三七总皂苷抗心肌细胞肥大与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14的关系

目的研究三七总皂苷(panax notoginseng saponin,PNS)抗心肌细胞肥大是否与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(fibroblast growth factor-inducible 14,Fnl4)的表达变化相关。方法分离原代新生大鼠心肌细胞,去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)处理原代细胞建立心肌细胞肥大模型。鬼笔环肽染色观察细胞形态,实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测肥大相关基因和Fn14 m RNA表达水平,Western blot检测Fn14蛋白表达水平。结果与对照组比较,NE处理组细胞表面积增大、细胞肥大相关基因m RNA表达水平明显升高,Fn14 m RNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与单独NE组比较,NE和PNS同时处理组的细胞表面积减小、肥大相关基因m RNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。PNS对Fn14 m RNA表达水平影响不大,但是却明显的促进Fn14蛋白表达(P<0.05)。结论 PNS能够抗NE诱导的心肌细胞肥大,同时能够影响Fn14的表达。PNS抗心肌肥大可能通过Fn14起作用。

丹参通络解毒汤对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子/成纤维细胞生长因子诱导14通路的影响

目的观察丹参通络解毒汤对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)/成纤维细胞生长因子诱导14(Fn14)通路的影响,探讨其对小鼠肺纤维化的影响及机制。方法取C57B/L小鼠50只随机分为空白组、模型组、1,25-二羟维生素D_(3)[1,25(OH)_(2)D_(3)]组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+TWEAK/Fn14抑制剂PDL192组。模型组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠气管内注射博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型。造模成功后,空白组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水10 mL·kg^(-1);1,25(OH)_(2)D_(3)组小鼠每日经腹腔注射1,25(OH)_(2)D_(3)5μg·kg^(-1);丹参通络解毒汤组小鼠每日灌胃丹参通络解毒汤汤剂0.039 mL·g^(-1)(按成人60 kg体质量计算,相当于生药15.65 g·kg^(-1));丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠每日灌胃丹参通络解毒汤汤剂0.039 mL·g^(-1),并经腹腔注射PDL1923 mg·kg^(-1);各组小鼠均每日给药1次,连续给药28 d;末次给药后12 h测体质量,然后经腹腔注射戊巴比妥钠进行麻醉、固定,采集肺支气管肺泡灌洗液(BALF),开胸取肺组织,测肺质量,计算小鼠肺系数。采用酶标仪检测5组小鼠BALF中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)水平。苏木精-伊红染色和Masson三色法染色法观察5组小鼠肺组织病理学变化。实时荧光定量聚合酶链式反应法检测5组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))mRNA表达。Western blot法检测5组小鼠肺组织炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及肺组织TWEAK/Fn14通路因子TWEAK、Fn14、TGF-β_(1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、母亲信号蛋白同源物3(Smad3)、磷酸化母亲信号蛋白同源物3(p-Smad3)、信号传导和转录激活因子3(STAT3)、酪氨酸磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白相对表达量。结果空白组小鼠肺组织结构正常,无结缔组织增生,无明显胶原沉积;模型组小鼠肺组织基本形态结构被破坏,支气管结构较为模糊,部分支气管上皮细胞坏死,间质周围炎症细胞浸润,肺组织有大量的胶原沉积;1,25(OH)_(2)D_(3)组小鼠肺组织基本形态结构被破坏,上皮细胞坏死,坏死区域肺泡腔较为狭窄,内含大量细胞碎片和炎症细胞,部分区域可见成纤维细胞增生,胶原沉积明显减少;丹参通络解毒汤组小鼠部分区域肺组织结构被破坏,支气管结构较为完整清晰,部分肺泡结构模糊,肺泡腔狭窄,间质及周围未见水肿或炎症细胞浸润,胶原沉积明显减少;丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织结构较为正常,各级支气管结构完整清晰,肺泡结构较为清晰,肺泡腔内可见少量炎症细胞散在分布,间质及周围未见水肿或炎症细胞浸润,胶原沉积明显减少。空白组、模型组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠体质量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、丹参通络解毒汤组小鼠肺系数显著增高(P<0.05);与模型组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺系数显著降低(P<0.05);与1,25(OH)_(2)D_(3)组比较,丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺系数显著降低(P<0.05);1,25(OH)_(2)D_(3)组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺系数与丹参通络解毒汤组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、丹参通络解毒汤组小鼠BALF中IL-1β、TNF-α、IL-4水平显著升高(P<0.05),丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,1,25(OH)_(2)D_(3)组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β、TNF-α、IL-4水平显著降低(P<0.05);与1,25(OH)_(2)D_(3)组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β、IL-4水平显著降低(P<0.05);与丹参通络解毒汤组比较,丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β、IL-4水平显著降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1 mRNA相对表达量及1,25(OH)_(2)D_(3)组小鼠肺组织TWEAK mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,丹参通络解毒汤组小鼠肺组织Fn14 mRNA相对表达量及丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。1,25(OH)_(2)D_(3)组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1 mRNA相对表达量各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1蛋白相对表达量及1,25(OH)_(2)D_(3)组、丹参通络解毒汤组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β蛋白相对表达量显著降低(P<0.05);与1,25(OH)_(2)D_(3)组比较,丹参通络解毒汤组和丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织IL-1β蛋白相对表达量显著降低(P<0.05);与丹参通络解毒汤组比较,丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织IL-1β蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠肺组织中TWEAK、Fn14、TGF-β1、α-SMA、p-Smad3、STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),1,25(OH)_(2)D_(3)组小鼠肺组织中TWEAK、TGF-β1、α-SMA、p-Smad3、STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织中TWEAK、α-SMA、p-Smad3、STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,1,25(OH)_(2)D_(3)组小鼠肺组织p-Smad3蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1、α-SMA、p-Smad3、STAT3蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织Fn14、TGF-β1、α-SMA、Smad3、p-Smad3、p-STAT3蛋白相对表达量及丹参通络解毒汤小鼠肺组织TWEAK、STAT3蛋白相对表达量与1,25(OH)_(2)D_(3)组比较差异无统计学意义(P>0.05);丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织中TWEAK、STAT3蛋白相对表达量与1,25(OH)_(2)D_(3)组比较显著降低(P<0.05)。结论丹参通络解毒汤能够减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,其机制可能与抑制肺组织炎症和TWEAK/Fn14信号通路有关。

