大鼠毛囊干细胞的成骨及成脂诱导

目的毛囊干细胞在体外培养下可向软骨、骨骼、脂肪等细胞分化。文中研究毛囊干细胞的培养方法及其成脂和成骨分化的能力。方法采用显微分离技术联合两步酶消化法获得毛囊干细胞,差速贴壁法对毛囊干细胞进行提纯,利用体积分数10%胎牛血清的角质细胞无血清培养基进行培养,应用流式技术对干细胞进行CD34、β1整合素、CK15检测。第3代毛囊干细胞分别使用成骨及成脂诱导液进行培养。结果培养后的毛囊干细胞形态均匀一致,折光性强,呈典型的"铺路石"状,流式细胞仪检测CD34、β1整合素、CK15分别表达为59.6%、97.2%、61.1%,第3代细胞生长曲线显示细胞生长情况良好。经成骨诱导21 d后茜素红染色可见钙结节形成,成脂诱导14 d后油红O染色后可见脂滴形成。结论培养的毛囊干细胞具有很强的生长活性,并具有多向分化的潜能。

膜联蛋白A1在兔骨髓间充质干细胞体外诱导成骨和成脂早期的表达

背景:骨髓间充质干细胞分化过程中膜联蛋白A1表达变化的研究报道各有不同看法。目的:分析兔骨髓间充质干细胞在体外诱导成骨和成脂过程中膜联蛋白A1基因的表达变化。方法:应用全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,分别加入含成骨诱导剂、成脂诱导剂及不添加任何诱导剂的培养基进行培养。结果与结论:膜联蛋白A1基因在成骨诱导过程中与未诱导细胞相比有明显下调趋势,差异有显著性意义(P<0.01),而在成脂诱导剂中则为上升(P<0.01)。成骨诱导剂对细胞生长存在抑制作用并增加细胞凋亡(P<0.01),而成脂诱导剂对细胞生长与凋亡作用较小(P>0.05)。因此排除了诱导剂对细胞的作用之后,推测膜联蛋白A1基因可能与骨髓间充质干细胞体外向脂肪细胞分化存在一定关系,但尚不能肯定其在成骨分化中的作用。

补肾中药对老化间充质干细胞内外微环境改变及其分化方向调控的影响

目的探究补肾中药(金匮肾气丸、健骨二仙丸、六味地黄丸)对老化间充质干细胞内外微环境改变及其分化方向调控的影响。方法全骨髓贴壁法培养干细胞,300μmol/L H2O2处理以建立氧化衰老模型,实时荧光定量PCR法检测成骨相关因子骨钙蛋白(OCN)、I型胶原、骨形成转录因子(DXL5)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、Runt相关转录因子2(Runx2)、成脂分化相关因子过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ2)、C/EBPβ共同激活因子PDA-结合蛋白模体(TAZ)mRNA表达,Western blot法检测成脂诱导中TAZ蛋白表达。结果与模型组比较,各补肾中药组均可显著上调OCN、DXL5、OSX、RunX2、TAZ mRNA表达(P<0.05),显著下调PPARγ2、C/EBPβmRNA表达(P<0.05);金匮肾气丸、六味地黄丸组TAZ蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论补肾中药可通过改变细胞内外微环境,上调成骨因子OCN、DXL5、OSX、RunX2、TAZ mRNA表达,下调成脂因子PPARγ2、C/EBPβmRNA表达,从而促进老化间充质干细胞成骨分化,抑制成脂分化。