抗纤灵药物血清对骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子-β和Ⅰ型胶原的抑制作用

目的观察抗纤灵药物血清对骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子-β(TGF-β)和Ⅰ型胶原(collagenⅠ)的抑制作用。方法将抗纤灵方煎至含原药材3.2 g/mL,福辛普利配成含药0.33 mg/mL,给大鼠灌胃(正常组给予蒸馏水灌胃),制备抗纤灵血清、福辛普利血清和正常血清。用DMEM培养基稀释血清,将其分为正常血清组、福辛普利组、抗纤灵组、TGF-β1组、TGF-β1+福辛普利组和TGF-β1+抗纤灵组。以大鼠肾组织体外培养骨髓来源的成纤维细胞为材料,采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR法检测骨髓来源的成纤维细胞collagenⅠ和TGF-β的表达。结果加入TGF-β1刺激因子的细胞表达TGF-β和CollagenⅠ较正常大鼠血清组明显增强,抗纤灵及福辛普利药物血清可明显抑制其表达。结论抗纤灵药物血清可以通过抑制骨髓来源的成纤维细胞TGF-β的表达,减少细胞外基质collagenⅠ的沉积,从而延缓肾纤维化的进程。

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1和血小板衍生生长因子-BB蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGFβ1、PDGFBB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGFβ1、PDGFBB含量均明显增多(P<0.01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGFβ1、PDGFBB含量显著降低(P<0.01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGFβ1、PDGFBB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGFβ1、PDGFBB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

P物质对大鼠成纤维细胞转化生长因子β-1及其受体基因表达的影响

目的 :探讨P物质 (substanceP ,SP)作用于离体培养的大鼠肉芽组织成纤维细胞后 ,对成纤维细胞转化生长因子 β- 1(TGFβ - 1)及其受体 - 1/ - 2 (TGFR - 1/R - 2 )基因表达的影响。方法 :采用大鼠肉芽组织成纤维细胞培养和逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,观察SP在不同浓度 (10 -9M～ 10 -5M )及不同孵育时间 (0h ,3h ,6h ,12h ,2 4h)情况下刺激成纤维细胞后 ,成纤维细胞TGFβ - 1/R - 1/R - 2mRNA表达的改变情况。结果 :SP可上调大鼠肉芽组织成纤维细胞TGFβ - 1/R - 1/R - 2mRNA的表达。其剂量 -效应曲线呈双相分布 ,最大效应浓度为 10 -8M。在最大效应浓度 (10 -8M )时 ,SP对大鼠成纤维细胞TGFβ - 1/R - 1/R -2mRNA表达的上调作用分别于刺激细胞后 6h/ 6h/ 12h达高峰。结论 :体外实验结果显示 :SP对大鼠肉芽组织成纤维细胞TGFβ - 1/R - 1/R - 2基因表达存在直接影响 ,其表现形式与SP的刺激浓度及孵育时间有关。这种影响可能是创伤愈合过程中SP影响成纤维细胞增生、分化和瘢痕组织形成的机制之一。

普伐他汀对心脏成纤维细胞转化生长因子-β1合成的影响

目的:探讨普伐他汀对醛固酮诱导新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取和培养心脏成纤维细胞,应用ELISA、Western-blot、RT-PCR的方法分别测定醛固酮、普伐他汀以及甲羟戊酸对心脏成纤维细胞培养液中TGF-β1水平和心脏成纤维细胞TGF-β1mRNA和蛋白质的表达。结果:与正常对照组相比,醛固酮(10-7mol/L)可促进心脏成纤维细胞培养液中TGF-β1水平和心脏成纤维细胞TGFβ-1mRNA和蛋白质的表达,提前给予普伐他汀(10-5,10-4,10-3mol/L)能剂量依赖性地抑制醛固酮的上述作用,同时这种抑制作用可被甲羟戊酸所逆转。结论:普伐他汀可抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-β1mRNA表达以及蛋白质的合成和分泌,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关。

丹参酮ⅡA对心脏成纤维细胞转化生长因子β1/Smads信号通路的作用(英文)

