体外压力刺激对大鼠“足三里”穴筋膜组织成纤维细胞合成释放基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1、前列腺素E_2和胰岛素样生长因子1的影响

背景:腧穴筋膜结缔组织成纤维细胞是针推治疗操作过程中的主要受力组织细胞之一,细胞生物学行为的调整对腧穴发挥治疗作用的功能关系密切。目的:通过体外实验观察压力刺激对大鼠"足三里"穴筋膜组织成纤维细胞合成释放基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1、前列腺素E2和胰岛素样生长因子1的影响。方法:体外培养大鼠"足三里"穴筋膜组织成纤维细胞,随机分为空白对照组和压力刺激组。压力刺激组对细胞实施50kPa压力刺激,每次加力2h,每8h1次,共6次;空白对照组不加压。检测细胞外培养液中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1、前列腺素E2和胰岛素样生长因子1含量的变化,并计算基质金属蛋白酶1与基质金属蛋白酶抑制剂1比值的变化。结果与结论:"足三里"穴筋膜组织成纤维细胞压力作用后,培养液中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1和前列腺素E2含量均增加(P<0.05或0.01),基质金属蛋白酶1与基质金属蛋白酶抑制剂1比值增大(P<0.05),胰岛素样生长因子1变化无显著性意义。结果证实,压力刺激对腧穴筋膜组织成纤维细胞基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1和前列腺素E2合成释放的调节,以及对基质金属蛋白酶1与基质金属蛋白酶抑制剂1比值的提高,可能是腧穴接受针灸推拿治疗后发挥"疏经通脉"作用的细胞生物力学原理之一。

成纤维细胞生长因子受体样蛋白1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其对细胞增殖和迁移能力的影响

目的检测成纤维细胞生长因子受体样蛋白1(FGFRL1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达情况,并探究其在OSCC细胞增殖和迁移中的作用。方法利用Western blot检测FGFRL1蛋白在OSCC组织、癌旁正常组织、OSCC细胞株及正常上皮细胞中的表达;通过FGFRL1小干扰RNA(siRNA)干扰HN4细胞,影响FGFRL1蛋白的表达,利用CCK-8及Ki67实验检测FGFRL1对肿瘤细胞增殖能力的影响;细胞划痕及Transwell实验检测FGFRL1对肿瘤细胞迁移能力的影响;利用Western blot检测其对上皮间充质转化(EMT)相关指标蛋白的影响。结果FGFRL1蛋白在OSCC组织中的表达量高于癌旁正常组织(t=2.820,P=0.0478);FGFRL1蛋白在OSCC细胞系中的表达量高于在HOK细胞中的表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)结果显示,FGFRL1 RNA在HOK细胞中的表达量低于在OSCC细胞系中的表达量。将FGFRL1 siRNA转染的HN4细胞作为实验组,NC siRNA处理的HN4细胞作为对照组。Ki67免疫荧光试验结果显示,实验组与对照组在48 h(P=0.4781)及72 h(P=0.3342)细胞增殖活力差异无统计学意义。细胞划痕实验结果显示,在12 h(P=0.0228)、24 h(P=0.0051)及36 h(P=0.0095)实验组细胞划痕面积百分比均比对照组小。Transwell实验结果显示,实验组在16 h(P=0.0087)及24 h(P=0.0086)细胞迁移数较对照组少。FGFRL1 siRNA干扰使得HN4细胞神经性钙黏附素蛋白和波形蛋白的表达量下降,上皮钙黏附素蛋白的表达量上升。结论FGFRL1蛋白在OSCC组织中的表达量高于癌旁正常组织,在OSCC细胞株中的表达量高于正常上皮细胞。FGFRL1基因沉默对肿瘤细胞增殖无影响,但对肿瘤细胞EMT和细胞迁移具有一定的抑制作用。

