增殖迁移成管影响的机制,为复方黄柏溶液用于治疗糖尿病足溃疡提供依据。方法:用CCK-8法检测药物毒性,探索复方黄柏液使用的最佳药物浓度、CCK-8法检测细胞增殖活力、细胞划痕实验检测细胞迁移率、成管实验检测细胞成管能力、蛋白质印迹法(Western Blotting)实验检测蛋白表达水平的变化。结果:使用复方黄柏液后,高糖组内皮细胞的增殖、迁移、成管能力较前有了提高,并降低了促血管生成素2(Ang-2)蛋白水平,增加血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸化酪氨酸激酶受体-2(P-Tie)蛋白水平。结论:复方黄柏液通过促进内皮细胞增殖、迁移、成管以及影响蛋白表达水平,改善内皮功能障碍来实现对糖尿病足溃疡的恢复。

质子感知受体OGR1介导酸化环境对内皮祖细胞活力和成管作用的影响

目的:分析卵巢癌G蛋白偶联受体1(ovarian cancer G-protein-coupled receptor 1, OGR1)在内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中的表达,探索OGR1的酸调节效应对内皮祖细胞活力和成管能力的影响。方法:体外分离和培养小鼠骨髓源性内皮祖细胞,采取 FITC-UEA-I 和 DiI-Ac-LDL 双荧光染色法鉴定,利用real-time PCR和Western blot检测OGR1在小鼠EPCs的表达。采用不同pH值培养基处理EPCs后分析OGR1表达。以小干扰RNA(siRNA)沉默 OGR1 ,使用CCK-8实验和流式细胞术分析EPCs的活力及周期分布的变化,划痕实验、Transwell迁移实验以及成管实验分析EPCs的迁移能力和成管作用的变化。结果:分离诱导的EPCs分化良好,FITC-UEA-I 及 DiI-Ac-LDL染色均呈阳性,小鼠内皮祖细胞存在OGR1的mRNA及蛋白表达。随着培养基pH值降低,OGR1表达逐渐升高,在pH 6.4的培养基中OGR1表达最高( P <0.05)。pH 6.4培养基抑制EPCs的活力并导致其生长停滞,而使用siRNA沉默 OGR1 后可部分逆转酸化环境对EPCs的作用( P <0.05)。pH 6.4培养基抑制EPCs的迁移和成管能力,而使用siRNA沉默 OGR1 后可部分逆转酸化环境对EPCs的作用( P <0.05)。结论: OGR1在EPCs中呈阳性表达,并介导了酸化环境对EPCs活力及迁移和成管能力的抑制作用。

复方黄柏液对糖基化内皮细胞增殖迁移成管的影响

目的:通过研究复方黄柏液对糖基化内皮细胞增殖迁移成管的影响,寻找复方黄柏液治疗糖尿病足溃疡的依据。方法:为说明晚期糖基化终产物受体(RAGE),用晚期糖基化终产物(AGEs)诱发内皮细胞功能障碍的重要受体,本研究设置了RT-PCR实验沉默了RAGE,结果发现沉默RAGE后,经AGEs处理内皮细胞,检测其内皮细胞增殖迁移成管作用出现上升,因此检测RAGE表达水平的变化能作为后续评价复方黄柏液改善内皮细胞功能的重要指标。如果RAGE水平出现下降,就证明内皮细胞功能障碍得到了修复,复方黄柏液治疗糖尿病足溃疡是有效的。为了评估内皮细胞的增殖能力,设置CCK-8实验;用划痕实验检查内皮细胞的迁移水平变化;通过成管实验来测试内皮细胞的成管作用;利用蛋白质印迹法检测RAGE蛋白表达水平。结果:RAGE-3 siRNA沉默效率最好,可用于后续实验。与空白组比较,AGEs处理后内皮细胞增殖活性、迁移水平、成管作用都下降,RAGE蛋白表达水平上升。与AGEs-BSA处理组比较,沉默RAGE或加入复方黄柏液后均较AGEs处理后内皮细胞的增殖迁移成管作用有了提高,RAGE蛋白的表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:复方黄柏液可能通过改善AGEs诱发的内皮细胞功能障碍即促进内皮细胞增殖迁移成管来实现对糖尿病足溃疡的愈合。