背景:转化生长因子β1通过Smads信号通路刺激心脏成纤维细胞增殖与分化是心肌纤维化最重要的发生机制之一。前期研究证实丹参酮ⅡA能有效抑制心肌纤维化,但是否通过阻断转化生长因子β1/Smads信号通路起作用尚不清楚。目的:观察丹参酮ⅡA对大鼠心脏成纤维细胞内转化生长因子β1信号转导的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法获取新生SD大鼠心脏成纤维细胞,应用5μg/L转化生长因子β1刺激及不同浓度丹参酮ⅡA(10-6,10-5和10-4mol/L)。用反转录聚合酶链反应法和免疫蛋白印迹法分别检测转化生长因子β1刺激后6,12和24h纤维连接蛋白的表达,免疫蛋白印迹法检测转化生长因子β1刺激后15,30,60和120min的Smads蛋白表达。结果与结论:纤维连接蛋白mRNA和蛋白表达量在转化生长因子β1刺激6h后开始呈现上升趋势,至作用24h时分别增加1.3倍和1.8倍(P<0.01);磷酸化Smad2/3蛋白表达量在转化生长因子β1刺激15min后开始上升,1h达到高峰,2h后虽有所下降,但仍较刺激前增加3.9倍(P<0.01)。丹参酮ⅡA(10-5和10-4mol/L)预处理可下调纤维连接蛋白和磷酸化Smad2/3表达(P<0.05或P<0.01),而且效应呈剂量依赖性。由此可知,转化生长因子β1在一定范围内以时间依赖方式诱导纤维连接蛋白及其mRNA和磷酸化Smad2/3表达。丹参酮ⅡA抗心肌纤维化作用可能与其抑制转化生长因子β1诱导的Smad2/3磷酸化,阻断心脏成纤维细胞内转化生长因子β1/Smads信号通路有关。

醛固酮对心脏成纤维细胞转化生长因子β_1的影响

目的探讨醛固酮对心脏成纤维细胞转化生长因子β(1TGF-β1)的影响。方法采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取新生大鼠心脏成纤维细胞,应用ELISA、Western-Blot、RT-PCR的方法分别测定不同条件下心脏成纤维细胞培养液中TGF-β1水平和心脏成纤维细胞中的TGF-β1含量,以及TGF-β1mRNA的表达。结果醛固酮(10-9、10-8和10-7mol/L)可剂量依赖性地促进心脏成纤维细胞TGF-β1mRNA的表达以及TGF-β1的合成和分泌,同时醛固酮(10-7mol/L)以时间依赖的方式促进TGF-β1mRNA的表达,在作用4h后表达开始增加,8h达高峰。提前给予螺内酯(10-6mol/L)能抑制醛固酮(10-7mol/L)的上述作用。结论醛固酮能促使心脏成纤维细胞TGF-β1mRNA的表达以及TGF-β1的合成和分泌,且此作用可能是通过盐皮质激素受体介导的。

低氧对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β_1表达的影响

应用核酸原位杂交及增强化学发光免疫斑点法，观察常氧（Ｎ）、低氧（Ｈ）、常氧和低氧猪肺动脉内皮细胞条 件培养液（ＮＥＣＣＭ和 ＨＥＣＣＭ）对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β_１（ＴＧＦβ_１） ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。结果表 明：Ｈ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ表达为Ｎ组的１．３６倍（Ｐ＜０．０１），同时在其培养上清液中，ＴＧＦβ_１蛋白含量也明显升高为Ｎ 组的１．８倍。ＨＥＣＣＭ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ和蛋白表达较ＮＥＣＣＭ组均下降，ｍＲＮＡ为ＮＥＣＣＭ组的９０％，Ｐ＜０．０１。蛋 白含量为后者的６２．２％。提示：（１）低氧促进入胚肺成纤维细胞合成和分泌ＴＧＦβ_１。（２）在低氧条件下，肺动脉内皮 细胞可能合成某种因子，抑制成纤维细胞ＴＧＦβ_１基因转录和蛋白表达。

