肺癌中成纤维细胞特异蛋白-1的表达及其与预后的关系

目的探讨肺癌中成纤维细胞特异蛋白-1（S100A4）的表达及其与患者生存率的关系。方法采用免疫组化法检测S100A4蛋白在128例肺癌患者中的表达。结果128例肺癌患者中S100A4蛋白表达阳性者70例，阳性率为54．7％，S100A4蛋白的表达与肺癌患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移及预后明显相关（P〈0．05），与组织学类型、性别、TNM分期无关（P〉0．05）。结论S100A4与肺癌的侵袭和转移有密切关系，可以作为评估肺癌患者预后的重要指标。

成纤维细胞特异蛋白-1在肺癌中的表达及其临床生物学意义

目的研究成纤维细胞特异蛋白-1(S100A4)在人肺癌中的表达及其临床生物学意义,探讨其在肺癌侵袭和转移中的作用。方法采用S-P免疫组化法检测50例肺癌及6例正常肺组织中S100A4的表达水平。结果S100A4在肺癌中表达显著高于正常肺组织;非小细胞肺癌中表达明显高于小细胞肺癌(P<0.05);腺癌中表达明显高于鳞癌(P<0.05)。S100A4表达与非小细胞肺癌临床病理特征关系密切,在有淋巴结转移组与无转移组中两者均差异有统计学意义(P<0.05)。在肺癌不同临床TNM分期中,S100A4阳性表达随临床分期的升高而明显增加,各期间均差异有统计学意义(P<0.05)。S100A4阳性率随肺癌细胞分化程度的降低也有升高趋势,但差异无统计学意义。S100A4表达与肿瘤大小有密切的正相关关系,随肿瘤体积的增大,S100A4的阳性率升高(P<0.05)。结论S100A4与肺癌的侵袭和转移有密切的关系,可以作为评估肺癌病人预后的重要指标。

与乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-1表达上调及意义

目的探索乳腺癌间质成纤维细胞对乳腺癌作用的分子机制,研究与人乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-l(fibroblast-specific protein-1,FSP-l)的表达及对乳腺癌生长的影响。方法 Transwell方法共培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人成纤维细胞株ESF;实时RT-qPCR检测共培养的MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1mRNA水平;免疫荧光流式细胞仪检测共培养MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1蛋白表达水平;Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测MDA-MB-231细胞的增殖;免疫荧光激光共聚焦显微镜观察荷瘤裸鼠乳腺癌组织FSP-1的表达,检测FSP-1对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响。结果 MDA-MB-231细胞和ESF细胞共培养可上调ESF细胞表达FSP-1并促进MDA-MB-231细胞增殖;ESF+MDA-MB-231组MDA-MB-231细胞表达FSP-1,但在MDA-MB-231组未检测到FSP-1蛋白表达;荷瘤裸鼠MDA-MB-231细胞和ESF细胞共生长的癌组织高表达FSP-1并促进肿瘤生长。结论与人乳腺癌细胞共培养可上调人成纤维细胞FSP-1的表达并促进乳腺癌生长。

不同钙离子浓度腹膜透析液对腹膜透析患者腹膜间皮细胞的影响

目的观察不同钙离子浓度对腹膜间皮细胞增殖及间质纤维化的影响。方法选取终末期肾病患者102例,用奇偶数字法分为低钙PD4组(透析液钙浓度1.25 mmol/L)和高钙PD2组(透析液钙浓度1.75 mmol/L)。失随2例,两组实际入组者均为50例。收集第1次、1、6和12个月时无菌腹膜透析(PD)流出液,酶联免疫吸附法检测PD流出液中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)和波形蛋白(Vimentin)浓度。结果两组透析6和12个月E-cadherin表达显著下调,Vimentin和FSP1表达显著上调(均P <0.05)。PD4组透析6和12个月E-cadherin降低和Vimentin、FSP1增加的速度比PD2组慢(均P <0.05)。结论低钙透析液对腹膜间皮细胞间充质转分化具有一定的预防作用。

TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1(TGF-β1/ILK/FSP1)信号通路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组:细胞培养液加环孢素A 1 mg/L;TGF-β1干预组:阻断剂(SB431542)10μmol/L加环孢素A 1 mg/L;ILK干预组:阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L;阴性对照组:阴性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L。实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达。免疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数。结果与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表达量均显著增加(P<0.05);TGF-β1干预组经SB431542处理后,TGF-β1、ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05);经ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05)。α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较环孢素诱导组降低(P<0.05)。结论 TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程。