白塞综合征肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子及其受体成纤维细胞生长诱导因子14表达的初步研究

白塞综合征（BS）是一种慢性、可累及多系统的血管炎性疾病。临床上以口腔溃疡、生殖器溃疡、葡萄膜炎和皮肤损害等反复发作为主要特征．亦可累及胃肠道、关节、心血管、肾脏及神经等多个系统。

Fn14与JAK/STAT在非小细胞肺癌EGFR外显子19缺失突变组织中的表达

目的探讨成纤维细胞生长因子诱导14(Fn14)和Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号分子在非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR外显子19缺失突变(EGFR 19-Del)组织样本中的表达情况。方法经突变扩增阻滞系统法筛选出125例EGFR 19-Del的NSCLC组织并收集30例配对癌旁组织,应用免疫组织化学法检测该组织样本中Fn14、pJAK1和p-STAT1的表达,统计分析3种蛋白表达与临床病理特征的关系及三者之间的相关性。结果 Fn14阳性表达主要定位于细胞膜和胞质,p-JAK1、p-STAT1阳性表达主要定位于细胞质和胞核。EGFR 19-Del的NSCLC组织中Fn14、p-JAK1、pSTAT1的阳性表达率分别为100.0%(125/125)、83.2%(104/125)和100.0%(125/125),均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。三者在性别、年龄、吸烟史、病理类型方面的表达差异均无统计学差意义(P>0.05),在组织学分级、pT NM分期、淋巴结转移方面的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。Fn14与p-JAK1、p-STAT1在病理类型、组织学分级及pT NM分期方面表达均有很好的相关性(P<0.05,r>0.3)。结论 Fn14、p-JAK1、p-STAT1在EGFR 19-Del的NSCLC组织中呈高表达,表明Fn14、p-JAK1、p-STAT1很可能与EGFR 19-Del的NSCLC发生、发展有关;且Fn14可能促进p-JAK1、p-STAT1的表达,为进一步研究Fn14在EGFR 19-Del的NSCLC中的作用机制提供重要依据。

