核苷(酸)类似物联合聚乙二醇干扰素对慢性乙型肝炎大鼠法尼醇X受体-成纤维细胞生长因子19通路、枯否细胞极化的影响

目的 :探究核苷(酸)类似物联合聚乙二醇干扰素对慢性乙型肝炎大鼠法尼醇X受体(FXR)-成纤维细胞生长因子19(FGF19)通路、枯否细胞极化的影响。方法 :选取SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、核苷(酸)类似物(核苷酸)组、聚乙二醇干扰素(干扰素)组、联合组。除正常组外,均采用腹腔注射乙型肝炎病毒进行慢性乙型肝炎建模。建模成功后,对核苷酸组灌胃10 mg/kg拉米夫定,对干扰素组皮下注射5μg/kg聚乙二醇干扰素,对联合组给予拉米夫定联合聚乙二醇干扰素治疗,正常组、模型组同期灌胃同体积生理盐水。酶联免疫吸附法检测血清病毒,全自动生化分析仪检测肝功能,H-E染色法检测肝组织病理形态,免疫印迹法检测FXRFGF19通路蛋白表达,免疫组织化学法检测枯否细胞极化。结果 :与正常组相比,模型组血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎E抗原(HBeAg)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)含量、iNOS、CD163阳性表达率显著升高,肝组织FXR、FGF19蛋白表达显著降低。与模型组相比,核苷酸组、干扰素组、联合组血清HBsAg、HBeAg、ALT、AST、TBIL含量、iNOS、CD163阳性表达率显著降低。肝组织FXR、FGF19蛋白表达显著升高,联合组比干扰素组降低显著。结论 :核苷(酸)类似物联合聚乙二醇干扰素,可显著激活FXR-FGF19通路,并抑制枯否细胞M1极化,促进枯否细胞M2极化,对慢性乙型肝炎大鼠具有改善作用。

血管内皮生长因子受体-2、成纤维细胞生长因子受体-1血清水平变化与ICU脑室出血患者疾病转归的关联性分析

目的探究ICU脑室出血患者血清血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、成纤维细胞生长因子受体-1(FGFR-1)水平变化情况,并分析其与疾病转归的关联性。方法选取我院135例ICU脑室出血患者作为研究组,根据1∶1配对研究原则,另选同时间段内135例健康体检者作为对照组,检测并对比两组血清VEGFR-2、FGFR-1水平,并比较研究组不同预后患者的临床资料、血清VEGFR-2、FGFR-1水平,分析预后的影响因素,及血清VEGFR-2、FGFR-1与ICU脑室出血患者格拉斯哥预后量表(GOS)评分的关联性。结果研究组血清VEGFR-2水平高于对照组,血清FGFR-1水平低于对照组(P<0.05);研究组预后不良患者出血量多于预后良好患者,发病至治疗时间长于预后良好患者,血清VEGFR-2水平高于预后良好患者,血清FGFR-1水平低于预后良好患者(P<0.05);随着出血量、发病至治疗时间、血清VEGFR-2水平增加及血清FGFR-1水平降低,ICU脑室出血患者预后为不良的风险升高(P<0.05);ICU脑室出血患者GOS评分与血清VEGFR-2水平呈负相关,与血清FGFR-1水平呈正相关(P<0.05)。结论血清VEGFR-2、FGFR-1水平变化均为ICU脑室出血患者预后的影响因素,与疾病转归存在显著关联性。