阿魏酸对间充质干细胞增殖、分泌干细胞因子和成管分化的影响

目的探讨阿魏酸(ferulic acid,FA)对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖、分泌干细胞因子(stem cell factor,SCF)和定向内皮细胞成管分化的影响。方法取足月健康新生儿脐带血10 mL,采用密度梯度离心法得到单个细胞,并鉴定人脐带血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCBMSCs)分化能力。将hUCBMSCs分别用不同浓度梯度的FA(0、1、2、4、8、16 mg/L)干预以确定FA促hUCBMSCs增殖的最佳浓度。取hUCBMSCs随机分为实验组与对照组,实验组用最佳浓度FA干预,对照组用等体积PBS液处理。分别采用CCK-8细胞增殖试验、Matrigel体外成管试验及ELISA法检测两组hUCBMSCs增殖、成管及分泌SCF的能力;采用免疫荧光法检测hUCBMSCs向内皮细胞分化后CD31、vWF的表达情况。结果(1)hUCBMSCs能成功诱导分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞;(2)FA促进hUCBMSCs增殖的最佳浓度为2 mg/L;(3)与对照组相比,实验组hUCBMSCs增殖、成管及分泌SCF能力显著增强,且FA诱导成管分化后CD31和vWF的表达明显增多(P<0.05)。结论FA能促进hUCBMSCs增殖及分泌SCF,同时能诱导hUCBMSCs成管分化,进一步证实FA具有促进血管新生的潜能。

补骨颗粒含药血清对体外成管实验影响的研究

目的:观察补骨颗粒含药血清对内皮祖细胞(EPCs)的成管实验及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,从而探讨补骨颗粒对血管生成的影响机制。方法:取成年SD大鼠按照随机对照表分为空白对照组和实验组,空白对照组予生理盐水2 ml/kg灌胃,实验组予补骨颗粒水溶液3.08 g/kg灌胃,制备空白血清及补骨颗粒含药血清。取10周龄的雄性SD大鼠四肢股骨,在体外分离培养大鼠EPCs,并进行传代培养,应用流式细胞仪检测鉴定细胞表面抗原。收集传代培养3代的EPCs,分为补骨颗粒含药血清组及空白血清组,分别予以补骨颗粒含药血清及空白血清干预。于体外基质胶中培养EPCs并观察其成管情况。同时应用Elisa检测方法检测VEGF表达情况。采用SPSS 18.0软件进行数据统计分析。结果:骨髓中分离出的细胞培养14 d后使用流式细胞仪检测结果显示CD34^(+)细胞比例为70.03%,CD133^(+)细胞比例为67.99%,血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2^(+))细胞比例为63.96%。成管实验显示补骨颗粒含药血清组于干预72 h后,细胞形态趋于典型,呈毛细血管腔样结构;空白血清组未形成典型的毛细血管腔样结构。Elisa检测结果显示补骨颗粒含药血清组在干预24、48 h时的VEGF表达量明显高于空白血清组(t=3.069、2.939,P=0.037、0.042);但是在干预72 h时补骨颗粒含药血清组与空白血清组VEGF表达量比较,差异无统计学意义(t=2.541,P=0.064)。补骨颗粒含药血清组在干预24、48、72 h时的VEGF表达量无明显变化(F=0.684,P=0.523),而空白血清组在干预24、48、72 h时的VEGF表达量明显升高(F=5.656,P=0.019)。结论:补骨颗粒含药血清可以激活EPCs的活性,促进VEGF表达,从而增强EPCs的血管生成作用。

PDGFRβ对人脐静脉血管内皮细胞增殖、凋亡和成管的影响

目的探索PDGFRβ在高糖培养的血管内皮细胞中的表达情况及其对血管内皮细胞增殖、凋亡及成管的影响和机制。方法在体外培养人脐静脉血管内皮细胞,构建高糖模型,转染si-RNA敲减PDGFRβ,将细胞分为Control组、35mM组、si-PDGFRβ+35mM组。qRT-PCR方法检测各组细胞PDGFRβ的mRNA表达情况;CCK8方法检测各组细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况;血管形成实验检测成管能力的变化。结果与Control组相比,35mM组中PDGFRβ的mRNA表达升高(P<0.05)。在35mM组的细胞中敲低PDGFRβ后,细胞的增殖能力有所恢复,凋亡情况有所减少,成管能力降低(P<0.05)。结论PDGFRβ在高糖培养的人脐静脉内皮细胞中高表达,敲减PDGFRβ可以恢复其增殖能力、减轻凋亡情况、降低成管能力。

