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微小核糖核酸-149-5p对人瓣膜间质细胞成骨样分化影响的研究
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作者 张帆 姚可欣 +3 位作者 张燕红 洪诗瑶 靳姝慧 张聪聪 《心肺血管病杂志》 CAS 2024年第5期486-492,共7页
目的:观察微小RNA(miR)-149-5p对瓣膜钙化细胞模型的影响,探讨其可能的机制。方法:收集正常瓣膜组织和钙化瓣膜组织并提取RNA,检测miR-149-5p及钙化相关基因Runt及转录因子2(Runt related transcription factor 2,RUNX2)的表达水平,并... 目的:观察微小RNA(miR)-149-5p对瓣膜钙化细胞模型的影响,探讨其可能的机制。方法:收集正常瓣膜组织和钙化瓣膜组织并提取RNA,检测miR-149-5p及钙化相关基因Runt及转录因子2(Runt related transcription factor 2,RUNX2)的表达水平,并分析相关性;培养原代人瓣膜间质细胞(human valve interstitial cells,hVICs),更换成骨样分化诱导培养基(osteogenic differentiation medium,OM)培养14天,茜红素染色检测细胞成骨样分化程度,realtime-PCR检测miR-149-5p表达水平;进而将hVICs分为三组:对照组,NC+OM组和miR-149-5p+OM组,后两组分别转染NC mimic和miR-149-5p mimic;realtime-PCR检测细胞中成骨样分化标志基因OCN、ALPP和靶基因的mRNA表达水平,TargetScan和miRDB数据库预测miR-149-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p对靶基因的靶向关系。结果:与无钙化的相比,钙化的主动脉瓣膜组织中miR-149-5p的表达量显著下降,而且与RUNX2的表达量成负相关(均为P<0.05);hVICs诱导成骨样分化后茜红素染色阳性区域显著增加,同时miR-149-5p的表达逐渐下调(P<0.05);miR-149-5p mimic转染hVICs后,miR-149-5p+OM组细胞内miR-149-5p的表达较NC+OM组显著上调。miR-149-5p+OM组的hVICs中钙含量、OCN和ALPP的表达均低于NC+OM组(P<0.05)。TargetScan数据库预测结果显示miR-149-5p可与促成骨样分化的基因IL6的3’-UTR区结合;双荧光素酶报告基因实验显示miR-149-5p可抑制IL6报告基因活性(P<0.05),而报告基因突变后抑制作用消失;miR-149-5p+OM组hVICs中IL6的表达显著下调(P<0.05)。结论:miR-149-5p可能通过靶向抑制促钙化因子IL-6的表达,在主动脉瓣膜钙化中发挥保护性作用。 展开更多
关键词 主动脉瓣钙化 瓣膜间质细胞 分化 微小核糖核酸
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低浓度氟化钠对人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化的影响 被引量:1
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作者 李莉芬 韩俊力 江龙 《口腔疾病防治》 2024年第1期22-28,共7页
目的探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成骨/成牙本质分化的影响。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。原代培养hDPCs,采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响;选取合适浓度的氟化钠加入成骨/... 目的探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成骨/成牙本质分化的影响。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。原代培养hDPCs,采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响;选取合适浓度的氟化钠加入成骨/成牙本质分化诱导培养液中,对hDPCs进行体外诱导,通过茜素红染色检测hDPCs成骨/成牙本质分化能力的变化,RT⁃qPCR检测分化相关基因的mRNA表达;同时通过RT⁃qPCR和Western blot检测hDPCs成骨/成牙本质分化过程中内质网应激相关基因的表达。结果低浓度氟化钠(0.1 mmol/L)在体外可刺激hDPCs增殖,高浓度氟化钠(5~10 mmol/L)可抑制hDPCs增殖(P<0.05)。选取0.1 mmol/L氟化钠体外混合成骨/成牙本质分化诱导培养后hDPCs的茜素红染色增加,成骨/成牙本质分化相关基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)mRNA表达水平升高(P<0.05)。