成纤维细胞生长因子受体2在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的:研究成纤维细胞生长因子受体2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC;or kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)中的表达情况,对FGFR2的表达与ccRCC临床病理特征及预后关系进行分析,并研究FGFR2的表达与其他分子之间作用关系,探讨其在ccRCC发生发展中的作用。方法:从肿瘤基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库及基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中下载ccRCC患者的基因表达及临床信息资料,进行转化及整理,并收集北京大学第一医院泌尿外科104例临床ccRCC样本及癌旁正常组织样本,进行免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC),对染色结果进行评分,从而比较ccRCC和癌旁正常组织中FGFR2的蛋白表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantify real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测正常的肾上皮细胞系(293)和肾细胞癌细胞系(786-O、769-P、OSRC-2、Caki-1、ACHN、A498)中FGFR2的mRNA表达水平;对数据库中的ccRCC患者进行进一步分析,研究FGFR2表达与ccRCC患者临床病理特征(包括TNM分期和病理分级)以及生存预后的关系,分析ccRCC患者中FGFR2表达与B细胞、T细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞及中性粒细胞浸润的关系,并使用生物交互数据集通用存储库(Biological General Repository for Interactionh Datasets,BioGRID)构建蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,利用网络研究与FGFR2蛋白相互作用的分子。结果:在TCGA数据库中,相较于正常组织样本,FGFR2在ccRCC组织样本中表达下调,在GEO数据库中的表达也呈现出这一差异,并且FGFR2在ccRCC临床样本及ccRCC细胞系中表达下调,此外,FGFR2表达水平与ccRCC高分级分期相关,与ccRCC患者较好的预后相关,并且FGFR2表达与B细胞、T细胞、NK细胞及中性粒细胞浸润无明显相关关系。PPI网络显示FGFR2蛋白与某些分子间存在相互作用。结论:本研究揭示了FGFR2与ccRCC发生发展的潜在作用关系,提示FGFR2可能作为ccRCC患者的预后标志物和潜在治疗靶点。

碱性成纤维细胞生长因子及其受体在胃癌及癌前病变中的表达及其意义

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及成纤维细胞生长因子受体-2(fibroblast growth factor receptor-2,FGFR-2)在胃癌组织中的表达及其意义。方法应用免疫组化SP法检测100例胃癌及癌旁组织,bFGF和FGFR-2的表达及两者之间的关系。结果胃癌中bFGF和FGFR-2表达明显高于癌旁组织及正常组织(P<0.01),胃癌组织中bFGF、FGFR-2表达的水平与临床病理分期有关,中晚期胃癌bFGF及FGFR-2阳性率明显高于早期胃癌(P<0.05),胃癌组织中bFGF与FGFR-2表达呈正相关,随bFGF表达的增高FGFR-2表达亦增高(P<0.05)。结论 bFGF和FGFR-2在胃癌组织中表达明显增高可能与肿瘤的发生发展有关。

芍药苷调节SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路对过氧化氢诱导皮肤成纤维细胞氧化应激损伤的影响

目的:探讨芍药苷(PF)调节沉默信息调节因子2同系物1(SIRT1)/氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂-1α(PGC-1α)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导皮肤成纤维细胞(HSF)氧化应激损伤的影响。方法:以HSF细胞为研究对象,将其分为Control组、H_(2)O_(2)组、L-PF、M-PF、H-PF组、PF+EX527组;CCK-8检测HSF细胞增殖;β-半乳糖苷酶染色法检测HSF细胞衰老;流式细胞仪检测HSF细胞凋亡;ELISA法检测HSF细胞中ROS、SOD、GSH、MDA的表达;WB检测HSF细胞中SIRT1、PGC-1α、Nrf2蛋白表达。结果:H_(2)O_(2)组HSF细胞的存活率、SOD、GSH、SIRT1、PGC-1α、Nrf2表达低于Control组,衰老细胞比例、凋亡率、ROS、MDA表达高于Control组(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,L-PF组、M-PF组、H-PF组存活率、SOD、GSH、SIRT1、PGC-1α、Nrf2表达升高,衰老细胞比例、凋亡率、ROS、MDA表达降低(P<0.05);PF+EX527组存活率、SOD、GSH、SIRT1、PGC-1α、Nrf2表达低于H-PF组,衰老细胞比例、凋亡率、ROS、MDA表达高于H-PF组(P<0.05)。结论:PF可以抑制H_(2)O_(2)诱导的HSF细胞氧化应激损伤,其机制可能是激活SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路实现的。

