成纤维细胞生长因子8调控颅面部发育和畸形的研究进展

成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)是一种分泌型多肽,在多种组织器官的发育中扮演着重要角色。研究发现,FGF8可以通过激活丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路调节颅神经嵴细胞的分化,通过调节靶基因的表达影响下颌弓极性的建立以及颅面部的对称性发育。唇腭裂、纤毛病、巨口畸形以及无颌畸形是四种累及颅面部的发育畸形,严重影响患者的生存质量。由基因突变、蛋白构象或表达异常引起的FGF8信号异常与颅面部畸形的发生密切相关,但其中的分子机制和信号通路尚未完全阐明。颅面部发育是由多种信号分子介导的复杂过程,未来需深入探索各种信号分子在颅面部发育和畸形中的作用,为预防和治疗这些颅面部畸形提供新的角度和视野。

音速波状蛋白与成纤维细胞生长因子-8联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元

目的探讨音速波状蛋白(SHH)与成纤维细胞生长因子-8(FGF-8)促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向分化为多巴胺(DA)能神经元的作用。方法体外分离、扩增和鉴定大鼠BMSCs。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后,SHH与FGF-8联合诱导大鼠BMSCs向DA能神经元分化12d,免疫细胞化学和免疫荧光法检测神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)、囊泡单胺转运体(VMAT2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、细胞周期蛋白(Cyclin)B1的表达。结果诱导后大鼠BMSCs能分化为具有典型神经元形态的细胞,PCNA、CDK2、CyclinB1表达降低,高表达Nestin、NSE、TH和VMAT2,低表达GFAP。诱导后大鼠BMSCs与对照组BMSCs的TH阳性率分别为(46.7±3.3)%和(3.6±2.2)%(P<0.01)。结论 SHH与FGF-8可以在体外诱导大鼠BMSCs定向分化为DA能神经元样细胞。

重组人成纤维细胞生长因子-8a在大肠杆菌中的可溶性表达

通过低温诱导,成功实现了重组人成纤维细胞生长因子-8a蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达.进一步研究了温度、IPTG浓度、诱导时长、诱导时期(OD600)、培养基类型这5个因素对重组人成纤维细胞生长因子-8a蛋白可溶性表达的影响,确定了可溶性表达最优化条件.优化表达条件后实现可溶性表达率大于30%.

重组大肠杆菌产人成纤维细胞生长因子8a工业化发酵工艺优化

目的:探究重组大肠杆菌产人成纤维细胞生长因子8a的工厂化生产发酵工艺条件。方法:通过摇瓶和50L发酵罐对hFGF8a重组菌的发酵培养基以及条件进行优化。结果:工业化50L发酵罐培养,接种量为10%,最优的培养基为NaCl1.0%、酵母提取物0.5%、胰化蛋白胨1.0%,当OD600达到0.8,加入诱导剂,转速200r/min,通气量20%,温度28℃,pH7.2,发酵培养16h后,可获得发酵重组人FGF8a约80mg/L。结论:此工艺提高了hFGF8a的生产量,简化了工业发酵操作步骤,降低成本,为下游开发hFGF8a产品提供原料供给。

人成纤维细胞生长因子8a在大肠杆菌中的表达研究

目的 :研究人成纤维细胞生长因子8(FGF8)在大肠杆菌中的表达。方法 :利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人FGF8a亚型蛋白,利用亲和色谱和凝胶过滤技术对包涵体中的重组人FGF8a进行纯化,通过柱在位复性方式对重组人FGF8a进行复性。结果:柱在位复性的方法能很好的对人FGF8a进行复性,纯度达到电泳纯。纯化后的FGF8a蛋白能刺激NIH3T3细胞增殖,表明具有生理功能。