同时在此过程中RT⁃qPCR检测出mRNA水平hDPCs内质网应激相关基因:剪切x盒结合蛋白1(splicing x⁃box binding protein⁃1,sXBP1)、葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)以及活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达升高(P<0.05);Western blot检测出氟化钠混合成骨/成牙本质分化培养后细胞磷酸化真核起始因子⁃2α(phosphorylated eukary⁃otic initiation factor⁃2α,p⁃eIF2α)、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated the RNA⁃activated protein kinase⁃like ER⁃resident kinase,p⁃PERK)和ATF4蛋白表达增加(P<0.05)。结论低剂量氟化钠促进人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化并伴有内质网应激水平的升高。 展开更多
关键词 人牙髓细胞 氟化钠 增殖 /牙本质分化 内质网应激 剪切X盒结合蛋白1 活化转录因子4 葡萄糖调节蛋白78 蛋白激酶内质网激酶 真核起始因子⁃2α
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IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用
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作者 李冬 董晓俊 徐成栋 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期668-672,共5页
目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐... 目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);但与IGF-1组比较,PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论IGF-1促进C3H10T1/2细胞成骨分化,其作用机制可能与激活ERK信号通路和p38 MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 胰岛素生长因子1 丝裂原活化蛋白激酶信号通路 C3H10T1/2细胞 分化
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青娥丸提取物对成骨样细胞UMR106增殖分化作用的研究 被引量:11
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作者 熊志立 郭兴杰 +1 位作者 许勇 李发美 《中药药理与临床》 CAS CSCD 2002年第4期3-5,共3页
目的 :研究青娥丸提取物对成骨样细胞UMR10 6增殖分化的作用 ,筛选青娥丸防治骨质疏松的有效部位。方法 :利用MTT法和对硝基磷酸盐法 ,考察青娥丸不同提取液对UMR10 6的增殖和分化作用。结果 :青娥丸乙醇提取物在 4.8× 10 -4mg/ml... 目的 :研究青娥丸提取物对成骨样细胞UMR10 6增殖分化的作用 ,筛选青娥丸防治骨质疏松的有效部位。方法 :利用MTT法和对硝基磷酸盐法 ,考察青娥丸不同提取液对UMR10 6的增殖和分化作用。结果 :青娥丸乙醇提取物在 4.8× 10 -4mg/ml和 4.8× 10 -3 mg/ml浓度时 ,有最强的促细胞增殖和分化的活性 ,萃取后的各个部分均有显著地促细胞增殖作用 ,而只有乙酸乙酯层具有显著的促细胞分化作用。结论 :青娥丸乙醇提取物具有显著促细胞增殖和分化的活性 ,乙酸乙酯层是青娥丸促细胞增殖和分化的主要活性部位。 展开更多
关键词 青娥丸提取物 成骨样细胞unr106 细胞增殖 细胞分化 质疏松 动物实验
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BMP9调控Notch、TLR4信号通路诱导主动脉瓣间质细胞成骨样分化
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作者 钱磊 季爱华 张文剑 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2288-2293,共6页
目的:探究骨形态发生蛋白9(BMP9)调控Notch、Toll样受体-4(TLR4)信号通路诱导主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)成骨样分化的作用机制。方法:将患者分为非钙化性主动脉瓣疾病(non-CAVD)组和CAVD组,免疫组化和Western blot检测患者BMP9、Runx2... 目的:探究骨形态发生蛋白9(BMP9)调控Notch、Toll样受体-4(TLR4)信号通路诱导主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)成骨样分化的作用机制。方法:将患者分为非钙化性主动脉瓣疾病(non-CAVD)组和CAVD组,免疫组化和Western blot检测患者BMP9、Runx2蛋白表达水平。