PPAR-γ通过活化PTEN抑制肾间质成纤维细胞MMP2的活化

目的探讨激活的PPAR-γ是否通过活化PTEN抑制血小板源性生长因子(PDGF)刺激的肾间质成纤维细胞MMP2活化,从而介导肾间质纤维化的发生。方法以原代分离培养的小鼠肾间质成纤维细胞为研究对象,以肾间质纤维化的主要刺激因子PDGF-AA刺激细胞。于PDGF-AA刺激细胞前,分别予以罗格列酮激活PPAR-γ,PI3K、PTEN、PPAR-γ特异性抑制剂LY294002、bpV(Pic)、GW9662预处理细胞,检测AKT、PTEN、PPAR-γ、MMP2的活化水平。结果成功分离并培养小鼠肾间质成纤维细胞,并证实PDGF-AA可剂量依赖性激活MMP2,而对MMP9、TIMPs无影响。特异性抑制PI3K/AKT信号通路或激活PPAR-γ显著抑制PDGF-AA刺激的AKT、MMP2活性;抑制PTEN可逆转PPAR-γ激活对PDGF-AA诱导的AKT磷酸化及MMP2活性的影响。结论 PI3K/AKT信号通路特异性介导PDGF-AA诱导的肾间质成纤维细胞MMP2的活化;激活的PPAR-γ通过活化PTEN抑制PI3K/AKT信号通路进而抑制MMP2活化。

lncRNA-BBOX1-2通过调控成纤维细胞生长因子受体1促进胃癌的发生和发展

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)BBOX1-2通过调控成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)对胃癌的发生发展机制的影响。方法回顾性选取2017年4月至2019年1月于上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院接受胃癌根治术30例病人肿瘤组织及癌旁相应正常组织作为研究对象,采用实时定量PCT(real-time PCR,RT-PCR)检测lncRNA-BBOX1-2和FGFR1表达;si-linc-BBOX1-2转染SGC-7901细胞后,通过蛋白质印迹法/细胞存活率分析(MTT)、细胞迁移和侵袭(Transwell)实验、细胞划痕、平板克隆一系列生物学功能实验,检测肿瘤细胞生物学功能及FGFR1表达的变化。结果胃癌组织中的lncRNA-BBOX1-2(3.68±0.58比1.15±0.11)和FGFR1(4.26±0.71比1.19±0.18)表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05);si-linc-BBOX1-2转染SGC-7901细胞后,FGFR1表达下调,细胞活力、迁移、侵袭和生存能力明显下降。结论LincRNA-BBOX1-2可通过调控FGFR1的表达介导胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭,可能为胃癌的治疗提供了新的靶点和潜在的生物学标志物。

17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物家族的作用

目的观察17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞和人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物家族 (insulin receptor substrate IRS)表达的影响。探讨雌、孕激素对骨的作用机制。方法从正常骨折病人骨组织中分离正常人成骨细胞,经纯化和培养后,用Van Gieson行Ⅰ型胶原染色、钙钴法行碱性磷酸酶染色、茜素红行钙化结节染色进行成骨细胞鉴定。用半定量RT-PCR检测细胞IRS-1、- 2、-3 mRNA表达量。结果分离和培养的细胞具有正常人成骨细胞的形态,能分泌Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶并形成钙化结节。17β-雌二醇和／或孕酮均不影响人成骨细胞和MG-63细胞IRS-1mRNA 的表达(P>0．05),可诱导人成骨细胞和MG-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调(P<0．05),IRS- 3 mRNA的表达下调(P<0．05)。二者联合干预时作用明显加强(P<0．01)。结论 17β-雌二醇和孕酮均不影响IRS-1 mRNA的表达,但可使人成骨细胞和MC-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调, IRS-3mRNA的表达下调,二者联合干预具有正性协同效应。不同的IRS家族成员对同一细胞具有效应的多样性。

清肝降脂汤对体外诱导非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢和过氧化物酶体增殖物激活受体-α的调节作用研究

