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DIS3表达调控对人骨髓瘤细胞集落形成及内皮细胞成管能力的影响 被引量:2
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作者 邹亮 程辉 +4 位作者 张婷 周英 关军 程平 王兰兰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1463-1469,共7页
目的:探究DIS3表达调控对人骨髓瘤细胞集落形成及内皮细胞成管能力的影响及相关机制。方法:选取人骨髓瘤细胞株NCI-H929、RPMI-8226和U266为研究对象,分别设计并构建DIS3基因过表达载体和DIS3-siRNA。3种细胞实验均分成5组:对照(control... 目的:探究DIS3表达调控对人骨髓瘤细胞集落形成及内皮细胞成管能力的影响及相关机制。方法:选取人骨髓瘤细胞株NCI-H929、RPMI-8226和U266为研究对象,分别设计并构建DIS3基因过表达载体和DIS3-siRNA。3种细胞实验均分成5组:对照(control)组、siRNA阴性对照(siRNA-NC)组、siRNA-DIS3组、空载体(empty vector)组以及DIS3过表达(over-DIS3)组。平板集落形成实验检测各组细胞的集落形成能力;Western blot检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和HIF-3α蛋白表达的变化;RT-qPCR及Western blot检测血管形成相关基因Ang1、Ang2及VEGF-A在mRNA和蛋白水平上的表达;Matrigel法检测各组细胞培养上清液对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)管形结构生成能力的影响。结果:下述检测指标的变化趋势在NCI-H929、RPMI-8226和U266 3种细胞中存在相似性:与空载体组比较,DIS3过表达组的细胞集落形成能力被显著抑制(P<0.05);而与siRNA-NC组比较,siRNA-DIS3显著增强细胞的集落形成能力(P<0.01)。DIS3过表达降低了HIF-1α和HIF-3α蛋白的表达(P<0.05),敲减DIS3表达则显著促进了HIF-1α和HIF-3α蛋白的表达(P<0.05)。此外,DIS3过表达显著降低了Ang1和Ang2及VEGF-A的mRNA和蛋白水平(P<0.05),而siRNA-DIS3则显著促进了Ang1和Ang2及VEGF-A的表达(P<0.05)。与空载体组比较,DIS3过表达组细胞培养上清液显著抑制了HUVECs的成管能力(P<0.01);而与siRNA-NC组比较,siRNA-DIS3组细胞培养上清液则显著提高了HUVECs的成管能力(P<0.05)。结论:DIS3过表达能显著抑制人骨髓瘤细胞的集落形成能力及HUVECs的成管能力,这可能与其对HIF-1α和HIF-3α蛋白表达的调控密切相关。 展开更多
关键词 DIS3基因 多发性骨髓瘤 集落形成 人脐静脉内皮细胞 成管能力
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内皮祖细胞体外侵袭肝癌及成管能力的研究
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作者 邓正明 孙喜太 +1 位作者 朱海涛 丁义涛 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1292-1294,F0003,共4页
目的探讨小鼠骨髓源性血管内皮祖细胞(EPCs)体外形成管腔样结构和侵袭H22肝癌细胞的可能性和条件。方法密度梯度离心法获取小鼠骨髓中单个核细胞,利用序列差速贴壁方法(依次在培养1h和24h后提取上清液中细胞)诱导培养,噻唑蓝(MT... 目的探讨小鼠骨髓源性血管内皮祖细胞(EPCs)体外形成管腔样结构和侵袭H22肝癌细胞的可能性和条件。方法密度梯度离心法获取小鼠骨髓中单个核细胞,利用序列差速贴壁方法(依次在培养1h和24h后提取上清液中细胞)诱导培养,噻唑蓝(MTT)比色法检测在1、3、7、10、13、16、20d的细胞增殖能力,从细胞形态、免疫荧光、细胞免疫表型对培养细胞进行鉴定并观察培养1周后细胞的体外形成管腔结构及侵袭肝癌细胞的能力。结果EPCs在1周内呈集落样生长,1周后“鹅卵石”样结构;能吞噬低密度脂蛋白和膜连接荆豆凝集素,双染阳性率(96.46±1.74)%;EPCs表达CD34(91.23±3.76)%、血管内皮生长因子受体(VEGFR)-2(92.85-±2.12)%,但CDl33(61.54±13.71)%;EPCs在能够形成管腔样结构(26.6±13.4)/高倍镜(×100);并向肿瘤细胞富集。结论小鼠骨髓中富含EPCs,利用序列差速贴壁方法得到较高纯度EPCs,并表现成血管倾向、侵袭肿瘤组织的能力。 展开更多
关键词 肝细胞 内皮祖细胞 内皮细胞 成管能力 侵袭
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人SH3GL2真核表达载体的构建及其对内皮细胞体外成管能力的影响
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作者 刘文静 薛一雪 商秀丽 《解剖科学进展》 2016年第3期295-298,共4页
目的构建人SH3GL2基因的重组真核表达质粒,并转染至人脑微血管内皮细胞,检测对内皮细胞体外成管能力的影响。方法提取人脑微血管内皮细胞的总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增人SH3GL2基因的蛋白编码区(CDS),亚克隆至真核表达载体p... 目的构建人SH3GL2基因的重组真核表达质粒,并转染至人脑微血管内皮细胞,检测对内皮细胞体外成管能力的影响。方法提取人脑微血管内皮细胞的总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增人SH3GL2基因的蛋白编码区(CDS),亚克隆至真核表达载体p IRES2-EGFP。测序正确后,将重组质粒转染至人脑微血管内皮细胞,采用matrigel三维血管生成实验检测对内皮细胞成管能力变化。结果人SH3GL2基因克隆至表达载体pIRES2-EGFP,重组质粒双酶切鉴定后,琼脂糖凝胶电泳验证片段大小为1058bp。将重组质粒转染人脑微血管内皮细胞,和对照组相比,pIRES2-EGFP-SH3GL2转染组内皮细胞成管能力显著降低(<0.05)。结论成功构建人SH3GL2真核表达载体,人脑微血管内皮细胞过表达SH3GL2能够抑制内皮细胞的成管能力。 展开更多