重组人成纤维细胞生长因子8b原核表达载体的构建和纯化研究

成纤维细胞生长因子8b(fibroblast growth factor,FGF8b)在生长因子中与内分泌癌的发生和发展相关联,是一个有潜在临床应用价值的候选分子,为了满足重组人FGF8b的研发需要,论文采用分子克隆的方法构建了以包涵体形式表达FGF8b的重组大肠杆菌,并初步摸索出包涵体蛋白的纯化和复性工艺条件,通过Western blot和MTT法鉴定了FGF8b的生物化学特征和促增殖活性,表明利用包涵体复性技术初步得到了具有活性的蛋白,为后续研发进程奠定了基础。

组织特异性启动子介导的反义FGF8b RNA对前列腺癌细胞生长增殖能力的影响

利用启动子的组织特异性和治疗基因组织特异表达的特点 ,设计出前列腺癌靶向基因治疗的新方案 .利用DNA重组技术将前列腺组织特异性启动子 (probasin基因启动子 )和在前列腺癌细胞中高表达成纤维细胞生长因子 (FGF) 8b反义cDNA克隆到逆转录病毒载体pSIR中构建成重组体PB 反义FGF8b pSIR .经转染包装细胞PT 6 7后将产生的复制缺陷型逆转录病毒体外感染前列腺癌细胞系PC 3M ,体外检测其生长增殖和侵袭转移能力的变化 .结果表明 ,与对照组相比 ,前列腺癌细胞感染产生反义FGF8bRNA的逆转录病毒后生长速度减慢 ,集落形成能力下降 ,体外侵袭转移能力降低 (P <0 0 1) .体外试验表明 ,前列腺组织特异性启动子介导的反义FGF8bRNA可有效降低前列腺癌细胞的体外生长增殖和转移能力 ,这为体内靶向前列腺癌基因治疗奠定了可靠的基础 .

成纤维细胞生长因子8(FGF8)研究进展

成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)是成纤维细胞生长因子(FGFs)家族的成员之一。其在人胚胎时期多种组织内进行表达,对各种器官的形成中起着重要的作用。在正常成人体内,FGF8的表达水平受到严格的限制,然而在某些癌细胞或炎症部位中大量表达,特别是在激素类癌症的发生和发展中起着重要的作用。因此应用FGF8抗体治疗激素类癌症,为临床提供了新的治疗途径。

低硒条件下T-2毒素对大鼠关节软骨及骨髓成纤维细胞生长因子8和成纤维细胞生长因子受体3表达的影响

目的了解低硒条件下T-2毒素对大鼠关节软骨及软骨下骨髓成纤维细胞生长因子8(FGF8)和成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)表达的影响,探讨其在大骨节病(KBD)软骨深层损伤和继发性并发症中的作用机制.方法选取24只健康雄性SD大鼠(体质量为60~80 g),采用随机数字表法分为常规饲料组(硒含量101.5μg/kg)和低硒饲料组(硒含量1.1μg/kg),每组12只.饲养30 d后,将常规饲料组分为对照组和T-2毒素组(100μg·kg-1·d-1),低硒饲料组分为低硒组和低硒+T-2毒素组,每组6只.继续饲养30 d处死大鼠,取膝关节软骨附带松质骨,HE染色观察膝关节软骨病理学改变;免疫组化法检测膝关节软骨及软骨下骨髓FGF8和FGFR3表达情况,计算关节软骨FGF8和FGFR3阳性表达率,并通过Image-Pro Plus 6.0软件测定软骨下骨髓FGF8和FGFR3阳性表达积分光密度(IOD)值.结果光镜下,低硒+T-2毒素组软骨细胞稀疏,关节软骨深层和中层可见空的软骨细胞囊增多,软骨细胞死亡成为红染的细胞影子,深层区域内细胞外基质降解而淡染,成为坏死无结构区,附近可见增生的肉芽组织.低硒+T-2毒素组大鼠关节软骨FGF8阳性表达率[(88.61±10.97)%]高于对照、低硒、T-2毒素组[(10.35±2.48)%、(19.26±3.08)%、(58.89±9.29)%,P均<0.05],软骨下骨髓FGF8阳性表达IOD值[(16.73±1.72)×106]高于对照、低硒、T-2毒素组[(1.20±0.41)×106、(4.33±0.97)×106、(12.80±1.12)×106,P均<0.05].低硒+T-2毒素组大鼠关节软骨FGFR3阳性表达率[(89.76±8.59)%]高于对照、低硒、T-2毒素组[(13.18±2.25)%、(21.15±2.33)%、(32.55±6.72)%,P均<0.05],软骨下骨髓FGFR3阳性表达IOD值[(16.50±5.36)×106]高于对照、低硒、T-2毒素组[(7.58±1.02)×106、(10.73±7.13)×106、(9.83±5.63)×106,P均<0.05].结论在低硒条件下T-2毒素改变了大鼠关节软骨深层及软骨下骨髓FGF8和FGFR3的表达,FGF8和FGFR3的高表达可能参与KBD继发性改变的发生和发展.