内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2对血管新生的影响:生物信息学分析和实验验证

背景:血管新生是心血管疾病的主要干预靶点,骨形态发生蛋白2具有调控血管新生作用,但内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2对血管新生的调控作用不清楚。目的:探讨内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2对血管新生的影响。方法:(1)生物信息学分析:通过Panglao DB公共基因表达数据库单细胞转录组荟萃分析观察骨形态发生蛋白2细胞群表达丰度和定位。血管新生小鼠和内皮(心内膜)过表达骨形态发生蛋白2小鼠转录组测序数据集探索内皮细胞骨形态发生蛋白2对血管新生信号通路的调控作用。(2)体内实验验证:建立小鼠后肢缺血模型,对比模型小鼠患侧与健侧缺血后肢7,14和21 d血流灌注情况,免疫荧光和免疫组织化学染色评估小鼠骨形态发生蛋白2和CD31的表达定位情况。(3)体外实验验证:体外培养人脐静脉内皮细胞,分为对照组、缺氧组和骨形态发生蛋白2抑制剂(Noggin蛋白)干预组,培养24 h,观察各组内皮细胞血管新生情况。结果与结论:(1)内皮细胞是表达骨形态发生蛋白2的重要细胞亚群,在血管新生内皮细胞和骨形态发生蛋白2过表达内皮细胞转录组再分析均发现骨形态发生蛋白2表达明显升高,血管新生通路明显激活。(2)缺血7 d小鼠新生血管周围骨形态发生蛋白2阳性血管明显增加(P<0.05),缺血2周骨形态发生蛋白2阳性血管明显减少(P<0.001)。(3)体外培养人脐静脉内皮细胞,缺氧干预后,内皮细胞迁移能力和血管出芽明显增加,血管新生因子血管内皮生长因子和血小板衍生生长因子的表达明显升高,Noggin明显减少了缺氧诱导的内皮细胞血管新生(P<0.001),并下调血管内皮生长因子和血小板衍生生长因子的表达(P<0.01)。(4)结果证实,内皮细胞特异性骨形态发生蛋白2具有调控血管新生作用,靶向性内皮细胞骨形态发生蛋白2可望改善血管新生。

映山红花总黄酮促进大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性H_(2)S的关系

目的探讨映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)促大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性硫化氢(H_(2)S)的关系。方法采用大鼠脑血管内皮细胞单独培养及和与海马神经元共培养,分别采用不同的实验方法检测细胞增殖、迁移、成管及H_(2)S含量和钙离子荧光强度,包括CCK-8法、细胞划痕法、Transwell法、基质胶成管、H_(2)S试剂盒及钙离子荧光探针法。结果在单独培养的大鼠脑血管内皮细胞上,H_(2)S供体NaHS(200μmol·L^(-1))和TFR(90、270、810 mg·L^(-1))对大鼠脑血管内皮细胞的增殖、迁移、成管及[Ca^(2+)]i荧光强度都有明显的促进作用。而VEGFR_(2)阻断剂SU5416(10μmol·L^(-1))可抑制TFR的促进内皮细胞增殖、迁移和形成血管及[Ca^(2+)]i荧光强度;在与海马神经元共培养的大鼠脑血管内皮细胞上,TFR显著地升高共培养中H_(2)S含量,并被CBS抑制剂AOAA(200μmol·L^(-1))抑制。与此同时,TFR明显地促进共培养中大鼠脑血管内皮细胞的形成血管作用,并可被AOAA和VEGFR_(2)阻断剂SU5416显著地抑制。结论TFR在体外可通过VEGFR_(2)升高[Ca^(2+)]i来促进脑血管内皮细胞形成血管,并可通过诱导神经元中CBS生成H_(2)S作用于大鼠脑血管内皮细胞的VEGFR_(2)来促进血管形成。