关键词 SH3GL2 内皮细胞 质粒 转染 成管能力
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骨髓间充质干细胞在多发性骨髓瘤活动与缓解期具有不同的促血管生成能力 被引量:4
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作者 李香丽 张小影 +1 位作者 臧立 王晓芳 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第37期5935-5941,共7页
背景:活动期和缓解期多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的血管生成能力有无差异目前尚不清楚。目的:观察多发性骨髓瘤活动期及缓解期骨髓间充质干细胞促血管生成能力的差异。方法:抽取13例多发性骨髓瘤患者治疗前和4个周期治疗后的骨髓... 背景:活动期和缓解期多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的血管生成能力有无差异目前尚不清楚。目的:观察多发性骨髓瘤活动期及缓解期骨髓间充质干细胞促血管生成能力的差异。方法:抽取13例多发性骨髓瘤患者治疗前和4个周期治疗后的骨髓,分离培养出骨髓间充质干细胞,采用ELISA方法测定骨髓间充质干细胞培养上清液中血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的浓度;MTT检测骨髓间充质干细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞增殖能力的影响;通过Transwell小室观察骨髓间充质干细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞运动能力的影响;通过人工基底膜实验观察骨髓间充质干细胞体外促血管生成和成管能力。结果与结论:活动期多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞培养上清中血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子浓度明显高于缓解期(P<0.05);骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞增殖作用呈剂量依赖性,活动期明显强于缓解期(P<0.05);活动期骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞迁移作用明显高于缓解期(P<0.05);骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞体外具有明显成血管作用,活动期明显强于缓解期(P<0.05)。结果提示多发性骨髓瘤活动期骨髓间充质干细胞促血管生成能力明显大于缓解期。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 多发性骨髓瘤 骨髓间充质干细胞 细胞培养上清液 细胞迁移 直接成管能力 血管生成能力 脐静脉内皮细胞 血管生成因子 活动期 缓解期 国家自然科学基金
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质子感知受体OGR1介导酸化环境对内皮祖细胞活力和成管作用的影响 被引量:1
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作者 徐吉 丁声龙 +5 位作者 陈方毅 张继红 桂柯科 熊敏 李炳 赵明东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1579-1586,共8页
目的:分析卵巢癌G蛋白偶联受体1(ovarian cancer G-protein-coupled receptor 1, OGR1)在内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中的表达,探索OGR1的酸调节效应对内皮祖细胞活力和成管能力的影响。方法:体外分离和培养小鼠骨... 目的:分析卵巢癌G蛋白偶联受体1(ovarian cancer G-protein-coupled receptor 1, OGR1)在内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中的表达,探索OGR1的酸调节效应对内皮祖细胞活力和成管能力的影响。方法:体外分离和培养小鼠骨髓源性内皮祖细胞,采取 FITC-UEA-I 和 DiI-Ac-LDL 双荧光染色法鉴定,利用real-time PCR和Western blot检测OGR1在小鼠EPCs的表达。采用不同pH值培养基处理EPCs后分析OGR1表达。以小干扰RNA(siRNA)沉默 OGR1 ,使用CCK-8实验和流式细胞术分析EPCs的活力及周期分布的变化,划痕实验、Transwell迁移实验以及成管实验分析EPCs的迁移能力和成管作用的变化。结果:分离诱导的EPCs分化良好,FITC-UEA-I 及 DiI-Ac-LDL染色均呈阳性,小鼠内皮祖细胞存在OGR1的mRNA及蛋白表达。随着培养基pH值降低,OGR1表达逐渐升高,在pH 6.4的培养基中OGR1表达最高( P <0.05)。pH 6.4培养基抑制EPCs的活力并导致其生长停滞,而使用siRNA沉默 OGR1 后可部分逆转酸化环境对EPCs的作用( P <0.05)。pH 6.4培养基抑制EPCs的迁移和成管能力,而使用siRNA沉默 OGR1 后可部分逆转酸化环境对EPCs的作用( P <0.05)。结论: OGR1在EPCs中呈阳性表达,并介导了酸化环境对EPCs活力及迁移和成管能力的抑制作用。 展开更多