取健康家猪主动脉瓣叶并分离AVICs,免疫荧光染色对其进行表型鉴定;采用BMP9干扰载体及BMP9腺病毒处理AVICs,分为对照组(control组)、干扰对照组(si-control)组、si-BMP9组、携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒(Ad)组(Ad-GFP组)和Ad-BMP9组,并建立体外AVICs钙化模型;采用碱性磷酸酶(ALP)染色、雄激素受体(AR)染色检测细胞早期和晚期的成骨分化能力;qRT-PCR检测Runx2、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN) mRNA表达;Western blot检测Runx2、OPN、OCN、BMP9、Notch2、Notch胞内域(NICD)、发状分裂相关增强子1(Hes1)、TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结果:与non-CAVD组相比,CAVD组中BMP9和Runx2蛋白明显升高(P<0.05)。原代猪AVICs分离成功,其中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Vimentin呈阳性表达,血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1,CD31)呈阴性表达。敲减BMP9后,AVICs中BMP9、Runx2、OCN、OPN mRNA水平、早期及晚期成骨分化能力及BMP9、Runx2、OCN、OPN、Notch2、NICD、Hes1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均下降(P<0.05);过表达BMP9后,AVICs中BMP9、Runx2、OCN、OPN mRNA水平,早期及晚期成骨分化能力,BMP9、Runx2、OCN、OPN、Notch2、NICD、Hes1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均升高(P<0.05)。结论:BMP9能够促进AVICs的成骨样分化,这一作用机制可能与Notch和TLR4信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 钙化性主动脉瓣膜病 主动脉瓣膜间质细胞 形态发生蛋白9 NOTCH TOLL受体-4 分化
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乳酸对成骨样细胞成骨表型及碱性磷酸酶基因表达的影响研究
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作者 刘艳军 徐永平 +2 位作者 李淑英 罗祥林 陈元维 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1100-1105,1128,共7页
目的明确聚乳酸降解终产物乳酸对细胞成骨表型和基因表达的影响机理,为聚乳酸支架的精确设计提供参考意义。方法配制乳酸浓度为8、16、22、27 mmol/L的培养基,将不含乳酸培养基作为对照组,检测培养基的pH和渗透压。利用培养基培养大鼠... 目的明确聚乳酸降解终产物乳酸对细胞成骨表型和基因表达的影响机理,为聚乳酸支架的精确设计提供参考意义。方法配制乳酸浓度为8、16、22、27 mmol/L的培养基,将不含乳酸培养基作为对照组,检测培养基的pH和渗透压。利用培养基培养大鼠成骨样细胞Ros17/2.8,观察细胞形态,测定细胞Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和骨钙素含量,盐酸四环素染色钙结节并定量分析。采用实时定量PCR法检测细胞ALP mRNA表达。结果与对照组相比,随着乳酸浓度增加,培养基pH下降,渗透压升高,成骨样细胞形态改变,数量减少。低浓度乳酸组(8、16 mmol/L)的Ⅰ型胶原量都显著高于对照组,其余组与对照组相比无显著差异。含乳酸组的细胞ALP活性都低于对照组,并且乳酸浓度越高,细胞ALP活性越低。含乳酸组的骨钙素量与对照组之间没有显著差异。随着乳酸浓度增加,含乳酸组细胞所形成的钙结节阳性面积减少,都低于对照组。低浓度乳酸组(8、16 mmol/L)的细胞ALP mRNA表达量都低于对照组。结论聚乳酸降解终产物乳酸可抑制细胞ALP mRNA的表达,降低ALP活性。随着乳酸浓度增加,乳酸抑制作用增强,最终降低细胞的成骨矿化能力。此外,乳酸不会抑制细胞分泌I型胶原和骨钙素。 展开更多
关键词 聚乳酸 乳酸 细胞 表型 基因表达
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中药固真方对成骨样细胞UMR106增殖分化的影响 被引量:3
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作者 俞文华 刘晓军 +2 位作者 陆通 李刚 李平风 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第3期400-402,共3页
中药固真方具有补肾益精、延缓衰老的作用 .为了进一步探讨其作用机理 ,研究观察了固真方对成骨样细胞 UMR1 0 6DNA合成、原癌基因 c- fos,c- ki- ras m RNA表达以及骨钙素 (osteocal-cin)基因 m RNA表达的影响 .结果表明 :固真方可明... 中药固真方具有补肾益精、延缓衰老的作用 .为了进一步探讨其作用机理 ,研究观察了固真方对成骨样细胞 UMR1 0 6DNA合成、原癌基因 c- fos,c- ki- ras m RNA表达以及骨钙素 (osteocal-cin)基因 m RNA表达的影响 .结果表明 :固真方可明显促进 DNA合成 ,且在 1 0 -5稀释度时达高峰 ;增殖相关的原癌基因 (c- fos,c- ki- ras) m RNA表达增强 ;成熟成骨细胞特征性标志蛋白——骨钙素基因 m RNA表达增强 .结果提示 :中药固真方可能通过影响一些与增殖相关的原癌基因及骨钙素基因表达而促成骨样细胞 UMR1 0 展开更多