BMP-14与bFGF联合诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化的实验研究

目的研究骨形态发生蛋白-14(BMP-14)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向软骨分化的协同作用。方法采用密度梯度离心法与贴壁分离法相结合分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,用含10%胎牛血清的L-DMEM培养至第3代作为种子细胞,对照组A组不加生长因子,实验组B、C、D组分别加入100ng/ml BMP-14、10ng/ml bFGF和100ng/ml BMP-14+10ng/ml bFGF,培养24h后各组间行细胞增殖比较,14d后观察各组细胞形态学改变,各组间行Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色和阿尔辛蓝染色。结果培养14d后,A、B、C、D4组的Ⅱ型胶原细胞染色阳性率分别为(7.5210±3.7243)%、(40.8271±1.2787)%、(17.2818±1.4242)%、(60.5114±1.7634)%;阿尔辛蓝染结果为:A组阴性,B、C组呈淡染,D组呈蓝色。结论BMP-14和bFGF的联合应用较单个细胞因子可以明显诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型分化及促进细胞增殖。

TWEAK/Fn14在肾间质纤维化大鼠肾脏组织中的表达及作用

目的:探讨肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导受体(TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子14(Fn14)在肾间质纤维化(RIF)大鼠肾脏组织中的表达及作用。方法:将24只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及给药组,每组8只。模型组和给药组均采用单侧输卵管梗阻(UUO)法建立RIF模型,假手术组仅开腹不结扎。给药组术前1周腹腔注射TWEAK/Fn14抑制剂enavatuzumab(3mg/kg),假手术组和模型组注射等量生理盐水。术后采用苏木精—伊红(HE)染色和Masson染色评价RIF程度,Western blotting法检测TEWAK、Fn14、转化生长因子β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)及干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果:术后14d,与假手术组比较,模型组显微镜下可见严重RIF,TWEAK、Fn14、TGF-β1、α-SMA表达量及血清TNF-α、IL-1、IFN-γ水平明显升高;经Enavatuzumab干预后,给药组RIF减轻,上述指标水平显著低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:TWEAK/Fn14在UUO致RIF大鼠肾组织中的表达明显上调,可调节α-SMA及TGF-β1蛋白表达,促进炎症反应,进而促进肾纤维化的进展。

Fn14活化凋亡增强人上皮性卵巢癌细胞顺铂敏感度的研究

目的:探讨成纤维细胞生长诱导因子14(Fn14)对人上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)细胞的顺铂(DDP)敏感度的影响及其可能机制。方法:蛋白质印迹(Western blotting)法检测EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中Fn14蛋白的表达情况,选择低表达Fn14蛋白的细胞株转染Fn14过表达质粒后,观察转染后细胞株的Fn14蛋白、凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3和Bcl-2的表达情况。CCK-8法检测细胞增殖能力及DDP半数抑制浓度(IC50)。流式细胞学检测细胞凋亡。结果:人EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中,A2780/DDP细胞株Fn14蛋白表达水平最低。Fn14过表达质粒转染A2780/DDP细胞后,细胞内Fn14表达水平上调(P<0.05);细胞的增殖能力无变化,但细胞DDP的IC50显著降低(P<0.05)。流式细胞学检测结果进一步显示Fn14可以增加DDP诱导的A2780/DDP凋亡细胞数目。同时,Western blotting结果显示促凋亡蛋白caspase-3表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降(P<0.05)。结论:Fn14可能活化凋亡通路进而提高A2780/DDP细胞对DDP的敏感度。