FGF8辅助牙源性上皮诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞

目的:研究成纤维细胞生长因子8(FGF8)对成人牙髓干细胞(hDPSCs)定向分化为成牙本质细胞及牙髓组织的影响。方法:首先分离、克隆培养hDPSCs,通过流式细胞术检测细胞表面标志物鉴定hDPSCs;矿化液中添加50μg/L的FGF8诱导hDPSCs分化,通过real-time PCR检测分化后的细胞中牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)和核心结合因子α1(Cbfa-1)在mRNA水平的表达;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8与hDPSCs细胞团重组,再将组织块种植于裸鼠肾囊膜下培养,通过DNA原位杂交鉴定成牙本质细胞及牙髓细胞的来源。结果:成功分离培养hDPSCs,其表面标志物CD29和CD90呈阳性表达;经FGF8诱导的hDPSCs形成较明显的矿化结节,并且牙本质特异性蛋白DSPP、BSP及Cbfa-1表达量上调;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8可以诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞。结论:FGF8能够辅助牙源性上皮定向诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞,并形成牙本质及牙髓腔结构。

成纤维细胞生长因子8调控骨发育和稳态的研究进展

骨骼正常发育和稳态维持是人体正常行使功能的重要前提,如果出现骨骼发育畸形或者稳态紊乱,如颅缝早闭、腭裂、大骨节病和骨关节炎等,对患者个人的生活,甚至家庭、社会都造成重大影响。成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)在生物体整个生命历程中发挥着许多功能。FGF8的表达异常可能会导致骨骼稳态紊乱和发育畸形。研究表明FGF8在骨骼发育中发挥重要作用,并有可能作为靶标发挥治疗功能。本综述针对FGF8在多种骨骼异常疾病中的作用进行总结,以期为今后相关疾病的防治开拓新的视野。

成纤维细胞生长因子研究进展

成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)是成纤维细胞生长因子家族的成员之一,是动物组织器官发育过程中重要的分泌性调控因子。在胚胎发育的早期,FGF8广泛表达。它可以介导胚胎期的上皮和间充质的转化,在原肠的形成,早期器官如前后脑、咽、心脏、生殖器官和指等的形成和分化中都起到关键性的作用。本文就FGF8在器官发育中的作用及其研究进行概述。