关键词 固真方 增殖分化 细胞 延缓衰老药 中药
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黄芪甲苷和柚皮苷对成骨样细胞增殖迁移及成骨分化的影响
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作者 韩萌 高维诺 +2 位作者 张红艳 韩燕 郭立华 《口腔颌面修复学杂志》 2023年第6期401-406,共6页
目的:观察黄芪甲苷和柚皮苷两种中药单体对人成骨样细胞MG-63增殖、迁移和成骨分化的影响。方法:应用CCK-8法观察两种单体对MG-63细胞增殖的影响;应用Transwell小室观察两种中药单体对MG-63细胞迁移的影响;应用茜素红染色法观察两种中... 目的:观察黄芪甲苷和柚皮苷两种中药单体对人成骨样细胞MG-63增殖、迁移和成骨分化的影响。方法:应用CCK-8法观察两种单体对MG-63细胞增殖的影响;应用Transwell小室观察两种中药单体对MG-63细胞迁移的影响;应用茜素红染色法观察两种中药单体对细胞成骨分化的影响,应用Western Blot和qRT-PCR检测两种中药单体对成骨相关标志物I型胶原COL-I和骨钙素BGP mRNA与蛋白表达的影响。结果:黄芪甲苷和柚皮苷均能明显促进MG-63细胞增殖(P<0.01),柚皮苷的作用强于黄芪甲苷(P<0.05);黄芪甲苷和柚皮苷均能促进MG-63细胞的迁移(P<0.01),黄芪甲苷对细胞迁移能力的作用要强于柚皮苷(P<0.01);黄芪甲苷和柚皮苷均具有促进MG-63细胞成骨分化的作用,二者比较未见明显差异;黄芪甲苷和柚皮苷均能提高COL-I的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),均不影响BGP的表达水平,两种药物比较未见明显差异。结论:本研究中黄芪甲苷与柚皮苷对成骨样细胞增殖迁移和成骨均有促进作用,但柚皮苷促进细胞增殖作用明显,黄芪甲苷促进细胞迁移作用明显,两种药物对细胞成骨分化的影响未见明显差异。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 柚皮苷 细胞 增殖 迁移
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含密骨颗粒剂血清对UMR106成骨样细胞增殖及PKC活性的影响 被引量:7
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作者 谷野 郑洪新 《辽宁中医杂志》 CAS 2003年第7期575-577,共3页
目的 :探讨补肾中药抗骨质疏松的作用机制。方法 :采用血清药理学的方法 ,评价不同浓度下的含密骨颗粒剂血清对UMR10 6成骨样细胞的蛋白激酶C活性、亚型表达及增殖情况的影响。结论 :含密骨颗粒剂的血清可使UMR10 6成骨样细胞中PKC活性... 目的 :探讨补肾中药抗骨质疏松的作用机制。方法 :采用血清药理学的方法 ,评价不同浓度下的含密骨颗粒剂血清对UMR10 6成骨样细胞的蛋白激酶C活性、亚型表达及增殖情况的影响。结论 :含密骨颗粒剂的血清可使UMR10 6成骨样细胞中PKC活性增强 ,且主要以cPKCβ 为主 。 展开更多
关键词 颗粒剂 血清药理学 细胞UMRl06 PKC 补肾中药 质疏松作用
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壳多糖酶3样蛋白1对人脐带来源间充质干细胞成脂和成骨分化的调控作用
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作者 李曼 刘伟江 +6 位作者 袁福临 白海涛 李雪 王洋 刘元林 焦宏 张毅 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期583-591,共9页
目的探讨壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)对人脐带来源间充质干细胞(hUC-MSC)成脂和成骨分化的调控作用。方法复苏并培养hUC-MSC,流式细胞术检测细胞表面标志物CD14,CD34,CD45,CD73,CD90和CD105;成脂和成骨诱导分化后,油红O染色和碱性磷酸酶(A... 目的探讨壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)对人脐带来源间充质干细胞(hUC-MSC)成脂和成骨分化的调控作用。方法复苏并培养hUC-MSC,流式细胞术检测细胞表面标志物CD14,CD34,CD45,CD73,CD90和CD105;成脂和成骨诱导分化后,油红O染色和碱性磷酸酶(ALP)染色检测体外成脂和成骨分化能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成脂和成骨关键转录因子mRNA表达,即脂肪酶(ADI)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)mRNA表达及ALP和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达。利用慢病毒载体构建稳定敲低CHI3L1的hUC-MSC(shCHI3L1-MSC)和对照hUC-MSC(shNC-MSC),同上鉴定其生物学特征。shCHI3L1-MSC和shNC-MSC体外成脂诱导分化后,油红O染色检测细胞内脂滴数目,RT-qPCR检测ADI和PPAR-γmRNA表达;成骨诱导分化后,ALP染色检测ALP染色面积,RT-qPCR检测ALP和OPN mRNA表达。