隐丹参酮通过TWEAK/Fn14和TGF-β1/Smads信号通路缓解OVA诱导哮喘小鼠气道炎症

目的 探究隐丹参酮对哮喘小鼠气道重塑模型的治疗作用,以及其机制是否与TWEAK/Fn14和TGF-β1/Smads信号通路相关。方法 选取♀ BALB/c小鼠40只,分为5组(每组8只),分别为control组、OVA模型组、隐丹参酮低、高剂量组(20、40 mg·kg^-1)、地塞米松阳性对照组(1 mg·kg^-1)。HE及PAS染色法观察小鼠肺组织的炎症情况及杯状细胞变化;Diff-Quick染色法对小鼠BALF中各类细胞计数;ELISA法检测小鼠BALF中炎性及促炎细胞因子的含量;Western blot检测肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1、Smad2/3、Smad4表达;免疫组化法检测小鼠肺组织中TWEAK、TGF-β1的表达水平。结果 隐丹参酮能减少OVA诱导的炎症细胞渗出及杯状细胞增生;隐丹参酮抑制哮喘小鼠BALF中总细胞及EOS、NEU、LYM的生成,并降低促炎细胞因子的水平;Western blot结果显示,隐丹参酮抑制TWEAK、Fn14、TGF-β1、Smad2/3、Smad4的蛋白表达;免疫组化结果显示,隐丹参酮可减少肺组织中TWEAK、TGF-β1蛋白表达。结论 隐丹参酮通过TWEAK/Fn14和TGF-β1/Smads信号通路改善OVA诱导的小鼠气道炎症。

TWEAK促进大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的探讨肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响。方法用胰酶消化法培养新生Wistar大鼠CFs,加入重组人TWEAK(rhTWEAK)干预48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,qRT-PCR检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA,Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果 rhTWEAK作用后CFs的细胞数目明显增加,Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达上调,同时Ⅰ型胶原蛋白表达显著增强。结论 TWEAK具有促进大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。

TWEAK-Fn14轴相关因子在皮肌炎患者中的表达

目的:研究肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)与它的受体成纤维细胞生长诱导因子14(Fn14)及其下游的细胞因子单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、γ-干扰素诱导蛋白10(IP-10)、调节正常T细胞表达和分泌的活性因子(RANTES)、Ro52在皮肌炎(DM)中的表达。方法:免疫组化检测皮肌炎病人与健康对照组皮肤和肌肉中TWEAK、Fn14、MCP-1、RANTES、IP-10、Ro52的表达水平,并进行半定量分析。结果:免疫组化结果显示,皮肌炎患者皮肤中各蛋白的表达水平高于健康对照组;皮肌炎患者肌肉中各蛋白的表达水平高于健康对照组。结论:TWEAK/Fn14信号轴可能参与皮肌炎的发病机制。

TWEAK及其受体Fn14在大鼠骨关节炎(OA)关节软骨和滑膜中的表达

目的检测肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导因子14(fibroblast growth factor inducible 14,Fn14)mRNA及蛋白在大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨和滑膜中的表达情况,初步了解TWEAK及其受体Fn14在OA发病中的作用。方法 42只大鼠中随机选取18只行膝关节前交叉韧带切断(anterior cruciate ligamenttransection,ACLT)制作OA模型作为实验组,另外18只接受手术但不切断前交叉韧带作为假手术组,剩余6只作为正常对照组。饲养至1、2、4周时,实验组及假手术组随机各取6只处死,6只正常对照组在第4周处死,采集所有动物关节软骨及滑膜组织,用实时定量PCR及Western blot分别检测TWEAK和Fn14在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果术后第2和第4周实验组动物关节滑膜中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表达水平显著上调,与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);术后第2周实验组动物关节软骨中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表水平与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TWEAK及其受体Fn14的mRNA及蛋白表达水平在大鼠OA关节软骨及滑膜组织中的表达显著增高,它们可能是参与OA的重要细胞诱导因子。

参苓白术散对肿瘤恶病质患者TNF-α、TWEAK、Fn14表达的影响

目的:观察参苓白术散对肿瘤恶病质患者血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、肿瘤坏死因子弱凋亡诱导剂(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)、成纤维细胞生长诱导因子-14(fibroblast growth factor-inducible 14,Fn14)表达的影响。方法:将64例诊断符合肿瘤恶病质,辨证属于脾气虚证患者,随机分为2组。对照组32例,予以复方氨基酸等营养支持治疗;治疗组32例,在营养支持治疗基础上加用参苓白术散汤剂,水煎服,每日1剂,分3次温服,共用4周。观察治疗前后中医临床证候、生存质量评定(Kanrofsky score,KPS)、TNF-α、TWEAK及其受体早期反应蛋白Fn14。结果:治疗组和对照组脾气虚证患者治疗后比较,中医证候总有效率分别为40.62%和15.62%,治疗组明显优于对照组(P<0.05)。在KPS评分改善率方面,治疗组优于对照组(P<0.05)。2组治疗后TNF-α、TWEAK、Fn14均降低,治疗组治疗前后差异有统计学意义(P<0.05),2组间比较,治疗后治疗组TNF-α、TWEAK、Fn14降低更为显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:参苓白术散与营养支持相联合,可改善肿瘤恶病质患者中医证候,提高患者体力状况,降低患者体内TNF-α、TWEAK、Fn14表达,提示参苓白术散可能通过该途径起到控制肿瘤恶病质发生的作用。