成纤维细胞生长因子受体-1与Klotho蛋白在慢性肾衰竭继发性甲状旁腺功能亢进症甲状旁腺组织中的表达

目的探讨成纤维细胞生长因子受体-1(FGFR1)与Klotho蛋白在慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)继发性甲状旁腺功能亢进症(secondary hyperparathyroidism,SHPT)甲状旁腺组织中的表达水平及其临床意义。方法利用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测30例SHPT组及6例无偿捐献的健康组术前术后血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)水平,采用化学发光酶免疫分析法检测全段甲状旁腺激素(iPTH)水平,同时取SHPT组、健康组患者的甲状旁腺组织,利用免疫组化方法检测FGFR1、Klotho蛋白表达,计算FGFR1、Klotho蛋白的积分吸光度。结果 (1)SHPT组血清FGF23、PTH水平高于健康组(P<0.05);(2)SHPT组结节性增生与弥漫性增生的甲状旁腺组织中FGFR1、klotho蛋白的表达低于健康组(P<0.05)。结论与正常甲状旁腺组织相比,CRF合并SHPT患者甲状旁腺组织中FGFR1、Klotho蛋白表达水平降低,尤其在结节性增生组织中比弥漫性增生组织中表现更加明显,提示klotho-FGFR1系统在SHPT的发病机制中起着重要作用。

胃癌组织中成纤维细胞生长因子受体样蛋白1的表达及其与术后复发转移的关系

目的探究胃癌组织中成纤维细胞生长因子受体样蛋白1(fibroblast growth factor receptor-like protein 1,FG-FRL-1)的表达及与胃癌根治术后复发转移的相关性。方法选取2016年3月至2018年6月江苏省无锡市惠山区人民医院收治的92例拟行根治术治疗的胃癌患者。对比胃癌组织和癌旁组织(距癌组织≥5cm)FGFRL-1 mRNA表达水平。随访3年(3例失访),统计胃癌根治术后复发转移情况,并依据是否发生复发转移分为复发转移组(36例)和未复发转移组(53例)。对比复发转移组和未复发转移组患者的临床资料。多因素Logistic回归分析影响胃癌患者术后复发转移发生的危险因素。绘制受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线),以曲线下面积(area under the curve,AUC)评价胃癌组织中FGFRL-1 mRNA表达水平对术后复发转移的预测价值。结果胃癌组织FGFRL-1 mRNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌根治术后3年复发转移发生率为40.45%。复发转移组临床分期Ⅲ期占比、低分化占比、肿瘤直径及癌组织中FGFRL-1 mRNA表达水平均高于未复发转移组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,临床分期、癌组织中FGFRL-1 mRNA均为胃癌患者术后复发转移发生的危险因素(OR=2.807、3.330,P<0.05)。ROC曲线分析显示,胃癌组织中FGFRL-1 mRNA表达水平预测术后复发转移发生的最佳截断点为1.21,灵敏度、特异度及AUC分别为72.22%、75.47%、0.714。结论胃癌组织中FGFRL-1 mRNA表达水平高于癌旁组织,且其与胃癌根治术后复发转移存在一定的相关性,可作为临床评估胃癌根治术后复发转移的重要参考指标。

碱性成纤维细胞生长因子对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK/ERK、MKP-1通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK1/2、ERK1/2及MKP-1表达的影响。方法:培养人涎腺腺样囊性癌细胞株(ACC-2),MTT比色法测定不同浓度bFGF对细胞增殖的影响;免疫沉淀法纯化蛋白并ERK试剂盒测定ERK活性;免疫印迹法测定p-MEK1/2、p-ERK1/2及MKP-1表达。结果:MTT实验显示bFGF明显增强ACC-2细胞增殖,免疫沉淀法显示bFGF上调ERK活性,免疫印迹法显示bFGF明显增强p-MEK1/2、p-ERK1/2表达及抑制MKP-1表达。结论:bFGF可促进人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖,其途径与上调ERK活性、激活MEK/ERK通路、抑制MKP-1表达有关。