结果培养的hUC-MSC高表达CD73,CD90和CD105,低表达或不表达CD14,CD34和CD45;成骨诱导分化后,与未诱导组相比,诱导组ALP活性增加,ALP和OPN mRNA表达显著增加(P<0.01);成脂诱导分化后,经油红O染色,诱导组出现大量红色脂滴,ADI和PPAR-γmRNA表达显著增加(P<0.01)。敲低CHI3L1基因,hUC-MSC表面标志物、成脂和成骨分化能力生物学特性未发生改变。shNC-MSC和shCHI3L1-MSC成脂和成骨诱导分化后,shCHI3L1-MSC诱导组脂滴数及ADI和PPAR-γmRNA表达均显著高于shNC-MSC(P<0.01),ALP活性及ALP和OPN mRNA表达均显著低于shNC-MSC(P<0.01),提示hUC-MSC敲低CHI3L1基因后成脂分化能力增强,成骨分化能力降低。结论CHI3L1参与hUC-MSC体外成脂和成骨分化调控。 展开更多
关键词 间充质干细胞 壳多糖酶3蛋白1 脂诱导分化 诱导分化
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补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的影响(I) 被引量:30
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作者 高晓燕 杜晓鹃 赵春颖 《承德医学院学报》 2001年第4期283-285,共3页
目的 :探索补肾中药对成骨样细胞 UMR10 6增殖的作用。方法 :用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞 UMR10 6共同体外培养 ,以 MTT法检测细胞的增殖。结果 :在所筛选的 7种补肾中药中 ,仙茅 ,地骨皮、牛膝、山茱萸对成骨样细胞的增殖具... 目的 :探索补肾中药对成骨样细胞 UMR10 6增殖的作用。方法 :用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞 UMR10 6共同体外培养 ,以 MTT法检测细胞的增殖。结果 :在所筛选的 7种补肾中药中 ,仙茅 ,地骨皮、牛膝、山茱萸对成骨样细胞的增殖具有显著的促进作用。结论 :补肾中药可通过促进成骨细胞的增殖来发挥健骨及抗骨质疏松的作用。 展开更多
关键词 补肾中药 细胞UMR106 细胞增殖 MTT法 质疏松症
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补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的影响(Ⅱ) 被引量:12
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作者 高晓燕 孟艳彬 赵春颖 《承德医学院学报》 2002年第1期7-9,共3页
目的 :探索补肾中药对成骨样细胞 UMR10 6增殖的作用。方法 :用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞 UMR10 6共同体外培养 ,以 MTT法检测细胞的增殖。结果 :在所筛选的 15种补肾中药中 ,骨脂、蛇床子、锁阳对成骨样细胞的增殖具有显著... 目的 :探索补肾中药对成骨样细胞 UMR10 6增殖的作用。方法 :用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞 UMR10 6共同体外培养 ,以 MTT法检测细胞的增殖。结果 :在所筛选的 15种补肾中药中 ,骨脂、蛇床子、锁阳对成骨样细胞的增殖具有显著的促进作用。结论 展开更多
关键词 补肾中药 细胞UMR106 细胞增殖 MTT法 质疏松症 实验
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miR-23b-3p调控肾间质成纤维细胞成骨样分化参与Randall斑形成的机制研究 被引量:1
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作者 雷波 邱明星 刘健男 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第12期2064-2072,共9页
目的探究miR-23b-3p对肾间质成纤维(hRIFs)细胞成骨样分化和Randall斑形成的影响及其可能机制。方法采用qRT-PCR技术检测草酸钙(CaOx)结石患者Randall斑组织(RP)和接受肾切除术的肾肿瘤患者正常乳头状组织(nRP)的miR-23b-3p和肌细胞特... 目的探究miR-23b-3p对肾间质成纤维(hRIFs)细胞成骨样分化和Randall斑形成的影响及其可能机制。方法采用qRT-PCR技术检测草酸钙(CaOx)结石患者Randall斑组织(RP)和接受肾切除术的肾肿瘤患者正常乳头状组织(nRP)的miR-23b-3p和肌细胞特异性增强子因子2C(MEF2C)、成骨标志物人骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达水平;体外分离、培养hRIFs细胞,将miR-23b-3p过表达质粒pSi-miR-23b-3p及空载质粒pSi-NC和MEF2C慢病毒过表达质粒Lv-MEF2C及空载质粒Lv-NC转染至hRIFs细胞中,并诱导细胞成骨分化14 d;ELISA法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色观察各组细胞矿化结节形成情况;qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和MEF2C、OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;Western blot检测细胞中MEF2C蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p与MEF2C的靶向关系。