成纤维细胞生长因子8对小鼠精子生成影响的机制研究

目的探讨成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8, FGF8)过表达对雄性FVB/N小鼠精子生成的影响及可能机制。方法构建8只FGF8过表达雄性FVB/N小鼠,于造模后6、11个月各处死4只;10只野生型雄性FVB/N小鼠于造模后6、11个月各处死5只。取睾丸和附睾组织,观察大体形态;应用血细胞计数板计数精子数量,计算FGF8过表达小鼠精子数量占野生型小鼠精子数量的百分比;行HE染色观察睾丸及附睾组织学形态;采用免疫组织化学法检测睾丸组织FGF8、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)表达。取对数生长期小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞,随机分为FGF8组(DMEM/F12培养基+25 nmol/L FGF8)、FGFRi组(DMEM/F12培养基+25 nmol/L FGF8+10 nmol/L FGFRi)、对照组(DMEM/F12培养基),处理48 h,采用实时荧光定量PCR法检测MMP-2 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测MMP-2蛋白相对表达量。结果 FGF8过表达6月龄小鼠精子数量为野生型小鼠的67.5%,11月龄小鼠精子数量为野生型小鼠的25.0%。FGF8过表达6、11月龄小鼠睾丸较野生型小鼠缩小,附睾较野生型小鼠增大。野生型6、11月龄小鼠睾丸组织生精小管上皮细胞排列无明显异常;FGF8过表达6、11月龄小鼠睾丸组织生精小管上皮细胞排列紊乱,退化明显,连续性受损,支持细胞上精子细胞或精子附着明显减少,附睾组织中精子明显减少,且11月龄小鼠较6月龄小鼠睾丸组织生精小管上皮细胞退化更为明显、附睾组织中精子数量明显减少。FGF8过表达6、11月龄小鼠睾丸组织FGF8表达的免疫组织化学评分[(286.3±12.5)、(292.0±2.5)分]、MMP-2表达的免疫组织化学评分[(283.8±18.6)、(288.9±13.5)分]均高于野生型小鼠[FGF8表达的免疫组织化学评分(101.2±11.2)、(114.0±9.6)分,MMP-2表达的免疫组织化学评分(121.0±18.8)、(121.0±8.9)分](P<0.05)。FGF8组MMP-2 mRNA及蛋白相对表达量(2.70±0.75、1.11±0.11)均高于对照组(0.90±0.10、0.89±0.08)和FGFRi组(0.53±0.21、0.66±0.04)(P<0.05),对照组MMP-2 mRNA及蛋白相对表达量与FGFRi组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 FGF8过表达影响小鼠生精过程,FGF8可能通过上调MMP-2表达使精子生成减少。

CHIR-99021与FGF8协同诱导人表皮干细胞牙向分化

人表皮干细胞(human keratinocyte stem cells,hKSCs)可作为上皮源性的成体干细胞应用于牙齿再生,但是其诱导效率较低.本研究利用小分子化合物CHIR-99021提高hKSCs的Wnt/β-catenin信号活性,再与具有诱导成牙潜能的小鼠牙胚间充质重组,构建嵌合体,并移植裸鼠肾囊膜下培养20 d.将嵌合体组织切片,并利用组织染色和免疫组化等方法鉴定牙齿结构.结果显示,经FGF8诱导处理的hKSCs与小鼠牙胚间充质构成的嵌合体的成牙率为27.80%,其中成釉率仅为40.00%;经CHIR-99021诱导处理的hKSCs与小鼠牙胚间充质构成的嵌合体的成牙率仅为18.20%,其中成釉率高达100%;而CHIR-99021与FGF8协同作用,则进一步提高嵌合体成牙率至40.00%,其中成釉率也达75.00%.进一步的研究发现,经CHIR-99021处理后,hKSCs的Wnt/β-catenin信号活性明显提高,同时FGF8的表达水平也显著上调.以上结果表明,CHIR-99021可通过上调Wnt/β-catenin信号活性水平,同时促进FGF8表达,与FGF8协同,高效诱导hKSCs分化为具有分泌釉质功能的成釉质细胞.研究结果对利用hKSCs作为上皮来源的成体细胞应用于人类牙齿再生的研究具有重要意义.