胰岛素样生长因子-1对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的促生长作用

背景甲状腺相关眼病（TAO）是一种自身免疫性疾病，目前对其发病机制的研究主要集中在共同抗原上。胰岛素样生长因子-1（IGF．1）功能的发挥需要IGF-1受体（IGF-1R）的参与，IGF-1在促甲状腺激素受体（TSHR）的信号传导通路中也起着重要作用。目的探讨IGF-1对TAO患者眼眶成纤维细胞（OFs）增生及IGF-1R、TSHR表达的影响，探讨IGF-1在TAO发病机制中的作用。方法收集2016年3-6月于四川大学华西医院行TAO眼眶脂肪切除术取得的眶组织标本17例17份及正常人美容手术取得的眼眶组织4人4份，采用含体积分数5％胎牛血清的DMEM／F12培养液培养OFs。分别于培养液中加入不同质量浓度（O、50、100、125μg／L）的IGF-1，采用MTS比色法绘制OFs生长曲线，评估IGF-1对TAO和正常来源OFs增生的影响；采用流式细胞术测定不同质量浓度IGF-1对TAO和正常来源OFs中IGF-1R、TSHR表达水平的影响。结果TAO患者与正常人来源的OFs均生长良好，呈梭形，细胞质丰富，TAO患者与正常人来源的OFs形态学特点一致。培养的OFs波形蛋白呈阳性反应，结蛋白、S-100、肌红蛋白和角蛋白均呈阴性反应。不同质量浓度IGF-1作用后TAO组和正常组OFs增生均呈逐渐上升趋势，总体比较差异有统计学意义（F分组=219．639，P〈0．001；F质量浓度=17．752，P〈0．001），以100μg／LIGF-1的促进作用最强。0、50、100、125μg／LIGF-1作用后TAO组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0091±0．0087）％、（0．0953±0．0233）％、（0．0837±0．0227）％和（0．0709±0．0241）％，正常组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0023±0．0006）％、（0．0093±0．0012）％、（0．0073±0．0015）％和（0．0083±0．0012）％，其中50、100和125μg／LIGF-1作用后各组OFs中IGF-1R表达量均高于无添加IGF-1者，TAO组OFs细胞中IGF-1R的表达量均明显高于正常组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；0、50、100和125μg／LIGF-1作用后TAO组和正常组OFs中TSHR表达量的总体比较差异均无统计学意义（F分组=0．133，P〉0．05；F质量浓度=0．004，P〉0．05）。结论IGF-1对TAO患者和正常人OFs的生长均有促进作用并能上调OFs中IGF-1R的表达，但其对OFs中TSHR的表达变化无明显影响。

白藜芦醇上调碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1表达治疗骨骼肌损伤

背景:近年来国内外对白藜芦醇抑制机体组织纤维化方面做了大量研究,但其在肌组织损伤康复方面的作用却鲜有报道。目的:观察骨骼肌急性钝挫伤修复过程中碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1蛋白表达规律,探讨白藜芦醇促进受损骨骼肌结构与功能恢复的作用机制。方法:33只新西兰兔随机分为3组:正常组(3只)、自然恢复组(15只)、白藜芦醇组(15只),除正常组外均采用钝性暴力法制造骨骼肌钝挫伤模型,损伤后自然恢复组不予处理,白藜芦醇组给予白藜芦醇灌胃治疗,分别于伤后1,3,7,14,21 d处死动物,采用苏木精-伊红染色、Masson染色观察炎症细胞浸润情况、胶原纤维形成情况,免疫组织化学、免疫印记法检测骨骼肌中碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1蛋白表达。结果与结论:①苏木精-伊红染色显示:正常组兔肌纤维多边形、形态规则、排列紧密,肌核均匀分布于肌膜下,无增生与固缩,肌膜完整;自然恢复组伤后1 d见血细胞渗出,3 d炎症细胞开始浸润,至7 d达峰值,21 d肌纤维形态基本恢复正常;白藜芦醇组在炎症细胞浸润、修复时间上整体优于自然恢复组;②Masson染色显示:正常肌细胞中胶原纤维含量极少;自然恢复组随着瘢痕组织的形成,胶原纤维逐渐增加,于14 d达高峰;白藜芦醇组胶原纤维含量低于自然恢复组;③免疫组织化学和免疫印记检测显示:碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1蛋白在骨骼肌修复过程中呈现先升高后降低的变化规律,两组均于7 d达高峰,21 d时仍高于正常,且白藜芦醇组峰值高于自然恢复组;④整体来看,白藜芦醇组在炎症反应以及修复程度上均优于自然恢复组,白藜芦醇通过上调碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1蛋白表达来促进骨骼肌修复,但其并不改变骨骼肌损伤修复过程中蛋白表达量的整体变化规律。