阿托伐他汀对心脏成纤维细胞转化生长因子-1表达的影响

目的:探讨阿托伐他汀对心脏成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)合成和分泌的影响。方法:将心脏成纤维细胞分6组培养:空白对照组,醛固酮组(培养液中加入醛固酮,终浓度为1×10-7mol/L),阿托伐他汀预处理Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ组(培养液中加入阿托伐他汀,终浓度分别为1×10-6、1×10-5及1×10-4mol/L,24h后加入醛固酮)及阿托伐他汀+甲羟戊酸组(培养液中加入阿托伐他汀,终浓度为1×10-4mol/L,甲羟戊酸,终浓度为1×10-3mol/L,24h后加入醛固酮)。ELISA法测定培养液中TGF-β1蛋白水平,RT-PCR和WesternBlot法分别测定心脏成纤维细胞中TGF-β1mRNA和蛋白的表达。结果:6组心脏成纤维细胞TGF-β1mRNA表达、蛋白合成和分泌水平差异均有统计学意义(F值分别为104.534,30.405和14.418,P均<0.001)。与空白对照组比较,醛固酮组和阿托伐他汀+甲羟戊酸组TGF-β1mRNA表达量、TGF-β1蛋白表达和分泌水平增加(P均<0.01);阿托伐他汀预处理组上述3个指标低于醛固酮组和阿托伐他汀+甲羟戊酸组(P均<0.01)。结论:阿托伐他汀可能通过甲羟戊酸代谢途径,抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-β1mRNA的表达以及TGF-β1蛋白的合成和分泌。

体外培养人成纤维细胞转化生长因子-β_1自分泌规律的研究

目的 探讨体外培养人成纤维细胞转化生长因子 -β1 (TGF-β1 )的自分泌规律。方法 应用健康人包皮环切术所得包皮 ,通过体外成纤维细胞传代培养共 12代 ,运用 EL ISA法 ,分别检测不同代次成纤维细胞 TGF-β1 浓度 ,并测定第 6代成纤维细胞在不同时间培养上清液中 TGF-β1 的浓度。结果 自第 3代开始 ,成纤维细胞培养上清液可检测到 TGF-β1 ,并逐渐升高 ,至第 6代达分泌高峰 (45 0 ng/ L ) ,第 11、12代不能测到 ;而第 6代成纤维细胞 ,培养上清液中 TGF-β1 含量以第 5天的检测值最高 (6 80 ng/ L ) ,是第 1天检测值 (2 80 ng/ L )的 2 .5倍。结论 成纤维细胞 TGF-β1 自分泌能力 ,是由弱到强再逐渐减弱的过程 。

3I、7b型腺病毒感染对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β_1 mRNA及其蛋白表达的影响

目的探讨3I、7b型腺病毒型感染对体外培养的人胚肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA及其蛋白表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,另设正常细胞组。采用酶联免疫吸附试验及原位杂交法检测各组细胞TGF-β1蛋白及TGF-β1mRNA表达。结果3I、7b型病毒感染组较正常细胞组TGF-β1蛋白及mRNA表达均明显增强(Pa<0.01),而3I、7b型病毒感染组间比较无显著性差异(Pa>0.05)。结论肺成纤维细胞和TGF-β1可能参与腺病毒肺炎的发病过程。

依达拉奉对大鼠心肌成纤维细胞转化生长因子-β_1和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨依达拉奉对过氧化氢(H_2O_2)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法用H_2O_2处理新生大鼠心肌成纤维细胞,制造氧化损伤模型。用H_2O_2损伤模型、siRNA转染TGF-β_1细胞及不同浓度梯度依达拉奉作用于新生大鼠心肌成纤维细胞采用ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的含量,Western blot法检测TGF-β_1的表达。结果第2组(模型组)新生大鼠心肌成纤维细胞TGF-β_1蛋白、胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ表达高于第1组(正常对照组)(P<0.01)。第7组与第2组比较新生大鼠心肌成纤维细胞TGF-β_1蛋白、胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ表达降低(P<0.01)。第3、4、5组与第2组比较显示依达拉奉组较模型组TGF-β_1蛋白、胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ表达降低(P<0.05)。第6组与第1组比较显示TGF-β_1蛋白表达降低(P<0.01)。第8、9、10组与第3、4、5组比较显示TGF-β1蛋白、胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ表达降低(P<0.01)。各转染TGF-β_1组均能显著降低TGF-β_1、胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的表达(P<0.05)。结论依达拉奉通过抑制氧化应激、抑制TGF-β_1表达从而起到抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。