关键词 股骨头缺血性坏死 卵巢癌G蛋白偶联受体1 内皮祖细胞 酸化环境 成管能力
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长链非编码RNA-kcnq1重叠转录物1通过负性调控miR-19a表达对人脐静脉内皮细胞功能影响实验研究 被引量:2
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作者 张媛 马媛 +3 位作者 鲁杨 刘颖燕 周露秋 刘芳 《陕西医学杂志》 CAS 2022年第8期939-943,共5页
目的:分析子痫前期(PE)患者胎盘及血清中长链非编码RNA(lncRNA)-kcnq1重叠转录物1(kcnq1ot1)表达情况,及其通过调控微小RNA(miRNA)19a对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的影响。方法:荧光实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测15例PE晚孕患... 目的:分析子痫前期(PE)患者胎盘及血清中长链非编码RNA(lncRNA)-kcnq1重叠转录物1(kcnq1ot1)表达情况,及其通过调控微小RNA(miRNA)19a对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的影响。方法:荧光实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测15例PE晚孕患者(PE组)与15例正常晚孕患者(正常组)血清及胎盘组织中lncRNA-kcnq1ot1的表达;将HUVEC分为:过表达组(转染pcDNA3.1-kcnq1ot1)、抑制组(转染siRNA-kcnq1ot1)、对照组(未转染组)。qRT-PCR检测转染后三组HUVEC中miR-19a表达,蛋白免疫印迹(Western blot)检测三组HUVEC中CDKN2B、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达,管样形成实验检测三组HUVEC管腔数及总分支长度。结果:与正常组相比,PE组患者血清及胎盘组织中lncRNA-kcnq1ot1的表达降低(均P<0.05);与对照组相比,抑制组HUVEC中miR-19a在mRNA水平表达增高,CDKN2B、Cyclin D1在蛋白水平表达降低,且该组HUVEC管腔数及总分支长度降低(均P<0.05)。结论:lncRNA-kcnq1ot1在PE患者血清及胎盘组织中低表达,lncRNA-kcnq1ot1通过负性调控miR-19a表达,抑制HUVEC成管能力。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 微小RNA 子痫前期 人脐静脉内皮细胞 成管能力 负性调控
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益肺清化颗粒对人脐静脉内皮细胞血管生成的抑制作用及机制
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作者 崔一鸣 周斌 +5 位作者 李斐斐 陈璐 黄凡 廉艳红 王伟珍 孙静晶 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期3246-3249,共4页
目的:研究益肺清化颗粒对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成的抑制作用及其机制。方法:运用Transwell小室、Matrigel小管形成、Western Blot实验方法观察益肺清化颗粒高、中、低浓度(5%、10%、20%)含药血清、30μmol/L吉非替尼及30μmol/... 目的:研究益肺清化颗粒对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成的抑制作用及其机制。方法:运用Transwell小室、Matrigel小管形成、Western Blot实验方法观察益肺清化颗粒高、中、低浓度(5%、10%、20%)含药血清、30μmol/L吉非替尼及30μmol/L吉非替尼+20%益肺清化颗粒高浓度含药血清对HUVEC细胞迁移、成管能力、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,益肺清化颗粒各浓度含药血清对HUVEC的迁移、VEGF和KDR均具有抑制作用(P<0.05,P<0.01);益肺清化颗粒高浓度组可降低HUVEC在体外分化成管状结构的能力。结论:益肺清化颗粒可能是通过VEGF-KDR信号通路产生抑制细胞迁移、小管生成作用,进而发挥抑制肿瘤的效应。 展开更多
关键词 益肺清化颗粒 人脐静脉内皮细胞 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体 细胞迁移 成管能力 蛋白表达
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Promotion of microvasculature formation in alginate composite hydrogels by an immobilized peptide GYIGSRG 被引量:1
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作者 GUO Lei WANG Wei +3 位作者 CHEN ZhiPing ZHOU Rong LIU Yuan YUAN Zhi 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2012年第9期1781-1787,共7页