Toll样受体4通过转化生长因子β1参与增生性瘢痕形成的机制研究

增生性瘢痕是机体在创伤后过度修复的表现形式之一,其发病机制并不十分明确.最近有证据显示,成纤维细胞能在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的作用下,激活toll样受体4(toll like receptor-4,TLR-4),参与调节免疫/炎症反应.因此,探索了TLR-4在增生性瘢痕的产生中可能起到的作用.利用荧光定量PCR检测证实,在体外培养的原代增生性瘢痕成纤维细胞(hyperplastic scar fibroblast,HSFB)中TLR-4和骨髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)的表达高于正常皮肤成纤维细胞(normal skin fibroblast,NFB).用LPS处理NFB和HSFB 24 h,发现TLR-4、MyD88和转化生长因子β1(transforming growth factor-beta,TGF-β1)、Ⅰ型前胶原在mRNA和蛋白质水平的表达均上调.MTT也证实LPS促进体外培养的HSFB的增殖效应强于NFB.然而,在HSFB中采用siRNA干扰MyD88后,再用LPS处理,与干扰对照组相比,MyD88、TGF-β1和Ⅰ型前胶原的表达均明显减弱.结果表明,在皮肤成纤维细胞激活TLR-4信号通路,能引起促炎细胞因子TGF-β1的产生,同时促进细胞增殖,而干扰MyD88,能抑制LPS刺激后这些细胞因子的表达.

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1通过糖原合成酶激酶-3β/信号转导和转录激活因子3通路调控高糖诱导的心肌成纤维细胞纤维化的研究

目的 探讨凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)通过糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路调控高糖诱导的心肌成纤维细胞(CFs)纤维化的相关机制。方法 分离、培养及鉴定CFs,构建LOX-1 RNAi慢病毒载体(LV-LOX-1)及慢病毒空载体(LV-Con)并感染CFs。将细胞分为正常对照(NC)组、25 mmol/L葡萄糖的高糖(HG)组、高渗(HPG)组、LV-LOX-1组和LV-Con组,LV-LOX-1及LV-Con感染CFs后加入HG培养24h,记为HG+LV-LOX-1组和HG+LV-Con组,分别使用10μmol/LSB216763和10μmol/L STATTIC处理HG+LV-LOX-1、HG+LV-Con组24h,记为HG+LV-LOX-1+SB216763组、HG+LV-Con+SB216763组、HG+LV-LOX-1+STATTIC组和HG+LV-Con+STATTIC组。CCK-8法检测CFs活力,q RT-PCR和Western blot法检测LOX-1、I型胶原(COL-I)、硫氧还蛋白5(TXNDC5)、GSK-3β、STAT3、p-GSK-3β、p-STAT3 mRNA和蛋白表达。结果 获得LV-LOX-1感染的CFs,荧光显微镜下呈绿色。与HG、HG+LV-Con组比较,HG+LV-LOX-1组LOX-1、COL-I、TXNDC5m RNA表达降低(P<0.05)。与HG+LV-LOX-1组比较,HG+LV-LOX-1+SB216763、HG+LV-LOX-1+STATTIC组COL-I、TXNDC5 mRNA表达降低(P<0.05)。与HG、HG+LV-Con组比较,HG+LV-LOX-1组p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05),LOX-1、p-STAT3、COL-I、TXNDC5蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+LV-LOX-1组比较,HG+LV-LOX-1+SB216763组p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05),HG+LV-LOX-1+SB216763、HG+LV-LOX-1+STATTIC组p-STAT3、COL-I、TXNDC5蛋白表达降低(P<0.05)。结论 LOX-1、GSK-3β、STAT3、TXNDC5、COL-I参与高糖诱导的CFs纤维化,LOX-1通过GSK-3β/STAT3通路促进TXNDC5和COL-I表达,抑制LOX-1可抑制高糖诱导的CFs纤维化。

肝X受体激动剂T0901317抑制TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-SMA的表达

目的探讨肝X受体激动剂T0901317对TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法组织块贴壁法培养人正常肺成纤维细胞,波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学鉴定。T0901317和/或TGF-β1刺激人正常肺成纤维细胞后,分别应用RT-PCR,Western blot和免疫荧光观察α-SMA mRNA和蛋白水平的表达。结果人肺成纤维细胞表达波形蛋白而不表达角蛋白。RT-PCR,Western blot,免疫荧光结果均显示正常肺成纤维细胞基态下组成性表达少量的α-SMA,TGF-β15ng/ml即可以诱导α-SMA mRNA和蛋白表达的明显上调,而T09013175μg/ml时可以明显抑制这种表达的上调。结论肝X受体激动剂T0901317可以在基因和蛋白水平抑制TGF-β1诱导的体外人正常肺成纤维细胞α-SMA表达的上调,可能具有潜在抗纤维化应用价值。