结果①与nRP组比较,RP组中miR-23b-3p低表达,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA高表达;②hRIFs成骨诱导14 d后,细胞中ALP活性升高,矿化结节形成能力增强,miR-23b-3p表达水平降低,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA表达水平及MEF2C蛋白表达水平升高;③miR-23b-3p过表达降低成骨诱导后hRIFs细胞中ALP活性,抑制细胞矿化结节形成能力,下调细胞中OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;④MEF2C过表达可逆转miR-23b-3p过表达对hRIFs细胞成骨分化的抑制作用;⑤MEF2C是miR-23b-3p下游靶基因。结论miR-23b-3p在RP组织及hRIFs细胞成骨样分化过程中低表达,上调miR-23b-3p可抑制hRIFs细胞的成骨样分化,其作用机制可能与靶向沉默MEF2C有关。 展开更多
关键词 miR-23b-3p 人肾间质纤维细胞 细胞增强因子2C 分化 Randall斑 草酸钙结石
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miR-100调节IGF1R/mTOR信号通路对牙周炎牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响
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作者 陈婉红 蔡世雄 苏江凌 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期173-180,共8页
目的:探究MicroRNA-100(miR-100)对牙周炎牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖和成骨分化的影响及潜在机制。方法:丝线结扎法构建牙周炎大鼠模型,建模后分为模型组、NC-agomir组、miR-100 agomir组、NC-antagomir组和miR-100 antagomir组(n=10),另... 目的:探究MicroRNA-100(miR-100)对牙周炎牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖和成骨分化的影响及潜在机制。方法:丝线结扎法构建牙周炎大鼠模型,建模后分为模型组、NC-agomir组、miR-100 agomir组、NC-antagomir组和miR-100 antagomir组(n=10),另取10只大鼠为对照组。体外培养PDLSCs,分为对照组、TNF-α组、miR-100-NC+TNF-α组、miR-100 mimics+TNF-α组、miR-100 inhibitor+TNF-α组、miR-100 mimics+TNF-α+Oe-NC组、miR-100 mimics+TNF-α+Oe-IGF1R组。细胞经相应处理后检测有关因子表达。结果:上调miR-100可显著降低牙周炎大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平和牙周组织IGF1R和mTOR的mRNA水平(P<0.05),减轻牙周组织病变,而下调miR-100表现出相反作用。在PDLSCs中,miR-100过表达可显著抑制IGF1R和mTOR表达,上调Cyclin E1、Cyclin D1及分化相关蛋白八聚体结合转录因子4(Oct4)、性别决定区Y-box2(Sox2)、Runt相关转录因子2(Runx2)表达,促进炎性微环境下PDLSCs增殖和成骨分化(P<0.05);而下调miR-100表现出相反作用;且过表达IGF1R可减弱miR-100过表达对TNF-α诱导的PDLSC增殖和成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论:过表达miR-100可能通过抑制IGF1R/mTOR信号通路促进牙周炎PDLSCs的增殖和成骨分化。 展开更多
关键词 MicroRNA-100 牙周炎 牙周膜干细胞 分化 胰岛素生长因子1受体/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
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几种生药的提取部位对成骨样细胞的增殖作用 被引量:37
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作者 殷军 王大为 +2 位作者 李发美 陈英杰 姜志明 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2001年第4期279-282,共4页
考察了石斛、骨碎补、地骨皮、槲寄生的不同提取部位对成骨样细胞UMR10 6的增殖作用。将 4种生药的水提液、乙醇提取液及其经树脂柱洗脱后的不同提取部位与UMR10 6成骨样细胞共同体外培养 ,用MTT法检测各部位对细胞的增殖作用。结果表... 考察了石斛、骨碎补、地骨皮、槲寄生的不同提取部位对成骨样细胞UMR10 6的增殖作用。将 4种生药的水提液、乙醇提取液及其经树脂柱洗脱后的不同提取部位与UMR10 6成骨样细胞共同体外培养 ,用MTT法检测各部位对细胞的增殖作用。结果表明 :除石斛的活性部位在 6 0 %、90 %的醇层外 ,骨碎补、地骨皮、槲寄生的活性部位集中在水层、30 %的醇层。 展开更多