TWEAK和Fn14在腰椎间盘退变髓核组织中的表达及意义

目的研究TWEAK和Fn14在腰椎间盘退变髓核组织中的表达及其临床意义。方法用半定量RT-PCR和免疫组织化学法检测实验组(30例退变腰椎间盘)和对照组(10例创伤腰椎间盘)中TWEAK和Fn14 mRNA及蛋白表达。结果实验组TWEAK mRNA表达显著高于对照组(0.949±0.093 vs 0.653±0.110,P<0.01),实验组TWEAK蛋白表达显著高于对照组(0.682±0.126 vs 0.397±0.057,P<0.01),实验组Fn14 mRNA表达显著高于对照组(0.936±0.125 vs 0.632±0.059,P<0.01),Fn14蛋白表达显著高于对照组(0.540±0.051 vs 0.344±0.072,P<0.01)。结论 TWEAK和Fn14的表达增加可能参与腰椎间盘退变的进程。

Fn14-shRNA慢病毒载体的制备

目的构建Fn14-shRNA慢病毒载体,以进一步进行动物实验,研究Fn14在骨肉瘤中的表达和作用。方法使用RNA干扰技术,构建Fn14干扰载体、病毒包装、感染细胞,并进行鉴定。结果 Fn14-shRNA干扰质粒单酶切验证阳性,测序结果与设计完全一致,干扰组Fn14在稳转细胞株中表达下调。结论成功构建了Fn14-shRNA慢病毒载体,为进一步从分子水平探讨Fn14在骨肉瘤中的生物学作用奠定了基础。

Fn14诱导人皮肤成纤维细胞分泌细胞外基质

目的研究成纤维细胞生长因子诱导分子-14(Fn14)对人皮肤成纤维细胞(HSF)分泌细胞外基质的影响,探讨皮肤纤维化新的干预环节。方法分离HSF,构建Fn14表达载体,将其转染HSF,用Western blot方法检测Fn14、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白表达水平;Real-time PCR(RT-qPCR)检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原(ColⅢ)m RNA表达水平。结果构建的Fn14表达载体可成功转染HSF细胞,并使HSF细胞α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平升高。结论 Fn14能促进HSF胶原的表达,提示其在促进皮肤纤维化的病理过程中起着重要的作用。

TWEAK/Fn14在子宫内膜异位症的表达及意义

目的研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)和成纤维细胞因子诱导14(Fn14)在子宫内膜异位症(EMs)的表达及意义。方法用实时定量逆转录(RT-PCR)和免疫组化检测子宫内膜异位症患者异位病灶(ECE组,22例)、在位内膜(EUE组,26例)中TWEAK和Fn14 mRNA和蛋白的表达,并与正常组(CE组,40例)子宫内膜对比。结果TWEAK/Fn14 mRNA和蛋白均表达于子宫内膜,EMs患者异位病灶的TWEAK的m RNA和蛋白表达均显著低于在位内膜和对照组正常子宫内膜(P<0.05),而Fn14的mRNA和蛋白表达均显著高于在位内膜和对照组正常子宫内膜(P<0.05)。结论 TWEAK低表达可促进子宫内膜间质细胞增生及转移,Fn14高表达可代偿性降低TWEAK,这种异常表达,提示TWEAK/Fn14参与了EMs的发生发展过程。

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中TWEAK及其受体Fn14表达的调节作用

目的:探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及受体成纤维细胞生长因子诱导的早期反应蛋白14(Fn14)表达的调节作用。方法:采用卵清蛋白致敏方法建立经典哮喘模型。将36只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组12只。HE染色评估各组小鼠气道炎症程度;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14mRNA表达水平;采用免疫组化方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14蛋白表达水平。结果:哮喘组小鼠肺组织TWEAK、Fn14 mRNA水平高于对照组(P<0.01),地塞米松组TWEAK、Fn14 mRNA水平低于哮喘组(P<0.01)。TWEAK、Fn14蛋白的表达水平哮喘组较对照组明显升高(P<0.01),地塞米松组表达量较哮喘组明显降低(P<0.01)。结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织中TWEAK及Fn14表达,从而减少气道炎症反应。