姜黄素对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β受体的影响

目的探讨姜黄素对经转化生长因子β(TGF-β)诱导后人胚肺成纤维细胞TGF-βⅠ、Ⅱ型受体(TGF-βRⅠ、RⅡ)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响,及其与特发性肺纤维化的关系。方法细胞分为正常组、姜黄素组、模型组、治疗组,采用RT-PCR、Western blotting法检测TGF-βRⅠ、RⅡ在人胚肺成纤维细胞的变化。结果模型组TGF-βRⅠ与RⅡ表达增强,治疗组与正常组、模型组相比,TGF-βRⅠ与RⅡ表达明显减弱。结论姜黄素可抑制人胚肺成纤维细胞的胶原沉积,在延缓肺纤维化形成中起一定作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-βRⅠ与RⅡ的表达而实现的。

齐墩果酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞转化生长因子β_1分泌的实验研究

目的探讨齐墩果酸(OA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌成纤维细胞(CFs)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法采用胰酶消化法及差速贴壁法培养大鼠CFs,建立AngⅡ诱导的大鼠心肌间质纤维化体外模型,采用MTT法检测各组CFs增殖活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组CFs上清液中TGF-β1水平。结果与对照组比较,AngⅡ组CFs增殖活性及分泌TGF-β1水平明显增加(P<0.05);60,100μmol/L OA组CFs增殖活性及分泌TGF-β1水平较AngⅡ组明显降低(P<0.05)。结论 OA能抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,其机制可能与抑制TGF-β1分泌有关。

ADAMTS-1对小鼠成纤维细胞转化生长因子及其下游信号通路PI3K/AKT的影响

目的探索含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)对体外小鼠成纤维细胞(NIH3T3)转化生子因子(TGF-β1)及其下游信号通路磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)的影响。方法体外培养小鼠成纤维细胞,以ADAMTS-1为处理因素,按照不同浓度,将NIH3T3分为空白组、低浓度组(1 nM)、中浓度组(10 nM)、高浓度组(20 nM),通过RT-PCR检测细胞TGF-β1mRNA的表达情况,利用Western-blot观察细胞TGF-β1及磷酸化蛋白激酶B(pAKT)的蛋白表达情况。结果根据RTPCR图像显示,与空白组相比,其他各组TGF-β1mRNA的表达均下降,且随着浓度的增高,呈逐渐降低趋势(P<0.05)。根据Western-blot图像显示,与对照组相比,其他各组TGF-β1、pAKT的蛋白表达均下降,且随着浓度的增高,呈逐渐降低趋势(P<0.05)。结论 ADAMTS-1可能下调TGF-β1及其下游PI3K/AKT信号通路。

阿托伐他汀对新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体mRNA的影响(英文)

目的探讨阿托伐他汀对醛固酮诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)mRNA表达的影响。方法采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取和培养乳鼠心脏成纤维细胞,应用RT-PCR检测心脏成纤维细胞TGF-βRⅠmRNA的表达。结果给予醛固酮(10-7mol/L)4h后,TGF-βRⅠmRNA表达开始增加,8h达高峰;提前给予阿托伐他汀(10-6,10-5,10-4mol/L)能剂量依赖性地抑制醛固酮诱导的TGF-βRⅠmRNA表达,而甲羟戊酸可逆转阿托伐他汀的这种抑制作用。结论阿托伐他汀可抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-βRⅠmRNA表达,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关。