目的:探讨清肝降脂汤对体外诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α的调节作用。方法:取HepG2细胞株,采用油酸构建NAFLD细胞模型。将细胞分为正常对照组(无油酸建模+无药物处理)、模型对照组(有油酸建模+无药物处理)和清肝降脂汤组(有油酸建模+有药物处理)。采用CCK-8实验检测细胞活性。采用油红O染色定性定量检测清肝降脂汤对细胞内脂质的影响,定量计算脂质含量的抑制率。同时,测定细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和游离脂肪酸(FFA)含量;并采用聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测脂肪代谢标志物PPAR-α和成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的表达水平。结果:与正常对照组相比,模型对照组的HepG2细胞活性显著增高,脂质含量显著增高,MDA、SOD、TG、TC和FFA含量显著增高,而PPAR-α和FGF21表达水平显著降低(均P<0.05);而与模型对照组相比,清肝降脂汤组的HepG2细胞活性显著降低,脂质含量显著降低,MDA、SOD、TG、TC和FFA含量显著降低,而PPAR-α和FGF21表达水平显著增高(均P<0.05)。结论:清肝降脂汤有助于降低HepG2细胞活性、脂质含量以及MDA、SOD、TG、TC和FFA含量,并促进PPAR-α和FGF21表达,进而调节脂质代谢,抑制NAFLD发展进程。

感觉神经肽P物质对肉芽组织成纤维细胞表达表皮生长因子与成纤维细胞生长因子-2及受体的调控作用

目的 从基因水平探讨感觉神经肽SP对肉芽组织成纤维细胞表达表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子 2 (FGF 2 )及受体的调控作用。方法 由在体和离体实验两部分组成。在体实验采用Wistar大鼠 5 0只 ,随机分为辣椒素组和对照组。辣椒素组大鼠皮下注射辣椒素 5 0mg/kg毁损感觉神经 ,1周后行皮肤全层切割伤 ,采用免疫组化结合图像分析 ,观察伤后 3～ 12d伤口肉芽组织内神经肽P物质 (SP)含量。采用原位杂交方法观察EGF、表皮生长因子受体 (EGFR)、FGF 2、成纤维细胞生长因子受体 1(FGFR 1)的基因表达 ,对照组除不化学毁损感觉神经外 ,余处理同辣椒素组。离体实验采用RT PCR技术观察不同浓度 (10 -9～ 10 -5mol/L)SP作用于培养肉芽组织成纤维细胞后 ,上述生长因子及受体的表达。结果 在体实验示 ,肉芽组织SP免疫阳性染色与EGF、FGF 2及其受体表达有关 ,化学毁损感觉神经 ,肉芽组织SP免疫阳性染色减弱 ,上述因子及受体的表达也明显抑制。离体实验发现 ,上调培养肉芽组织成纤维细胞内源性EGF和EGFRmRNA表达的SP浓度为 10 -8～10 -6mol/L和 10 -6～ 10 -5mol/L ,上调FGF 2和FGFR 1mRNA表达的SP浓度分别为 10 -9～ 10 -5mol/L和 10 -6～ 10 -5mol/L。结论 伤口愈合中 ,感觉神经释放的SP参与肉芽组织成纤维?

以成纤维细胞生长因子受体1为靶点的姜黄素类似物的抗肿瘤活性研究

目的寻找以成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)为靶点,并具有良好抗肿瘤活性的小分子抑制剂。方法通过改造单羰基姜黄素类似物3,5-双(2-氟苯亚甲基)哌啶-4-酮(EF24),合成了其类似物[3,5-双(2-溴苯亚甲基)哌啶-4-酮,B6];采用FGFR1酪氨酸激酶实验验证其靶向性;MTT法检测EF24和B6对正常人肝细胞HL7702、4种肿瘤细胞(人大细胞肺癌NCl-H460、人胃癌细胞SGC-7901、人小细胞肺癌A549、人星形胶质瘤细胞株U251)增殖的影响;Western blotting法检测B6(2.5、5、10μmol/L)对NCl-H460细胞bFGF/FGFR下游信号蛋白表达的影响;Caspase-3试剂盒检测Caspase-3因子的表达。结果 EF24类似物B6可以以FGFR1为靶点,抑制NCI-H460细胞FGFR1以及下游信号蛋白丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)和细胞外调节蛋白(ERK1/2)的磷酸化,抑制肿瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡。结论成功改造并获得靶向FGFR1的EF24类似物B6,其具有良好的体外抗肿瘤活性,为寻找FGFR1抑制剂候选抗肿瘤药物提供新思路。