Fn14、p-JAK2和p-STAT3在食管鳞癌中的表达及其相关性

目的检测信号分子JAK2/STAT3在食管鳞癌组织样本中的表达,并探讨成纤维细胞生长因子诱导14(Fn14)表达与JAK2/STAT3信号通路的相关性。方法采用免疫组织化学法检测118例食管癌组织及配对正常食管黏膜组织中Fn14、p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达情况。分析Fn14与p-JAK2、p-STAT3蛋白表达的相关性及三者表达与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果 Fn14阳性表达主要定位于细胞膜和胞浆,p-JAK2、p-STAT3阳性表达主要定位于细胞质和胞核。Fn14、p-JAK2、p-STAT3在食管鳞癌中的阳性表达率分别为51.7%(61/118)、50.9%(60/118)、57.6%(68/118),均高于正常食管黏膜鳞状上皮组织的4.2%(5/118),差异有统计学意义(P<0.05)。Fn14、p-JAK2及p-STAT3蛋白表达与分化程度、TNM分期有关(P<0.05),而与性别、年龄均无关(P>0.05)。Fn14与p-JAK2、p-STAT3在食管鳞癌不同分化程度组织中及不同TNM分期中均呈正相关(P<0.05)。结论 Fn14、p-JAK2、p-STAT3在食管鳞癌中高表达,可能与食管鳞癌的发生、发展有关。

Fn14在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨成纤维细胞生长因子诱导分子14（Fn14）在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌患者临床病理特征及预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测118例行根治切除手术的食管癌患者肿瘤组织及配对正常食管鳞状上皮黏膜组织中Fn14蛋白的表达情况。分析Fn14蛋白表达与食管鳞癌患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox风险回归模型评估影响食管鳞癌患者预后的因素。结果 Fn14在食管鳞癌组织中的阳性表达率为51.7%（61/118）,高于正常黏膜组织的4.2%（5/118）,差异有统计学意义（P〈0.001）。食管鳞癌患者Fn14蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期有关（P〈0.05）。Fn14蛋白阳性表达者的中位生存期（OS）为23个月（95%CI：17~29个月）,而Fn14蛋白阴性表达患者的中位OS为54个月（95%CI：50~58个月）,差异有统计学意义（P〈0.001）。Cox多因素回归分析显示,除T分期、N分期外,Fn14蛋白表达亦是食管鳞癌患者预后的独立预测因子（HR=1.51,95%CI：1.02~2.24;P=0.022）。结论Fn14蛋白表达具有重要的临床价值,可作为判断食管鳞癌患者预后的标志物。

肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子及其受体对肝星状细胞迁徙的影响

目的探讨肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)对肝星状细胞迁徙的影响及其机制。方法人源性肝星状细胞株LX-2分别予细胞因子TWEAK处理、特异性下调Fn14(Fn14 siRNA)后加入TWEAK处理,Transwell小室检测肝星状细胞迁徙;real-time PCR及Western Blot检测基质金属蛋白酶(MMP)9的表达量。计量资料两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 TWEAK处理组较正常LX-2细胞迁徙能力增强[(105±8)个vs(164±17)个,t=5.287,P<0.01];下调Fn14后加入TWEAK处理的LX-2细胞迁徙数目较阴性对照组减少[(122±9)个vs(58±7)个,t=9.836,P<0.01];TWEAK处理LX-2细胞后,MMP9的mRNA及蛋白水平增加(P值均<0.05),且存在时间依赖性;下调Fn14并加入TWEAK后LX-2细胞MMP9的mRNA及蛋白表达量减少,与单纯TWEAK处理的LX-2细胞组比较,差异有统计学意义(t=5.358,P<0.01)。结论 TWEAK可通过其受体Fn14上调MMP9促进肝星状细胞迁徙,阻断该通路可能成为治疗肝纤维化的一个潜在的新靶点。