原代培养过程中壳聚糖衍生物对CTCF/YB-1/C-myc和p53蛋白表达的影响

成功建立了人增生性瘢痕细胞和正常皮肤成纤维细胞的原代培养,并利用热休克蛋白(HSP47)和成纤维细胞特异蛋白(FSP)标记物进行了鉴定。研究发现,经过壳聚糖衍生物处理,人增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞在培养中均出现了不同类型的蛋白表达。多功能转录因子蛋白(CTCF)在壳聚糖衍生物处理的增生性瘢痕成纤维细胞中出现表达上调;在聚糖衍生物处理的正常皮肤成纤维细胞中数量无变化。YB-1结合蛋白在经壳聚糖处理的正常皮肤成纤维细胞与人增生性瘢痕细胞中的表达几乎无异,但在未经壳聚糖处理的细胞中表达不同。C-MYC和P53蛋白在壳聚糖衍生物处理的增生性瘢痕纤维细胞中表达上调,但在正常皮肤成纤维细胞中,无论是否经过壳聚糖衍生物处理,这两种蛋白都没有表达。上述4种蛋白在人增生性瘢痕细胞和正常皮肤成纤维细胞中表现出不同的表达方式,这种新型壳聚糖衍生物可能在控制人增生性瘢痕细胞和正常皮肤成纤维细胞生长和增殖过程中起着重要作用。这些蛋白因子的表达机制目前还不是完全清楚,有待于进一步研究。

NF2/YAP信号通路通过FSP1诱导CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞铁死亡

目的研究NF2和YAP表达对CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞铁死亡的影响,探讨铁死亡的相关分子机制。方法培养CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞,通过台盼蓝染色(TBA)实验检测经半胱氨酸饥饿、铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理后细胞的死亡情况,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,分析细胞铁死亡水平。使用Western blot检测NF2和YAP在CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞中的蛋白表达情况,并用慢病毒分别进行敲除和过表达,观察细胞铁死亡水平,并采用实时定量RT-PCR和Western blot检测成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)的表达变化。结果经半胱氨酸饥饿、铁死亡诱导剂Erastin和RSL3分别处理后MDA-MB-231细胞死亡率增加,CD24^(low)细胞死亡率高于CD24^(high)细胞(t=14.548,P<0.001;t=8.310,P=0.001;t=8.600,P=0.001)。同时,TBA法结果显示,在含或不含半胱氨酸条件下,CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞的MDA含量差异有统计学意义(t=-3.920,P=0.017;t=11.566,P<0.001);与对照组(DMSO)相比,CD24^(high)和CD24^(low)细胞经铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理后MDA水平增加,其中CD24^(low)细胞的MDA含量比CD24^(high)更高(t=10.763,P=0.006;t=24.067,P<0.001)。Western blot实验结果表明,NF2与YAP在CD24^(low)和CD24^(high)细胞的蛋白含量差异有统计学意义(t=-4.331,P=0.012;t=4.219,P=0.013),CD24^(low)细胞中YAP的蛋白表达更高(t=4.219,P=0.013),而CD24^(high)细胞中NF2的蛋白表达更高(t=-4.331,P=0.012)。在CD24^(high)MDA-MB-231细胞中构建NF2敲除或(和)YAP过表达细胞株,并用实时定量RT-PCR和Western blot检测,结果显示铁死亡关键蛋白FSP1在4组间的表达差异有统计学意义(F=30.297,P<0.001)。同时,检测NF2敲除或(和)YAP过表达后CD24^(high)MDA-MB-231细胞的铁死亡情况,结果表明敲除NF2或(和)过表达YAP后加入铁死亡诱导剂Erastin均可在一定程度上促进细胞死亡(F=38.911,P<0.050),其中在NF2敲除联合YAP过表达条件下,CD24^(high)MDA-MB-231细胞死亡率最高,而在Erastin的基础上添加铁死亡抑制剂Fer-1后细胞的死亡率下降,4组间比较差异无统计学意义(F=0.256,P=0.855)。结论在CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞中敲除NF2联合过表达YAP会抑制FSP1表达,促进细胞铁死亡。

