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Tet-on Advanced调控Amelotin基因表达成釉细胞系的建立
1
作者
李东亮
郝建忠
+2 位作者
孙岩
李武修
高玉光
《潍坊医学院学报》
2009年第6期409-412,I0001,共5页
目的应用Tet-on Advanced基因表达系统构建由强力霉素(Dox)诱导Amelotin基因表达的成釉细胞系,为进一步研究Amelotin基因的生物学功能奠定基础。方法通过RT-PCT法从出生后7d的小鼠牙胚中克隆得到Amelotin的全长基因,测序正确后将其亚克...
目的应用Tet-on Advanced基因表达系统构建由强力霉素(Dox)诱导Amelotin基因表达的成釉细胞系,为进一步研究Amelotin基因的生物学功能奠定基础。方法通过RT-PCT法从出生后7d的小鼠牙胚中克隆得到Amelotin的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTRE-Tight载体中,利用Tet-on Advanced基因表达系统先后将调控质粒pTet-on Advanced和反应质粒pTRE-Tight-Amelotin转入成釉细胞,分别用G418和潮霉素进行筛选,克隆扩增得到可诱导表达Amelotin基因的成釉细胞系。用RT-PCR法检测不同Dox浓度下转染成釉细胞中Amelotin基因的表达。结果连续两个回合的转染及筛选后获得了引入pTet-on Advanced系统的细胞系,能够高诱导低背景表达Amelotin,在强力霉素诱导48h可以使Amelotin的表达显著增加,强力霉素在一定浓度范围内可以诱导Amelotin的表达呈剂量依赖性增加。结论成功构建了受强力霉素调控的双重稳定表达Amelotin成釉细胞系,为进一步研究Amelotin与釉质矿化之间的关系奠定了基础。
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关键词
TET-ON
ADVANCED
Amelotin基因
RT-PCR
成釉细胞系
可调控表达
下载PDF
职称材料
强力霉素调控的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced成釉细胞株的建立
2
作者
李东亮
梁广智
+5 位作者
何永云
刘晓影
孙岩
张娟娟
李武修
高玉光
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
北大核心
2010年第1期1-5,共5页
目的:建立可受强力霉素调控的高表达外源基因的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced细胞株,用于基因功能的研究。方法:将质粒pTet-on Advanced转染至成釉细胞系(ALC),用1 000μg/mL的G418筛选抗性克隆。用RT-PCR进行DNA的整合鉴定,并瞬时...
目的:建立可受强力霉素调控的高表达外源基因的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced细胞株,用于基因功能的研究。方法:将质粒pTet-on Advanced转染至成釉细胞系(ALC),用1 000μg/mL的G418筛选抗性克隆。用RT-PCR进行DNA的整合鉴定,并瞬时转染荧光素报告基因(pTRE-Tight-Luc)对pTet-on Advanced阳性克隆株的功能进行鉴定。结果:G418压力筛选后,获得了13个细胞克隆株,RT-PCR检测均表达反义四环素转录激活子(rtTA Advanced),PCR产物测序结果与pTet-on Advanced基因序列一致,表明pTet-on Advanced基因片段已整合进小鼠成釉细胞基因组DNA,荧光素报告基因功能鉴定获得l株诱导表达倍率为22.1的克隆株,且pTet-on Advanced基因阳性的成釉细胞株的形态和生长度与正常成釉细胞没有明显差异。结论:通过脂质体转染的方法成功地获得l株诱导表达倍率为22.1的高表达成釉细胞株,为进一步研究EMPs在成釉细胞中功能打下了基础。
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关键词
转染
诱导表达
tet—on
Advanced系统
成釉细胞系
下载PDF
职称材料
题名
Tet-on Advanced调控Amelotin基因表达成釉细胞系的建立
1
作者
李东亮
郝建忠
孙岩
李武修
高玉光
机构
潍坊医学院口腔医学研究所
潍坊医学院附属青岛市口腔医院
山东科技大学
出处
《潍坊医学院学报》
2009年第6期409-412,I0001,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(课题编号:30672316)
山东省教育厅重点项目(课题编号:J06L22)
文摘
目的应用Tet-on Advanced基因表达系统构建由强力霉素(Dox)诱导Amelotin基因表达的成釉细胞系,为进一步研究Amelotin基因的生物学功能奠定基础。方法通过RT-PCT法从出生后7d的小鼠牙胚中克隆得到Amelotin的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTRE-Tight载体中,利用Tet-on Advanced基因表达系统先后将调控质粒pTet-on Advanced和反应质粒pTRE-Tight-Amelotin转入成釉细胞,分别用G418和潮霉素进行筛选,克隆扩增得到可诱导表达Amelotin基因的成釉细胞系。用RT-PCR法检测不同Dox浓度下转染成釉细胞中Amelotin基因的表达。结果连续两个回合的转染及筛选后获得了引入pTet-on Advanced系统的细胞系,能够高诱导低背景表达Amelotin,在强力霉素诱导48h可以使Amelotin的表达显著增加,强力霉素在一定浓度范围内可以诱导Amelotin的表达呈剂量依赖性增加。结论成功构建了受强力霉素调控的双重稳定表达Amelotin成釉细胞系,为进一步研究Amelotin与釉质矿化之间的关系奠定了基础。
关键词
TET-ON
ADVANCED
Amelotin基因
RT-PCR
成釉细胞系
可调控表达
Keywords
Tet-on advanced
Amelotin gene
RT-PCR
Ameloblast-lineage cell ( ALC)
Regulatable expression
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
强力霉素调控的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced成釉细胞株的建立
2
作者
李东亮
梁广智
何永云
刘晓影
孙岩
张娟娟
李武修
高玉光
机构
潍坊医学院口腔医学院
山东科技大学
出处
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
北大核心
2010年第1期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金项目资助(30672316)
山东省教育厅重点项目(J06L22)
文摘
目的:建立可受强力霉素调控的高表达外源基因的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced细胞株,用于基因功能的研究。方法:将质粒pTet-on Advanced转染至成釉细胞系(ALC),用1 000μg/mL的G418筛选抗性克隆。用RT-PCR进行DNA的整合鉴定,并瞬时转染荧光素报告基因(pTRE-Tight-Luc)对pTet-on Advanced阳性克隆株的功能进行鉴定。结果:G418压力筛选后,获得了13个细胞克隆株,RT-PCR检测均表达反义四环素转录激活子(rtTA Advanced),PCR产物测序结果与pTet-on Advanced基因序列一致,表明pTet-on Advanced基因片段已整合进小鼠成釉细胞基因组DNA,荧光素报告基因功能鉴定获得l株诱导表达倍率为22.1的克隆株,且pTet-on Advanced基因阳性的成釉细胞株的形态和生长度与正常成釉细胞没有明显差异。结论:通过脂质体转染的方法成功地获得l株诱导表达倍率为22.1的高表达成釉细胞株,为进一步研究EMPs在成釉细胞中功能打下了基础。
关键词
转染
诱导表达
tet—on
Advanced系统
成釉细胞系
Keywords
transfection
inducible expression
tet-on advanced systerm
ameloblast-linege cell
分类号
R780.1 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Tet-on Advanced调控Amelotin基因表达成釉细胞系的建立
李东亮
郝建忠
孙岩
李武修
高玉光
《潍坊医学院学报》
2009
0
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职称材料
2
强力霉素调控的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced成釉细胞株的建立
李东亮
梁广智
何永云
刘晓影
孙岩
张娟娟
李武修
高玉光
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
北大核心
2010
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