关键词 石斛 碎补 槲寄生 细胞UMR106 MTT法 细胞增殖 质疏松 中药
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杜仲对成骨样细胞增殖的作用 被引量:47
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作者 王大为 高晓燕 +1 位作者 李发美 姜志明 《中药药理与临床》 CAS CSCD 2000年第4期24-26,共3页
杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR1 0 6成骨样细胞体外共同培养 ,用MTT法检测细胞增殖 ,结果水提液在 0 4mg/ml培养 48小时具有最强的促进细胞增殖作用 ,其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对细胞增殖有一定促进作用 ,但无显著性差... 杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR1 0 6成骨样细胞体外共同培养 ,用MTT法检测细胞增殖 ,结果水提液在 0 4mg/ml培养 48小时具有最强的促进细胞增殖作用 ,其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对细胞增殖有一定促进作用 ,但无显著性差异 ,而乙酸乙酯和正丁醇萃取后的剩余水层仍保留与原水提液相似的促进细胞增殖作用。表明杜仲中极性大部位可能含有直接作用于成骨细胞的活性成分。 展开更多
关键词 杜仲 细胞增殖作用 细胞 UMR106 MTT法 细胞增殖
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牛膝中脱皮甾酮的含量测定及促成骨样细胞增殖活性 被引量:41
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作者 高晓燕 王大为 李发美 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期868-870,共3页
AIM To study the activity of ecdysterone from Achyranthes bidentata Bl. (AB) promoting proliferation of osteoblast like (OB like) UMR106 cells and to determine its content in AB by HPLC method. METHODS Ecdysterone iso... AIM To study the activity of ecdysterone from Achyranthes bidentata Bl. (AB) promoting proliferation of osteoblast like (OB like) UMR106 cells and to determine its content in AB by HPLC method. METHODS Ecdysterone isolated from AB was cultured with OB like cells UMR106 together in vitro and the proliferation of OB like cells was determined by MTT assay. The chromatographic conditions for determining ecdysterone included an ODS column (250 mm×4 6 mm, 5 μm), a mobile phase consisting of a mixture of water acetontrile tetrahydrofuran (86∶11∶3), detection wavelength of 243 nm, and column temperature of 27℃. Phenacetin was used as the internal standard. RESULTS The ecdysterone from AB had significant activity promoting proliferation of OB like cells, the proliferation was promoted by 41% ( n =3). The average recovery of ecdysterone was 96 2% (RSD=2 1%), the calibration was linear in the range of 30~300 μg·mL -1 (γ=0 9998). CONCLUSION Ecdysterone was screened quickly by cultivating with OB like cells together in vitro . The HPLC method is accurate, fast and reproducible for the determination of ecdysterone in AB. 展开更多
关键词 牛膝 脱皮甾酮 细胞 细胞增殖