ADAMTS-1对小鼠肺成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响

目的探讨含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)对小鼠肺成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白(COL1)表达的影响及可能的机制。方法应用细胞培养技术进行小鼠肺成纤维细胞培养,利用ADAMTS-1为刺激因子,将培养的细胞分为空白组、低、中、高浓度组,应用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察COL1 mRNA、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA在各组中的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western blotting)观察各组细胞COL1、TGF-β1的变化。结果与空白组相比,低浓度组、中浓度组、高浓度组的COL1、TGF-β1表达水平下降,其中高浓度组表达水平最低(P<0.05)。结论 ADAMTS-1能降低COL1的表达,抑制TGF-β1是其抗纤维化作用的可能潜在机制。

成纤维细胞生长因子的信号通路

背景:在最早的胚胎发育阶段和器官形成期间,成纤维细胞生长因子家族成员的功能是维持祖细胞并介导祖细胞的生长、分化、存活和形态。成纤维细胞生长因子常在成熟的组织通过重新激活信号通路介导代谢功能、组织修复和再生。目的:总结并讨论成纤维细胞生长因子信号通路对组织和器官的作用。方法:由第一作者用计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI:2010至2016年)和Medline数据库(2000至2016年),检索词分别为"成纤维细胞生长因子,信号通路"和"Fibroblast growth factor,signaling pathway"语言分别设定为中文和英文。全面阐述成纤维细胞生长因子的信号通路的研究进展。结果与结论:(1)共纳入47篇文献;(2)哺乳动物成纤维细胞生长因子家族的信号是由18个分泌蛋白组成,这18个分泌蛋白与4个信号酪氨酸激酶成纤维细胞生长因子受体相互作用;(3)成纤维细胞生长因子配体与受体的相互作用是由蛋白质或辅助因子蛋白多糖和胞外结合蛋白来调节的;(4)活化的成纤维细胞生长因子受体使特定的酪氨酸残基磷酸化,调节与细胞质接头蛋白、RAS-MAPK、PI3K-AKT、磷脂酶Cγ和STAT细胞内信号通路的相互作用,4个结构相关的细胞内非信号的成纤维细胞生长因子相互作用来调节电压门控钠离子通道;(5)结果说明,成纤维细胞生长因子存在所有的组织和器官中,成纤维细胞生长因子信号通路异常与发育缺陷、损害对损伤的反应、导致代谢紊乱和癌症发病相关联。

炎症环境下牙髓成纤维细胞中NOD样受体蛋白3炎症体相关分子表达的调节

背景:NOD样受体蛋白3炎症体是细胞抵御外来病原入侵的重要炎性因子,前期研究已证实其在牙髓成纤维细胞中有表达,然而炎症环境下牙髓成纤维细胞NOD样受体蛋白3炎症体相关分子的转录调节机制尚不清楚。目的:阐明炎症环境下牙髓成纤维细胞中NOD样受体蛋白3炎症体相关分子的转录调节机制。方法:选择第4代牙髓成纤维细胞,分6组:A组正常培养,不进行任何处理;B组加入脂多糖刺激6 h;C组加入Toll样受体4特异性抑制剂处理1 h,再加入Toll样受体4特异性抑制剂与脂多糖混合溶液处理6 h;D组加入髓样分化因子88特异性抑制剂处理1 h,再加入髓样分化因子88特异性抑制剂与脂多糖混合溶液处理6 h;E组加入核因子κB特异性抑制剂处理1 h,再加入核因子κB特异性抑制剂与脂多糖混合溶液处理6 h;F组加入髓样分化因子88特异性抑制剂阴性对照处理1 h,再加入髓样分化因子88特异性抑制剂阴性对照与脂多糖混合溶液处理6 h。采用RT-PCR检测NOD样受体蛋白3、Caspase-1与白细胞介素1βmRNA的表达,Western blot检测NOD样受体蛋白3与Caspase-1蛋白表达,ELISA法检测白细胞介素1β释放水平。结果与结论:①与A组比较,B组NOD样受体蛋白3、Caspase-1及白细胞介素1βmRNA表达水平升高(P<0.05);与B组比较,C-E组NOD样受体蛋白3、白细胞介素1βmRNA表达水平降低(P<0.05),C组Caspase-1 mRNA表达水平降低(P<0.05);②与A组比较,B组NOD样受体蛋白3、Caspase-1蛋白表达升高(P<0.05);与B组比较,C-E组NOD样受体蛋白3蛋白表达降低(P<0.05),C组Caspase-1蛋白表达降低(P<0.05);③与A组比较,B组白细胞介素1β水平升高(P<0.05);与B组比较,C-E组白细胞介素1β水平降低(P<0.05);④结果表明,脂多糖通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路上调牙髓成纤维细胞内NOD样受体蛋白3和白细胞介素1β的表达。