清热益气通络方对DN大鼠肾小球P-cadherin、FSP1表达的影响

[目的]通过观察清热益气通络方对糖尿病肾病大鼠肾小球P钙黏蛋白(P-cadherin)、成纤维细胞特异蛋白1(fibroblast-fpecific protein 1,FSP1)表达影响,探索该方治疗DN蛋白尿的机制。[方法]将SD大鼠随机分为正常组和糖尿病肾病造模组(采用单侧肾切除腹腔注射链脲佐菌素的方法建立大鼠糖尿病肾病模型。将造模成功的大鼠再分为模型对照组、中药组和厄贝沙坦组。干预治疗12w后处死大鼠,分别检测各组大鼠24h尿蛋白量(urine protein,UPro)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),血糖、血脂,免疫组织化学染色的方法观察肾小球P-cadherin、FSP1蛋白的表达。光镜及电镜观察肾小球结构。[结果]①与模型组比,中药组大鼠24h UPro、Ccr、BUN显著降低(P<0.01,P<0.05)。②与模型组比,中药组大鼠肾小球P-cadherin表达显著增高(P<0.01),FSP1阳性表达明显降低(P<0.01);与厄贝沙坦组比,中药组FSP1阳性表达明显降低(P<0.05)。[结论]通过上调P-cadherin蛋白表达及降低FSP1蛋白的表达,部分拮抗足细胞上皮间充质转分化可能是清热益气通络中药减轻糖尿病肾病蛋白尿排泄重要作用点之一。

新型尿液标志物在紫癜性肾炎患儿中的水平变化

目的·研究尿血管紧张素原(urinary angiotensinogen,UAGT)、尿成纤维细胞特异蛋白-1(fibroblast-specific protein-1,FSP-1)及尿凝血酶在紫癜性肾炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis,HSPN)患儿中的水平变化。方法·选取HSPN患儿(HSPN组,n=14)、过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)未合并肾脏受损患儿(HSP组,n=28)和尿检正常儿童(对照组,n=23);同时选取不同治疗阶段的HSPN患儿,包括未治疗组(n=10)、完成糖皮质激素(glucocorticoid,GC)冲击治疗组(GC组,n=9)和完成GC联合环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)序贯冲击治疗组(GC+CTX组,n=8)。收集以上患儿的一般临床资料及新鲜晨尿标本,运用试剂盒检测尿中UAGT、FSP-1及凝血酶水平,并测定尿肌酐(urinary creatinine,Ucr)用于校正。结果·HSPN组患儿UAGT/Ucr及FSP-1水平显著高于HSP组及对照组(均P<0.05);HSPN组患儿尿凝血酶水平与HSP组间差异无统计学意义,但2组水平均显著高于对照组(均P<0.05)。HSPN未治疗组患儿UAGT/Ucr水平与GC组间差异无统计学意义,但显著高于GC+CTX组(P=0.000);未治疗组尿FSP-1水平显著高于GC组(P<0.05),但与GC+CTX组间差异无统计学意义;尿凝血酶水平在HSPN患儿的3个组间差异无统计学意义。结论·UAGT/Ucr、FSP-1和凝血酶水平在HSPN患儿尿液中均明显升高,且UAGT/Ucr和FSP-1可能对患儿的疗效有一定的提示作用。

糖肾宁含药血清对高糖培养下足细胞上皮间质转分化的作用

目的:探讨糖肾宁含药血清对于高糖刺激下足细胞上皮间质转分化的影响。方法:将条件永生小鼠足细胞系分为正常对照组,高糖组,糖肾宁含药血清低、中、高剂量组,CCK-8法检测各组足细胞细胞活力,倒置显微镜观察各组足细胞细胞形态,鬼笔环肽-罗丹明染色观察各组足细胞细胞骨架变化,免疫荧光染色及Western blot法检测各组足细胞P-钙粘蛋白(P-cadherin)、成纤维细胞特异蛋白-1(FSP-1)蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,高糖组足细胞细胞活力降低(P<0.05),细胞形态变化及细胞骨架重构,P-cadherin蛋白表达下调(P<0.05),FSP-1蛋白表达上调(P<0.05);与高糖组比较,糖肾宁含药血清组足细胞细胞活力升高(P<0.05),细胞形态变化及细胞骨架重构减轻,P-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),FSP-1蛋白表达下调(P<0.05)。结论:糖肾宁含药血清可以减轻高糖刺激引起的足细胞上皮间质转分化。