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成骨生长肽对大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞增殖和分化的影响 被引量:13
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作者 徐凌 梁星 +5 位作者 黄姣 董强 夏露 胡建 张庆鸿 李小玉 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期445-448,共4页
目的研究成骨生长肽(OGP)在体外对成骨细胞样细胞增殖分化的影响。方法在体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞中加入不同浓度的OGP(10-11mol/L^10-7mol/L),用MTT法检测细胞增殖,酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)的表达,RT-PCR... 目的研究成骨生长肽(OGP)在体外对成骨细胞样细胞增殖分化的影响。方法在体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞中加入不同浓度的OGP(10-11mol/L^10-7mol/L),用MTT法检测细胞增殖,酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)的表达,RT-PCR法检测核心结合因子1(Cbfa1)mRNA的表达。结果OGP对成骨细胞样细胞增殖有促进作用(P<0.05),最大效应浓度为10-9mol/L;能增加细胞内ALP活性(P<0.05),最大效应浓度为10-8mol/L;可促进Cbfa1mRNA的表达(P<0.05),其最佳促进表达浓度为10-8mol/L,Cbfa1mRNA与β-actinmRNA像素值比值为0.89±0.02。结论OGP可促进成骨细胞样细胞增殖,增强Cbfa1mRNA的表达水平。 展开更多
关键词 生长肽 细胞细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶 核心结合因子1
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牛膝提取物对成骨样细胞增殖的作用 被引量:32
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作者 高晓燕 王大为 +1 位作者 李发美 姜志明 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2000年第3期210-213,共4页
考察了牛膝 (AchyranthesbidentataBl.)的不同提取部位对成骨样细胞UMR10 6的作用 .通过牛膝的醇提液及醇提液的不同提取部位和UMR10 6成骨样细胞共同体外培养 ,用MTT方法检测了各部位对细胞增殖的作用 ;同时考察了MTT法的实验条件 .结... 考察了牛膝 (AchyranthesbidentataBl.)的不同提取部位对成骨样细胞UMR10 6的作用 .通过牛膝的醇提液及醇提液的不同提取部位和UMR10 6成骨样细胞共同体外培养 ,用MTT方法检测了各部位对细胞增殖的作用 ;同时考察了MTT法的实验条件 .结果表明 :牛膝的醇提液及其石油醚和乙酸乙酯萃取的混和物对细胞具有较强的促进增殖作用 ,而正丁醇层和水层对细胞增殖无影响 ;在MTT法中 ,铺板细胞浓度、检测波长和加入MTT后的孵育时间均影响吸光度值的测定 . 展开更多
关键词 牛膝 细胞 MTT法 细胞增殖 大鼠
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氟化钠对成骨样细胞功能表达影响的研究 被引量:13
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作者 龙丽 李灵芝 +3 位作者 刘开泰 张永亮 姚华 王国荃 《中国预防医学杂志》 CAS 2004年第3期168-171,共4页
目的 探讨氟对成骨样细胞功能表达的影响。方法 用细胞生长曲线和四唑盐比色 (MTT)法测定细胞增殖 ,对硝基苯基磷酸二钠盐比色 (PNPP)法检测碱性磷酸酶 (ALP)活性及放免法测定骨钙素分泌量 ,研究不同浓度 ( 10 -7mol/L~ 10 -3 mol/L... 目的 探讨氟对成骨样细胞功能表达的影响。方法 用细胞生长曲线和四唑盐比色 (MTT)法测定细胞增殖 ,对硝基苯基磷酸二钠盐比色 (PNPP)法检测碱性磷酸酶 (ALP)活性及放免法测定骨钙素分泌量 ,研究不同浓度 ( 10 -7mol/L~ 10 -3 mol/L)氟化钠 (NaF)对成骨样细胞UMR10 6增殖和分化功能的影响。结果 NaF对UMR10 6细胞增殖及早期分化呈双向调节作用 ,主要表现为低浓度促进 ,高浓度抑制。染氟一定时间后 ,与对照组相比 10 -7mol/L、 10 -6mol/L、 10 -5mol/LNaF组细胞增殖及ALP活性均增加 (P <0 0 5 ) ,而 10 -4mol/L、 10 -3 mol/LNaF组则表现为抑制细胞增殖及ALP活性 (P <0 0 5 )。但是 ,NaF对UMR10 6细胞晚期分化呈单一作用 ,上述不同浓度的NaF均可促进骨钙素分泌 ,与对照组相比有统计学意义 (P <0 0 5 )。而且 ,随NaF浓度升高骨钙素分泌量增加。结论 NaF对成骨样细胞的增殖呈双向调节 ,但对其分化因暴露时间和浓度不同而呈多样性。 展开更多
关键词 氟化钠 细胞 功能 表达 细胞增殖
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