肝素、IGFBP-4及IGF-1对肺成纤维细胞糖代谢及功能的影响

目的:探讨类胰岛素生长因子(IGF-1)及其结合蛋白-4(IGFBP-4)、肝素在肺纤维化形成过程中的相互关系。方法:选择二倍体人胚肺成纤维细胞(lung fibroblast,LF)株,分别给予100μg/L IGF-1、100μg/LIGF-1+100μg/LIGFBP-4、100μg/LIGF-1+200μg/LIGFBP-4、100μg/LIGF-1+100μg/LIGFBP-4+100μg/L肝素、100μg/L IGF-1+100μg/L IGFBP-4+200μg/L肝素、100μg/L IGF-1+100μg/L肝素、100μg/LIGF-1+200μg/L肝素刺激24 h。检测细胞外弹性蛋白、胶原蛋白及细胞内葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)、己糖激酶-2(HK-2)的含量。结果:与空白对照组相比,IGF-1组HK-2及GLUT-4mRNA及相应蛋白表达增强(P<0.05);加入IGFBP-4以后HK-2及GLUT-4mRNA及相应蛋白表达明显强于IGF-1组(P<0.05);而同时加入肝素与IGFBP-4后HK-2及GLUT-4mRNA及相应蛋白表达明显抑制(P<0.05),并且这一抑制效应随肝素用量增加而更加明显;但单加肝素时HK-2及GLUT-4mRNA及相关蛋白表达抑制不如前组明显(P<0.05)。结论:(1)IGF-1能够刺激肺成纤维细胞的糖代谢,使HK-2及GLUT-4mRNA及细胞外基质(ECM)蛋白表达增强;(2)单纯增加IGFBP-4不仅不能抑制IGF-1的刺激作用,反而增加HK-2及GLUT-4mRNA及相应蛋白表达,可能与IGFBP-4的降解有关;(3)IGFBP-4在肝素存在的情况下,能明显抑制IGF-1对肺成纤维细胞的刺激作用,使HK-2及GLUT-4及细胞外基质蛋白表达明显减少,说明肝素以及未被降解的IGFBP-4对肺纤维化可能是有效的防护因子。

GFP标记的IGF-1基因表达载体转染成纤维细胞的研究

目的构建和鉴定含有标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因真核表达载体,为基因治疗关节软骨缺损奠定基础。方法利用基因重组技术将GFP cDNA连接至pcDNA3.1-IGF-1中,构建真核表达载体pcGI,然后限制性内切酶酶切鉴定。将pcGI转染成纤维细胞,经G418筛选,荧光显微镜、原位杂交和免疫细胞化学检测GFP和hIGF-1的表达,流式细胞仪检测细胞周期。结果酶切分析证明重组的pcGI质粒含有GFP cDNA和hIGF-1 cDNA碱基片段,方向及大小正确。转染后的成纤维细胞,荧光显微镜观察可激发出绿色荧光,原位杂交和免疫细胞化学检测有hIGF-1的表达。流式细胞仪分析显示转染后成纤维细胞S期细胞增加,G1期细胞减少(P<0.01)。结论含有GFP和hIGF-1基因的真核表达载体pcGI其可以在成纤维细胞内获得稳定表达,并有效的促进成纤维细胞的增殖,这为进一步开展IGF-1基因治疗软骨损伤修复的研究奠定了基础。

MicroRNA-133b调节FGFR1-ERK1/2-SOX2信号通路对裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长的影响