DG200管状带式输送机的优化与改造

介绍紫金铜业熔炼厂管状带式输送机的使用情况,分析目前存在现状,通过对管状带式输送机操作方式优化、机械结构改进(包括头部驱动装置调整、头部驱动滚筒改造、中间段成管及展开段托辊重新选型、尾部受料装置改造等),降低设备维护成本,解决导致管状带式输送机停机的问题,提高设备稳定性。

桂皮醛经JAK2/STAT3通路抑制VEGF诱导的内皮细胞增殖、迁移及成管

目的:为探讨桂皮醛对糖尿病视网膜病变新生血管的作用及机制,观察了桂皮醛对血管内皮生长因子(VEGF)诱导EA. hy926细胞增殖、迁移、成管以及Janus激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法:将EA.hy926细胞分成空白组、模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和划痕实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞增殖和迁移作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(90,150μmol·L-1)组,采用管腔形成实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞成管作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+AG490 (50μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(90μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)+AG490(50μmol·L-1)组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果:与空白组比较,模型组能够显著地促进EA. hy 926细胞增殖和迁移(P <0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组能显著抑制VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖和迁移(P <0. 01)。与空白组比较,VEGF对EA. hy 926细胞成管具有一定的促进作用,成管的节点数、交叉点数、网眼数和血管分支数均有增加,但无统计学差异。与模型组比较,桂皮醛(90,150μmol·L-1)组对成管的节点数、交叉点数和网眼数均有明显抑制作用(P <0. 05,P <0. 01)。与空白组比较,模型组p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达明显升高(P <0. 05,P <0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(150μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P <0. 01),桂皮醛(90μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P <0. 05,P <0. 01)。结论:桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖、迁移、成管具有明显的抑制作用,该作用与抑制JAK2/STAT3通路的激活有关。

大鼠骨髓源性间充质干细胞对内皮细胞增殖及成管的影响

目的观察大鼠骨髓源性间充质干细胞（MSCs）对内皮细胞（ECs）增殖及成管能力的影响。方法采用密度梯度离心、流式细胞仪及免疫荧光的方法将不同培养条件下（DMEM及EGM-2培养液）大鼠骨髓源性单核细胞（BM—MNCs）进行分离及鉴定，并对直接和间接共培养（Transwells）的细胞进行体外成管和免疫荧光统计分析。结果与DMEM中的细胞比较，EGM-2培养的BM—MNCs能够形成典型的集落形成细胞。流式细胞仪检测和免疫荧光鉴定表明培养在DMEM和EGM-2中的细胞分别为MSCs（CD105、CD90和CD73表达率大于95％）和ECs（CD31阳性率大于90％）。与间接共培养比较，直接共培养后细胞的成管数量及长度均显著降低（P〈0．05）。免疫荧光染色进一步证明，直接共培养后ECs的数量显著减少（P〈0．05）。结论直接共培养下，大鼠MSCs能够抑制ECs的增殖及成管。

黄芪甲苷对人脐血间充质干细胞增殖与成管分化的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS-ⅣV)对人脐血间充质干细胞(hUCBMSCs)体外增殖和成管分化的影响,为进一步研究AS-Ⅳ作用于间充质干细胞介导的血管新生奠定基础。方法从足月健康新生儿脐带血中提取并传代培养得到hUCBMSCs,分别进行成骨、成软骨和成脂诱导分化鉴定,同时对hUCBMSCs表面抗原CD44,CD73,CD105进行流式细胞仪鉴定。将鉴定成功的hUCBMSCs分别在不同浓度梯度的AS-Ⅳ(0.50、100、200.300.400 mg/L)干预下培养,确定AS-Ⅳ促hUCBMSCs增殖的最佳浓度。另将hUCBMSCs随机分为实验组和对照组,实验组用最佳浓度的AS-Ⅳ干预,对照组用等体积的PBS液处理。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测AS-IV对hUCBMSCs增殖的影响,另通过Matrigel体外成管实验检测AS-Ⅳ对hUCBMSCs成管分化的影响,并用免疫荧光检测hUCBMSCs向内皮细胞分化后CD31、血管性血友病因子(vWF)的表达情况。结果光镜下hUCBMSCs细胞边缘清晰,排列整齐,呈典型的长梭状结构。流式细胞仪证实hUCBMSCs细胞表面有间充质干细胞的表面标志物。AS-Ⅳ促进hUCBMSCs增殖的最佳浓度为300 mg/L。对照组和实验组的OD值分别为(0.51±0.01)和(0.98±O.05),差异具有统计学意义(t=15.96,P<0.05),显示实验组增殖能力增强。Matrigel成管实验显示.与对照组比较,实验组体外成管密度更大,体外形成管网状结构的长度更长,差异具有统计学意义[(629.80±52.94)mm vs(110.36±13.19)mm,P<0.05]。与对照组相比,实验组AS-Ⅳ诱导hUCBMSCs成管分化后CD31和vWF的表达均增多,差异有统计学意义(t=13.64,13.18,P<0.05)。结论AS-Ⅳ对人脐血间充质干细胞无毒性,且能改善其增殖功能,并诱导hUCBMSCs向内皮细胞成管分化。