The ability to create artificial thick tissues is a major tissue engineering problem, requiring the formation of a suitable vascular supply. In this work we examined the ability of inducing angiogenesis in a bioactive... The ability to create artificial thick tissues is a major tissue engineering problem, requiring the formation of a suitable vascular supply. In this work we examined the ability of inducing angiogenesis in a bioactive hydrogel. GYIGSRG (NH2-Gly-Tyr-Ile- Gly-Ser-Arg-Gly-COOH, GG) has been conjugated to sodium alginate (ALG) to synthesize a biological active biomaterial ALG-GG. The product was characterized by IH NMR, FT-IR and elemental analysis. A series of CaCO3/ALG-GG composite hydrogels were prepared by crosslinking ALG-GG with D-glucono-8-1actone/calcium carbonate (GDL/CaCO3) in different molar ratios. The mechanical strength and swelling ratio of the composite hydrogels were studied. The results revealed that both of them can be regulated under different preparation conditions. Then, CaCO3/ALG-GG composite hydrogel was im- planted in vivo to study the ability to induce angiogenesis. The results demonstrated that ALG-GG composited hydrogel can induce angiogenesis significantly compared with non-modified ALG group, and it may be valuable in the development of thick tissue engineering scaffold. 展开更多
关键词 GYIGSRG alginate composite hydrogel ANGIOGENESIS tissue engineering
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A new pseudo rubrene analogue with excellent film forming ability
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作者 ZHANG XiaoTao MENG Qing +3 位作者 HE YuDong WANG ChengLiang DONG HuanLi HU WenPing 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2011年第4期631-635,共5页
A novel pseudo rubrene analogue,6,11-di(thiophen-2-yl)-tetracene-5,12-dione (DTTDO) was synthesized,in which two thienyl groups and two carbonyl groups replacing four phenyl groups in the rubrene molecule were connect... A novel pseudo rubrene analogue,6,11-di(thiophen-2-yl)-tetracene-5,12-dione (DTTDO) was synthesized,in which two thienyl groups and two carbonyl groups replacing four phenyl groups in the rubrene molecule were connected to the backbone of tetracene.This compound was characterized by single crystal X-ray structure analysis,thermogravimetric analysis,absorption spectra and electrochemical measurements.Unlike rubrene,DTTDO exhibited excellent film forming ability by normal vacuum deposition,indicating its promising applications in organic thin film transistors. 展开更多
关键词 DTTDO thin films organic field-effect transistors
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