目的探讨microRNA-133b(miR-133b)对裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长的抑制作用以及对成纤维细胞生长因子受体1-细胞外信号调节激酶1/2-性别决定区Y-box蛋白2信号通路(FGFR1-ERK1/2-SOX2)的影响。方法q RT-PCR检测人肺成纤维细胞、肺癌细胞株miR-133b表达。miR-133b过表达NCIH1975细胞。将NCI-H1975细胞分为对照组、mimic NC组、miR-133b mimic组、miR-133b mimic+pcDNA3.1组、miR-133b mimic+pcDNA3.1 FGFR1组。CCK-8法检测NCI-H1975细胞增殖抑制率,Transwell实验观察NCI-H1975细胞侵袭、迁移情况。复制裸鼠移植瘤模型并分组,将裸鼠分为对照组、mimic NC组、miR-133b mimic组、miR-133b mimic+AZD4547组,观察各组裸鼠肿瘤体积与重量,HE染色观察各组裸鼠肿瘤组织变化,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法观察裸鼠肿瘤组织Ki-67、Cyclin D1、VEGF-A的表达,Western blotting检测各组肿瘤组织FGFR1、p-ERK1/2/ERK1/2、SOX2蛋白相对表达量。结果与人肺成纤维细胞HLF-α比较,肺癌细胞株NCI-H1975、A427、NGE-1、A549中miR-133b mRNA相对表达量降低(P<0.05),其中以NCI-H1975细胞中miR-133b mRNA相对表达量最低。miR-133b mimic组miR-133b mRNA相对表达量较对照组和mimic NC组升高(P<0.05)。miR-133b可通过负调控FGFR1抑制肺癌NCIH1975细胞增殖和迁移。miR-133b mimic组移植瘤重量较对照组降低、体积缩小,miR-133b mimic+AZD4547组移植瘤重量较miR-133b mimic组降低、体积缩小(P<0.05)。miR-133b mimic组空泡样变性程度较对照组、mimic NC组减轻(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组空泡样变性程度较miR-133b mimic组减轻(P<0.05)。miR-133b mimic组肿瘤组织细胞凋亡率较对照组升高(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组肿瘤组织细胞凋亡率较miR-133b mimic组升高(P<0.05)。miR-133b mimic组VEGF-A、Cyclin D、Ki-67阳性细胞比例较对照组降低(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组VEGF-A、Cyclin D、Ki-67阳性细胞比例较miR-133b mimic组降低(P<0.05)。miR-133b mimic组FGFR1、p-ERK1/2/ERK1/2、SOX2蛋白相对表达量较对照组降低(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组FGFR1、p-ERK1/2/ERK1/2、SOX2蛋白相对表达量较miR-133b mimic组降低(P<0.05)。结论miR-133b过表达可能通过抑制FGFR1-ERK1/2-SOX2轴,抑制裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长。

miR-100调节IGF1R/mTOR信号通路对牙周炎牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

目的:探究MicroRNA-100(miR-100)对牙周炎牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖和成骨分化的影响及潜在机制。方法:丝线结扎法构建牙周炎大鼠模型,建模后分为模型组、NC-agomir组、miR-100 agomir组、NC-antagomir组和miR-100 antagomir组(n=10),另取10只大鼠为对照组。体外培养PDLSCs,分为对照组、TNF-α组、miR-100-NC+TNF-α组、miR-100 mimics+TNF-α组、miR-100 inhibitor+TNF-α组、miR-100 mimics+TNF-α+Oe-NC组、miR-100 mimics+TNF-α+Oe-IGF1R组。细胞经相应处理后检测有关因子表达。结果:上调miR-100可显著降低牙周炎大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平和牙周组织IGF1R和mTOR的mRNA水平(P<0.05),减轻牙周组织病变,而下调miR-100表现出相反作用。在PDLSCs中,miR-100过表达可显著抑制IGF1R和mTOR表达,上调Cyclin E1、Cyclin D1及分化相关蛋白八聚体结合转录因子4(Oct4)、性别决定区Y-box2(Sox2)、Runt相关转录因子2(Runx2)表达,促进炎性微环境下PDLSCs增殖和成骨分化(P<0.05);而下调miR-100表现出相反作用;且过表达IGF1R可减弱miR-100过表达对TNF-α诱导的PDLSC增殖和成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论:过表达miR-100可能通过抑制IGF1R/mTOR信号通路促进牙周炎PDLSCs的增殖和成骨分化。