内皮祖细胞体外侵袭肝癌及成管能力的研究

目的探讨小鼠骨髓源性血管内皮祖细胞（EPCs）体外形成管腔样结构和侵袭H22肝癌细胞的可能性和条件。方法密度梯度离心法获取小鼠骨髓中单个核细胞，利用序列差速贴壁方法（依次在培养1h和24h后提取上清液中细胞）诱导培养，噻唑蓝（MTT）比色法检测在1、3、7、10、13、16、20d的细胞增殖能力，从细胞形态、免疫荧光、细胞免疫表型对培养细胞进行鉴定并观察培养1周后细胞的体外形成管腔结构及侵袭肝癌细胞的能力。结果EPCs在1周内呈集落样生长，1周后“鹅卵石”样结构；能吞噬低密度脂蛋白和膜连接荆豆凝集素，双染阳性率（96．46±1．74）％；EPCs表达CD34（91．23±3．76）％、血管内皮生长因子受体（VEGFR）-2（92．85-±2．12）％，但CDl33（61．54±13．71）％；EPCs在能够形成管腔样结构（26．6±13．4）／高倍镜（×100）；并向肿瘤细胞富集。结论小鼠骨髓中富含EPCs，利用序列差速贴壁方法得到较高纯度EPCs，并表现成血管倾向、侵袭肿瘤组织的能力。

人SH3GL2真核表达载体的构建及其对内皮细胞体外成管能力的影响

目的构建人SH3GL2基因的重组真核表达质粒,并转染至人脑微血管内皮细胞,检测对内皮细胞体外成管能力的影响。方法提取人脑微血管内皮细胞的总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增人SH3GL2基因的蛋白编码区(CDS),亚克隆至真核表达载体p IRES2-EGFP。测序正确后,将重组质粒转染至人脑微血管内皮细胞,采用matrigel三维血管生成实验检测对内皮细胞成管能力变化。结果人SH3GL2基因克隆至表达载体pIRES2-EGFP,重组质粒双酶切鉴定后,琼脂糖凝胶电泳验证片段大小为1058bp。将重组质粒转染人脑微血管内皮细胞,和对照组相比,pIRES2-EGFP-SH3GL2转染组内皮细胞成管能力显著降低(<0.05)。结论成功构建人SH3GL2真核表达载体,人脑微血管内皮细胞过表达SH3GL2能够抑制内皮细胞的成管能力。