预混门冬胰岛素强化治疗对2型糖尿病患者血浆中成纤维细胞生长因子-21水平的影响

目的探讨预混门冬胰岛素对2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)患者血浆成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth factor-21,FGF-21)水平的影响。方法 2008年2～12月采用酶联免疫吸附试验测定44例正常人及37例采用预混门冬胰岛素治疗前后的T2DM患者的血浆FGF-21水平,分析血浆FGF-21水平与体质量指数(body mass index,BMI)、体内脂肪百分比(FAT%)、腰臀比、血脂、血糖、糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HbA1c)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)等的关系。结果治疗前T2DM组患者血浆FGF-21[(1.79±0.04)μg/L]水平明显高于正常对照组[(1.35±0.21)μg/L],差异有统计学意义(P<0.01)。T2DM组经16周预混人胰岛素类似物(BIAsp 50和BIAsp 30)治疗后FFA、HbA1c、空腹血糖、餐后2h血糖均降低(P<0.01),空腹血浆FGF-21水平降低至(1.33±0.39)μg/L,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01)。相关分析发现T2DM组患者血浆FGF-21水平与BMI呈正相关(r=0.53,P<0.01),BMI是影响T2DM患者血浆FGF-21水平的独立相关因素。结论预混人胰岛素类似物能有效改善T2DM患者代谢紊乱,同时能显著降低FGF-21水平。

抑制成纤维细胞生长因子受体2-卷曲螺旋结构域蛋白6融合基因表达在人胆管癌异种移植小鼠的作用

目的探究抑制成纤维细胞生长因子受体2-卷曲螺旋结构域蛋白6(FGFR2-CCDC6)表达在人胆管癌异种移植小鼠的抗肿瘤作用。方法选择购自美国模式培养物集存库(ATCC)的人正常肝内胆管上皮细胞HIBEC和稳定转染FGFR2-CCDC6表达质粒的人肝内胆管癌细胞系Hucct1, 分组为沉默FGFR2-CCDC6阴性对照(si-NC)组和沉默FGFR2-CCDC6(si-FGFR2-CCDC6)组。利用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测融合基因表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FGFR2、成纤维细胞生长因子2(FGF2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)蛋白表达。噻唑蓝(MTT)检测抑制FGFR2对细胞增殖的抑制作用。小鼠荷瘤模型探究抑制FGFR2表达对移植瘤体积的抑制作用。应用SPSS 21.0软件进行分析。结果 Hucct1中的FGFR2-CCDC6表达显著高于HIBEC(1.00±0.05比1.92±0.09, t=15.480, P<0.05);FGFR2、FGF2和p-ERK1/2的蛋白表达均明显高于HIBEC(FGFR2:0.54±0.03比1.29±0.05, t=20.360, FGF2:1.32±0.06比1.87±0.09, t=9.207, p-ERK1:0.84±0.05比1.54±0.07, t=14.920, p-ERK2:1.42±0.06比2.11±0.11, t=9.391, 均P<0.05)。si-FGFR2-CCDC6组的FGFR2-CCDC6的mRNA表达水平显著低于si-NC组(1.00±0.06比0.39±0.03, t=19.540, P<0.05);FGFR2、FGF2和p-ERK1/2的蛋白表达均显著低于si-NC组(FGFR2:1.32±0.05比0.77±0.04, t=13.080, FGF2:1.93±0.08比1.23±0.07, t=11.12, p-ERK1:1.48±0.07比0.73±0.06, t=15.260, p-ERK2:2.03±0.12比1.44±0.07, t=7.488, 均P<0.05);转染后24 h和48 h细胞增殖率明显低于si-NC组(24 h:0.74±0.06比0.48±0.04, t=6.245, 48 h:0.97±0.07比0.65±0.06, t=6.012, 均P<0.05)。小鼠荷瘤模型发现, si-FGFR2-CCDC6转染荷瘤组移植瘤体积明显小于si-NC参照组(598.00±50.00比476.00±39.00, F=12.530, P<0.05)。结论抑制FGFR2-CCDC6融合基因表达可抑制FGF2/FGFR2/p-ERK1/2通路的激活, 抑制细胞增殖和肿瘤生长, 进而发挥抑癌作用。