ADAMTS-1对博莱霉素所致肺成纤维细胞纤维化的影响

目的：探讨Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS-1）对博莱霉素诱导的大鼠肺成纤维细胞纤维化的影响及其机制。方法实验分为六组，博莱霉素组（Ⅱ组）在大鼠肺成纤维细胞中加入博莱霉素建立肺纤维化模型，在加入博莱霉素的同时分别加1、2、4μg ADAMTS-1（Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组），并与只加4μg ADAMTS-1（Ⅵ组）和正常大鼠肺成纤维细胞（Ⅰ组）进行对照。加入博莱霉素及ADAMTS-1处理24 h后，运用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测结缔组织生长因子（CTGF）、Ⅰ型胶原（COLⅠ）mRNA表达量，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中CTGF、COLⅠ质量浓度。结果Ⅱ组CTGF、COLⅠmRNA表达量及细胞培养上清液中质量浓度明显高于其他各组，而Ⅲ~Ⅵ组与Ⅱ组比较，不但CTGF、COLⅠmRNA表达降低，而且细胞培养上清液中质量浓度也明显下降，以Ⅵ组最低，差异有统计学意义（P＆lt;0.05）。结论 ADAMTS-1在一定程度上呈剂量依赖性抑制博莱霉素诱导的大鼠成纤维细胞纤维化。

噻唑烷二酮类胰岛素增敏药和LOX-1对心脏成纤维细胞功能的调节作用(英文)

心脏成纤维细胞在心脏重构中起重要作用。在各种促纤维化因素(如前炎症因子、缺氧-复氧、压力超负荷、衰老)刺激下,心脏成纤维细胞增殖、迁移、激活,导致细胞基质成分的积聚、心脏肥厚和僵硬。过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPAR-γ)的配体,特别是噻唑烷二酮类胰岛素增敏药,在病理条件下可调节心脏成纤维细胞的功能以及心脏重构的发展,然而未发现噻唑烷二酮类胰岛素增敏药对心脏衰竭的有益作用。噻唑烷二酮类胰岛素增敏药调节心脏成纤维细胞功能和心脏重构的确切信号通路未完全阐明,现有证据提示涉及氧化应激及相关信号途径。此外,PPAR-γ和植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)在其中起重要作用。

miR-107靶向FGFRL1/AKT通路抑制胃癌耐药细胞迁移

目的检测胃癌敏感和耐药细胞迁移能力的强弱,探究miR-107靶向成纤维细胞生长因子受体样蛋白(FGFRL)1/蛋白激酶B(AKT)通路调节胃癌耐药细胞迁移。方法利用划痕和transwell小室实验验证胃癌敏感和耐药细胞的迁移;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR),Western印迹检测敏感和耐药胃癌细胞中miR-107、FGFRL1/AKT通路活性及迁移相关蛋白(E-钙黏附蛋白(Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶(MMP)9)的表达;利用荧光素酶报告实验鉴定miR-107与FGFRL1之间的靶向关系;将胃癌细胞耐药株分为mimic NC组、miR-107 mimic组、NC组和siFGFRL1组,荧光定量PCR、Western印迹检测胃癌耐药细胞中FGFRL1 mRNA表达水平、FGFRL1/AKT通路活性及迁移相关蛋白表达水平;划痕和transwell小室实验测定胃癌耐药细胞迁移能力的变化。结果与胃癌敏感细胞相比,胃癌耐药细胞迁移能力更强,且miR-107呈明显低表达,FGFRL1 mRNA和蛋白水平显著高表达,AKT活性(p-AKT水平)与Vimentin、MMP9蛋白水平显著高表达,E-Cadherin蛋白水平显著低表达(均P<0.05);与mimic NC组和NC组相比,在miR-107 mimic组、siFGFRL1组中胃癌耐药细胞中FGFRL1 mRNA和蛋白表达水平显著下调,AKT活性与Vimentin、MMP9蛋白显著下调,E-Cadherin显著上调,胃癌耐药细胞迁移能力也显著下降(均P<0.05),且荧光素酶报告实验表明FGFRL1是miR-107的下游靶标分子。结论胃癌耐药细胞迁移能力更强,miR-107通过靶向调节FGFRL1/AKT通路活性调控迁移相关蛋白的表达,进而调控胃癌耐药细胞的迁移。