爱帕琳肽13/血管紧张素受体AT1相关受体蛋白同源二聚体对人脐静脉内皮细胞行为的影响

目的探究血管紧张素受体AT1相关受体蛋白(putative receptor protein related to AT1,APJ)同源二聚体对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)行为,即增殖、迁移和成管的作用。方法将HUVECs随机分为对照组(PBS)、APJ单体组[爱帕琳肽13(Apelin-13)+TM1]和APJ同源二聚体组(Apelin-13+PBS),分别用Western blot和基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)检测APJ和APJ同源二聚体在HUVECs中的表达;实时细胞分析仪(RTCA)检测Apelin-13引起50%最大效应的浓度(EC_(50));CCK-8法测定HUVECs的细胞活力;划痕实验检测HUVECs的迁移能力;人工基底膜(matrigel)检测HUVECs的成管。结果Western blot和MALDI-TOF MS实验结果显示,APJ和APJ同源二聚体均表达于HUVECs中。Apelin-13的EC_(50)为2.26×10^(-8)mol·L^(-1),且引起最大效应的浓度为1.0×10^(-6)mol·L^(-1)。CCK-8实验、迁移实验和成管实验结果显示,各组细胞随着时间的延长逐渐向划痕裸区迁移,镜下也观察到各组细胞均出现成管,数据统计发现Apelin-13+PBS和Apelin-13+TM1组的HUVECs增殖、迁移和成管能力均较PBS组明显增加,且Apelin-13+PBS组的增殖、迁移和成管能力明显好于Apelin-13+TM1组(P<0.05)。结论APJ同源二聚体对HUVECs的增殖、迁移和成管均具有促进作用,且效果优于APJ单体。

S1PR1激活PI3K/Akt保护高糖环境下视网膜血管内皮细胞的生物学功能

目的研究1⁃磷酸鞘氨醇受体1(S1PR1)对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞(HREC)的迁移、成管能力的影响,并进一步探讨其作用机制。方法将HREC随机分为空白病毒组、S1PR1过表达组、高糖+空白病毒组和高糖+S1PR1过表达组。采用细胞划痕及Transwell实验检测细胞迁移能力,成管实验检测细胞成管能力,并采用Western blot检测PI3K/Akt通路相关蛋白分子表达情况。结果与空白病毒组相比,高糖+空白病毒组的伤口愈合百分比、细胞迁移数量、成管分支点数及小管总长度均显著减少(均P<0.01);而与高糖+空白病毒组相比,高糖+S1PR1过表达组均显著增多(均P<0.01)。各组间PI3K、Akt总蛋白表达差异均无统计学意义均无显著差异(均P>0.05),而p⁃PI3K、p⁃Akt蛋白表达差异均有统计学意义均具有显著性差异(均P<0.01);与空白病毒组相比,高糖+空白病毒组的p⁃PI3K、p⁃Akt均显著减少(均P<0.01);而与高糖+空白病毒组相比,高糖+S1PR1过表达组均显著增多(均P<0.01)。结论S1PR1通过激活PI3K/Akt通路,保护高糖环境下HREC的迁移及成管能力。

Anip973细胞上清液增加脐静脉内皮细胞的生物活性

背景与目的肿瘤微血管内皮细胞与正常组织来源的微血管内皮细胞相比,具有对生长因子反应性高、粘附因子表达高等特点,造成肿瘤血管通透性高且新生旺盛,导致肿瘤的快速生长和转移。因此了解肿瘤微环境中内皮细胞发生、形态及功能上的异质性特点,对进行合理的、个性化的、以血管内皮细胞为靶点的抗血管新生治疗有一定的指导作用。本实验旨在研究高转移肺腺癌Anip973细胞培养上清液对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)表面标记及其生物学行为的影响。方法以含有不同浓度Anip973细胞上清液的培养基(RPMI-1640+10%胎牛血清)培养的HUVEC为实验组、单纯培养基培养的HUVEC为对照组,以CCK-8检测各组细胞增殖率、基质胶成管实验检测成管能力、Transwell检测迁移能力、流式细胞术检测细胞表面标记CD105、CD31以及凋亡标记Annexin V的表达,并分析细胞表面标记的表达与生物学行为之间的关系。结果与对照组相比,经Anip973细胞上清液培养的HUVEC增殖更多、且在浓度为250μL/m L作用24 h最明显(P=0.002);成管及迁移能力亦均较对照组增强,分别在浓度为125μL/m L(P<0.001)、250μL/m L(P=0.002)时达最强;细胞表面标记CD105表达阳性率升高、浓度为250μL/m L(P=0.028)最明显;CD31表达阳性率呈浓度依赖性升高;凋亡细胞比例降低。相关性分析显示:CD105的表达阳性率与细胞增殖及迁移能力呈正相关关系、CD31的表达与生物学行为并无明显相关性。结论 Anip973细胞上清液能促进HUVEC细胞增殖、迁移、血管形成,CD105也随之变化、并可在一定程度上反应其生物学行为。