FGF8b调控前列腺癌细胞上皮间质转化的分子机制

目的:探讨成纤维细胞生长因子8b(fibroblast growth factor 8b,FGF8b)促进前列腺癌DU145细胞上皮间质转化的分子机制。方法:先选取3组细胞,分别为空白对照组(DU145细胞)、阴性对照组[(DU145细胞转染空白质粒(简称pcDNA3.1/DU145)]和实验组[DU145细胞转染FGF8b(简称FGF8b/DU145)]。采用Western印迹检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路活性,然后将FGF8b/DU145细胞及DU145细胞在PD98059(ERK激酶抑制剂)作用下分为4组:A组为2%胎牛血清(FBS)处理的FGF8b/DU145细胞;B组为2%FBS+PD98059(50μmol/L)处理的FGF8b/DU145细胞;C组为2%FBS处理的DU145细胞;D组为2%FBS+PD98059(50μmol/L)处理的DU145细胞,培养观察细胞形态学的变化,最后Western印迹和Transwell小室检测各组细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的变化以及细胞的迁移能力改变。结果:实验组ERK1/2活性明显高于空白对照组和阴性对照组。给予PD98059后,B组与未给予PD98059组的A组相比,上皮细胞标志物上皮钙黏素蛋白表达量明显上调(P<0.05);间质标志物波形蛋白表达量明显下调(P<0.05)。细胞迁移试验结果提示:在给予PD98059后,B组FGF8b/DU145细胞的迁移能力与A组相比明显减弱。结论:FGF8b调控前列腺癌细胞DU145发生上皮-间质转化,可能由ERK激酶通路介导,MAPK激酶1作为该信号通路的关键因子之一,可能是干预前列腺侵袭转移的有效靶点。

癌蛋白LRP6调节FGF8信号对肺癌细胞增殖的影响研究

目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)对肺癌细胞株酸性成纤维细胞生长因子8(FGF8)信号以及细胞增殖、克隆形成能力的影响。方法采用Western blot检测肺癌细胞中LRP6、FGF8和Cyclin D1蛋白的表达水平;应用si RNA沉默LRP6表达,q RT-PCR法检测其m RNA的表达;噻唑蓝(MTT)法检测肺癌细胞的增殖能力;克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力。结果 LRP6在肺癌细胞株中普遍呈高表达,沉默LRP6表达可抑制A549细胞的增殖和克隆形成能力,并可下调肺癌细胞中FGF8的表达。结论沉默癌蛋白LRP6可以通过阻断FGF8信号转导通路抑制肺癌细胞的增殖,因此,LRP6可能是临床诊断和治疗肺癌的潜在分子靶标。

FGF8在脊椎动物早期胚胎发育中的调控作用

成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)是成纤维细胞生长因子家族的成员之一,是一种组织发育过程中的重要分泌性调控信号分子,参与脊椎动物的多种组织器官的发生与发育。早期胚胎细胞通过表达FGF8在组织和器官发育、血管发生、血细胞生成、附肢发生和伤口愈合等方面发挥着重要作用。FGF8不但可以在细胞外通过胞内信号通路,而且也可以进入细胞内部发挥生物学功能。本文就FGF8在脊椎动物神经系统、内脏器官、肢体发育及不对称发育等组织、器官发育中的调控作用予以阐述。

8p11骨髓增殖综合征的研究现状

8p11骨髓增殖综合征(8p11 myeloproliferative syndrome,EMS)是与定位于髓系和淋巴系细胞8号染色体短臂(8p11)的成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因易位相关的侵袭性肿瘤。EMS以外周血白细胞计数明显增高、骨髓中髓系增生、嗜酸细胞增多和淋巴母细胞淋巴瘤/白血病为特征。EMS短期内将进展为急性白血病。EMS预后差,目前只有异基因造血干细胞移植能有效控制该病。在分子水平,所有病例均涉及8p11的FGFR1基因易位,新融合蛋白通过诱导FGFR1基因二聚体化,组成性激活酪氨酸激酶活性,导致细胞增殖及恶性转化。迄今,已鉴定出的与FGFR1形成融合蛋白的伙伴基因有14例(包括13例易位与1例插入),现就其分子生物学特征、发病机制和治疗等的研究现状作一综述。