FGF-21通过上调肝脏LDL受体的表达降低血浆中LDL水平

目的成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)可降低实验动物血浆中的低密度脂蛋白(LDL)的浓度,但其作用机制尚不清楚,本实验试图通过研究FGF-21对LDLR的调节作用揭示FGF-21调节血浆LDL浓度的机制。方法向谷氨酸钠(MSG)肥胖大鼠连续注射FGF-21蛋白40d后,检测其血浆中LDL的变化,并用荧光定量PCR的方法结合免疫荧光检测FGF-21对肝脏组织中LDLR mRNA及蛋白的影响。结果 MSG肥胖鼠经FGF-21处理,血浆内的LDL降低18%,其肝脏组织中LDLR mRNA含量提高9倍;HepG2细胞内的LDLR mRNA表达量随FGF-21处理时间增加而提高,且呈剂量依赖性;流式细胞仪检测显示,经FGF-21处理后HepG2细胞表面LDLR蛋白数量增加。结论 FGF-21通过增加肝细胞的LDLR表达量从而降低血浆中LDL浓度。

bFGF及FGFR-2在胃癌组织淋巴管生成中的意义

目的检测碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)和成纤维细胞生长因子受体2(basic fibroblast growth factor receptor-2,FGFR-2)在胃癌组织中的表达,并探讨其对淋巴管生成和肿瘤生物学行为的影响。方法采用免疫组化学方法检测59例胃癌及癌旁组织b FGF、FGFR-2及D2-40表达。结果 59例胃癌组织b FGF和FGFR-2表达分别达69.5%(41/59)、64.4%(39/59),明显高于癌旁组织35.6%、33.9%(P<0.05);二者在淋巴结转移组表达高于无转移组,浸润程度越深表达越高。胃癌癌周微淋巴管密度高于正常胃组织(10.89±3.67 vs3.58±0.96),且与淋巴结转移(P<0.05)、b FGF和FGFR-2阳性表达(P<0.05)正相关。结论 b FGF和FGFR-2可能通过促进淋巴管生成参与胃癌浸润转移。

成纤维生长因子受体1通过控制微小RNA let-7b表达调节内皮细胞线粒体生源的作用研究

目的探索成纤维生长因子受体l（fihrohlast growth factor receptor1，FGFRl）在调控内皮稳态时对上游分子N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline、AcSDKP）的影响和下游微小RNAlet-7（microRNA let-7、miR let-7）的诱导作用及与内皮细胞线粒体生源的关系，以期最终研究FGFR1在内皮稳态中的调控作用。方法下调FGF／FGFRl信号通路，蛋白质印迹（Western印迹．WB）法和细胞免疫荧光（Immunofluorescence staining）技术检测线粒体融合蛋白MFN2（mitofusin-2）、OPA1（optic atrophy protein1）和分裂蛋白DRP1（dynamin-related protein-1）的表达；应用线粒体染色（MitoTraker Green）检测线粒体的生成；运用实时荧光定量核酸扩增（Real-time Quantitative PCR、qPCR）检测技术检测microRNA let-7的表达。结果FGFRl通过诱导microRNA let-7b一5p的生成促进AcSDKP维持线粒体的生源；AcSDKP修复细胞因子复合物Triple（TGF-β2、IL-1β和TNF-α）所引起microRNA let-7b-5p表达抑制与线粒体的生成密切相关；抑制microRNA let-7b-5p的表达后，AcSDKP失去促进线粒体生成的作用：上调microRNA let-7b-5p的表达后，可修复内皮细胞中因FGF／FGFRl底物FRS2（fibroblast growth factor receptor substrate）沉默所致通路缺失所致的线粒体生成障碍。结论FGFRl通过上调microRNA let-7b-5p的表达，促进线粒体的生成，从而在内皮细胞的稳态中起着十分重要的作用。