罗格列酮对环孢素A作用下大鼠肾脏成纤维细胞转化生长因子-β1和层黏连蛋白表达的影响

目的:观察罗格列酮(RGZ)对环孢素A作用下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)转化生长因子-β1(TGF-β1)和层黏连蛋白(FN)表达的影响,探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性的改善作用及其机制。方法:体外培养NRK细胞,在无血清DMEM低糖培养基同步化24h后,随机分为7组:正常对照组,CsA0.25mg/L组,CsA0.5mg/L组,CsA1.0mg/L组,CsA2.0mg/L组,CsA1.0mg/L加RGZ10μmol/L组,CsA1.0mg/L加RGZ15μmol/L组,继续培养24h后,收集细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组细胞中TGF-β1mRNA表达,用蛋白印迹(Western blotting)方法检测FN蛋白的表达。结果:不同质量浓度的CsA均可促进TGF-β1 mRNA和FN蛋白表达(P<0.05),罗格列酮能显著下调CsA引起的TGF-β1 mRNA和FN蛋白的高表达。结论:罗格列酮可通过下调CsA引起的TGF-β1和FN的高表达,抑制CsA导致的肾脏成纤维细胞外基质的蓄积。

RT-PCR联合凝胶电泳成像技术检测体外培养小鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1的表达

背景:RT-PCR技术是将RNA的反转录和cD NA的聚合酶链反应相结合的技术。常用于检测细胞组织中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cD NA序列等。目的:运用RT-PCR技术检测Stealth siRNA对转化生长因子β1的抑制作用。方法:实验分为空白对照组、空转染组、stealth_48组、stealth_166组和stealth_594组。针对BALB/c小鼠转化生长因子β1基因组,选择不同位点设计3套siRNA基因序列,转染体外培养的小鼠肺成纤维细胞,RT-PCR法检测其对转化生长因子β1和下游结缔组织生长因子表达的影响。结果与结论:(1)RT-PCR结果显示3种Stealth siRNA对转化生长因子β1表达在不同时间有不同程度的抑制作用,以Stealth_166效果更为明显;抑制效果与转染时间长短相关,48 h后就可检测出明显抑制,72 h达到最高峰,96 h后开始减弱;(2)结果说明,RT-PCR技术可用于特异性Stealth siRNA抑制转化生长因子β1在小鼠肺成纤维细胞的表达效果的检测。

核因子Ⅰ-C对血小板源性生长因子调节皮肤成纤维细胞转化生长因子β信号通路的抑制作用

目的:探讨核因子(NF)Ⅰ对血小板源性生长因子(PDGF)增强皮肤成纤维细胞转化生长因子β(TGF-β)信号通路的影响作用。方法:构建NFⅠ-C基因慢病毒载体并且确定慢病毒转染成纤维细胞最佳条件,采用Western印迹法测定PDGF对经NFⅠ-C基因病毒转染后成纤维细胞的TGF-β1及其受体Ⅱ(TβRⅡ)蛋白表达的影响作用。结果:(1)NFⅠ-C慢病毒载体转染皮肤成纤维细胞的最佳转染值为50;(2)皮肤成纤维细胞经NFⅠ-C慢病毒转染后NFⅠ-C蛋白的表达较非病毒转染细胞显著升高(P<0.05);(3)正常皮肤成纤维细胞与PDGF共同培养48 h后TGF-β1和TβRⅡ蛋白表达较空白对照显著升高(P<0.05);(4)皮肤成纤维细胞经NFⅠ-C慢病毒转染后与PDGF共同培养后48 h后TGF-β1和TβRⅡ蛋白表达均较正常对照皮肤成纤维细胞和空病毒转染皮肤成纤维细胞显著降低(P<0.05)。结论:血小板源性生长因子可增强皮肤成纤维细胞TGF-β1和TGF-β受体Ⅱ的表达,而NFⅠ-C表达增加可抑制PDGF增强TβRⅡ表达的作用。

胞内高迁移率族蛋白B1对高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨胞内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞表达转化生长因子-β1(TGF-β1)中的作用。方法:酶消化法分离3周C57/BL6小鼠心脏成纤维细胞,培养并传代,实验使用2～4代细胞,波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色鉴定细胞。高糖培养不同时间(0,6,12,24,48h)后分别检测成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达量。在转染siRNA后再高糖培养心脏成纤维细胞6 h,RT-PCR检测HMGB1、TGF-β1 mRNA的水平。结果:与0h相比,高糖培养6,12,24,48 h后成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达都上调。转染HMGB1 siRNA后高糖培养6 h的成纤维细胞TGF-β1表达下调。结论:HMGB1可能参与调节高糖诱导的心脏成纤维细胞的TGF-β1的表达。