前列腺癌靶向FGF8分子探针99mTc-HSQAAVP的制备及生物活性研究

目的探讨99mTc标记多肽HSQAAVP的最佳条件、研究其生物学活性、体外稳定性及在正常SD大鼠体内的生物学分布。方法应用薄层层析技术(thin layer chromatography,TLC)检测标记产物的放射化学纯度。采用直接标记法对HSQAAVP进行99mTc标记,应用正交叉实验筛选最佳标记条件。用MTT实验法检测99mTc-HSQAAVP对人前列腺癌细胞系PC-3细胞的增殖抑制率,判定99mTc-HSQAAVP的生物学活性。将99mTc-HSQAAVP尾静脉注入正常SD大鼠体内,观察不同脏器内99mTc-HSQAAVP的分布。结果最佳标记条件为室温25℃,在50μL 0.01 mol·L-1、pH7.4的PBS缓冲液中,依次加入HSQAAVP 50μg、氯化亚锡(SnCl2)溶液(1 mg·L-1)10μL、99mTc 74.0Mbq(2mCi),振荡5 min,终止反应。99mTc-HSQAAVP的放射化学纯度为(96.79±1.54)%。其在不同温度的生理盐水中孵育12 h内后放射化学纯度均在95%以上,在人新鲜血清中孵育12 h内的放射化学纯度在85%以上。99mTc-HSQAAVP和HSQAAVP对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制率差异无统计学意义(P均>0.05)。在正常SD大鼠体内,99mTc-HSQAAVP摄取较高的器官依次是脾脏,肝脏,肺,肾脏,膀胱,血液,股骨。肾脏的每克组织的百分注射剂量率(percentage activity of injection dose per gram of tissue,%/ID/g)随时间延长逐渐增高,其余脏器几乎接近本底值。结论靶向成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)分子探针99mTc-HSQAAVP的标记方法简单易行,标记率高,体外稳定性较好。多肽HSQAAVP经99mTc标记后生物活性未发生改变。

卵巢癌组织中FGF8b表达与EMT的关系及临床意义

目的探讨人成纤维细胞生长因子-8b(FGF8b)在卵巢癌组织中的表达与上皮-间质转化(EMT)的关系及临床意义。方法收集2014年1月至2014年12月广州中医药大学顺德医院病理科保存的84例卵巢癌和84例卵巢良性肿瘤的组织蜡块。采用免疫组化SP法检测FGF8b、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和N-钙粘蛋白(N-cadherin)的表达。Spearman相关性检验分析FGF8b与E-cadherin、Vimentin和N-cadherin蛋白表达的关系。分析FGF8b表达与卵巢癌临床病理特征的关系,Kaplan-meire法绘制生存曲线,Cox风险比例回归模型分析影响卵巢癌总生存的预后因素。结果卵巢癌组织中FGF8b、Vimentin和N-cadherin蛋白阳性表达率高于卵巢良性肿瘤组织(P<0. 05),而E-cadherin蛋白阳性表达率低于卵巢良性肿瘤组织(P<0. 05)。卵巢癌中FGF8b与E-cadherin蛋白呈负相关(r=-0. 288,P=0. 008),与Vimentin蛋白表达呈正相关(r=0. 262,P=0. 016)。FGF8b表达与淋巴结转移、FIGO分期、病理分型和血清CA125表达有关(P<0. 05)。FGF8b阳性表达患者的5年生存率为40. 38%(21/52),FGF8b阴性表达患者的5年生存率为62. 5%(20/32),差异有统计学意义(P<0. 05)。单因素Cox风险比例回归分析,FGF8b表达、肿瘤直径、组织分级、淋巴结转移、FIGO分期、E-cadherin表达是影响患者预后的因素。多因素Cox风险比例回归分析,肿瘤直径、淋巴结转移、FIGO分期是患者预后的独立影响因素。结论 FGF8b在卵巢癌组织中呈异常高表达,且与卵巢癌细胞EMT表型有关,在评估患者预后方面具有一定的意义。