微小RNA-129-5p通过成纤维细胞生长因子2调节老年性骨质疏松性骨折中骨分化和骨稳态的功能研究

目的:探讨破骨细胞分化过程中微小RNA(miR)-129-5p的失调以及miR-129-5p在破骨细胞分化中的确切作用机制。方法:首先建立核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导鼠源单核巨噬细胞(RAW264.7)分化的破骨细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-129-5p在破骨细胞分化前后的表达差异。然后用miR-129-5p模拟物处理RANKL诱导的RAW264.7细胞,验证miR-129-5p对破骨细胞分化的影响。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验用于检测破骨细胞的增殖活性,抗酒石酸酸性磷酸酶染色确定破骨细胞数目,蛋白质印迹法检测破骨相关标志物的蛋白表达。最后,通过RT-qPCR或蛋白质印迹法分析miR-129-5p对成纤维细胞生长因子2(FGF2)表达的影响。组间统计学差异采用T-Test法检验。结果:miR-129-5p在RANKL组的表达水平低于对照组(0.405±0.007比0.984±0.031,t=24.070,P<0.01)。在功能上,上调miR-129-5p可以抑制破骨细胞的分化,CCK-8实验结果显示,miR-129-5p处理组的破骨细胞活力低于阴性对照组(1.096±0.027比0.549±0.006,t=33.670,P<0.001)。机制上,miR-129-5p对破骨细胞分化的抑制作用,可能与负调节FGF2表达有关。RT-qPCR实验结果显示,miR-129-5p处理组破骨细胞中FGF2 mRNA表达水平明显低于对照组(1.001±0.026比0.151±0.004,t=48.001,P<0.01)。此外,功能挽救实验结果表明过表达FGF2可以抵消miR-129-5p上调对破骨细胞分化的抑制作用。RT-qPCR实验结果显示,miR-129-5p mimic+OE-FGF2组破骨细胞中FGF2的水平高于miR-129-5p mimic+OE-NC组(0.973±0.059比5.108±0.018,t=86.059,P<0.001),差异均有统计学意义。结论:miR-129-5p通过负调节FGF2表达,显著抑制了破骨细胞分化。

FGF1和PD98059对成年大鼠肝细胞FGFR2表达的影响

在体外培养过程中观察生长因子FGF1和MEK特异性阻滞剂PD98059二者对原代培养的成年SD大鼠肝细胞表面与FGF1结合的胞膜受体FGFR2表达量的影响。采用两步法原位灌注取肝细胞,培养到一定时间,加FGF1和PD98059,继续培养一段时间后流式细胞仪检测细胞增殖周期比例和受体FGFR2的表达。对照组和实验组肝细胞,均大量的表达FGFR2,表达量之间没有差异,均在90%左右。FGF1和PD98059对成年SD大鼠肝细胞表面FGFR2的表达没有反馈调节及阻抑作用。

血清miR-497-5p、FGF-2在阿尔茨海默病患者中的表达及相关性分析

目的探讨miR-497-5p、人成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)患者中的表达水平、诊断价值及两者的相关性。方法收集50例首诊AD患者和37例正常受试者(对照组)的临床资料,其中将AD患者分为轻度AD组18例、中度AD组18例和重度AD组14例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-497-5p的表达水平,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测FGF-2水平,采用简易精神状态量表(mini-mental state examination,MMSE)评估AD患者的认知功能,分析miR-497-5p与MMSE、FGF-2水平的相关性。采用受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线评价miR-497-5p,FGF-2水平对AD的诊断效能。结果与对照组和轻度AD组比较,中度、重度AD组患者miR-497-5p表达水平明显升高(P<0.01),FGF-2水平明显下降(P<0.01);AD组miR-497-5p与MMSE评分、FGF-2水平呈负相关(r分别为-0.724、-0.748,P<0.01);ROC曲线分析结果显示,miR-497-5p、FGF-2及两者联合指标诊断中度、重度AD及鉴别轻度和中度,轻度和重度AD时,均有较高的曲线下面积、敏感度和特异性,两者联合指标诊断及鉴别效能最优。结论中重度AD患者血清miR-497-5p上调,FGF-2水平下调,两者联合检测对中重度AD有一定的诊断价值,并提供一定的参考。