苯和二甲苯对骨髓成纤维细胞克隆形成单位（CFU－F）的联合作用

本实验用苯和二甲苯在３０ｍｇ／ｋｇ和６０ｍｇ／ｋｇ两个浓度下对近交系ＢＡＬＢ／ｃ小鼠进行腹腔注射染毒。结果发现，经一周连续腹腔注射染毒，在两个浓度下苯染毒组骨髓ＣＦＵ－Ｆ均显著减少，且有明确的剂量反应关系。而二甲苯染毒组没有显著变化，苯、二甲苯联合染毒组也没有显著变化。该实验提示苯对骨髓ＣＦＵ－Ｆ有抑制作用，而在苯和二甲苯联合染毒时，该抑制作用又表现得不明显，故作者认为两者对ＣＦＵ－Ｆ的联合作用是相减的。

补肾中药诱导干预骨髓间充质干细胞成骨分化研究进展

干细胞是一种具有自我更新，高度增殖和多向分化潜能的细胞。骨髓组织中有两种干细胞，即造血干细胞和骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcell，MSCs），后者早期称为克隆形成单位成纤维细胞（colony—forming—unitsfibroblasts，CFU—F）或骨髓基质细胞（bonemarrowstromalcells，BMSCs）。BMSCs在体外的概念是指能够快速贴壁，容易克隆和持续扩增的骨髓来源的细胞。BMSCs在一定的条件下可以分化为成骨细胞、软骨细胞、神经细胞、脂肪细胞等。近几年来利用中药制剂诱导骨髓间充质细胞定向分化的成骨细胞移植治疗骨缺损导致的骨不连和延迟愈合以及股骨头坏死等疾病受到了广泛的关注，成为临床和实验研究的热点之一。

免疫抑制剂环胞素A对鼠骨代谢的生物学效应

目的探讨实验条件下免疫抑制剂环胞素A(CsA)在骨代谢过程中对破骨细胞和成骨细胞克隆的生物作用及其机制。方法用不同浓度的环胞素A与鼠骨髓细胞共同培养,诱导产生破骨细胞和成骨细胞克隆。分别以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检查破骨细胞,碱性磷酸酶(ALP)染色检查CFU-F克隆和Von’Kassol染色检查CFU-OB克隆;光镜下计数破骨细胞数、CFU-F和CFU-OB成骨细胞克隆数。结果实验条件下环胞素A可诱导鼠破骨细胞的数量显著增加(F=16.496,P<0.001),且破骨细胞的数量与环胞素A剂量呈线性正相关(r=0.579,P<0.05);成骨细胞克隆CFU-F和CFU-OB的数量变化与环胞素A无相关性(F=1.380,F=0.305,P>0.05)。结论环胞素A在实验条件下可诱导鼠破骨细胞数量的增加,但对成骨细胞克隆无显著影响,环胞素A对骨代谢的生物作用可能是通过上调破骨细胞系统从而导致生物体发生骨质疏松。

pRNA纳米微粒对脊柱结核分枝杆菌生长影响的实验研究

目的 :观察pRNA-3WJ-siLNA gapmer(Mce4)-aptamer(CD40)纳米微粒(简称pRNA纳米微粒)在脊柱结核细胞模型中对结核分枝杆菌生长的影响。方法:利用荧光结核分枝杆菌感染人成骨细胞建立脊柱结核细胞模型。先培养及准备人成骨细胞,人成骨细胞培养至第三代;然后构建培养荧光结核分枝杆菌;将培养良好的人成骨细胞用1×Trypsin-EDTA胰蛋白酶消化之后以70%密度在100mm细胞培养皿种植细胞,经24h培养使细胞稳定之后,将1麦氏比浊管的对数生长中期荧光结核分枝杆菌以感染复数(multiplicity of infection,MOI)1∶10感染培养的人成骨细胞6h,用不加血清培养液清洗3次,在培养箱中培养24h;然后将感染成功的人成骨细胞随机分为A组(空白对照组)及B、C、D组(三个实验组),三个实验组分别置入本研究团队构建的0.1μM、1μM、10μM浓度的脊柱结核靶向治疗pRNA纳米微粒溶液,共培养36h之后,加入细胞裂解液裂解细胞,裂解产物用Middlebrook 7H9培养液稀释20倍,之后均匀涂抹到琼脂平板,放入到37℃,5%CO2细胞培养箱中培养21d,使用Gel Doc XR+system凝胶成像系统观察菌落影像,使用Bio-Rad Discovery Quantity One?1-D analysis软件对四组的所有菌落进行了测定,统计分析各组人成骨细胞中结核分枝杆菌菌落形成单位(colony forming unit,CFU)。结果:人成骨细胞培养良好;成功构建荧光结核分枝杆菌(H37Ra-GFP);荧光结核分枝杆菌结合并进入人成骨细胞。经统计分析A、B、C、D四组菌落形成单位(272.67±67.06、183.33±8.74、154.33±25.72、76.67±11.02)的差异存在统计学意义(F=14.68,P<0.05);且B、C、D三组的菌落形成单位分别与A组相比时,均明显低于A组(P<0.05),B、C、D三组菌落形成单位依次下调,三组菌落形成单位两两比较存在差异,并且有统计学意义(P<0.05)。结论:pRNA纳米微粒以浓度梯度的方式抑制结核分枝杆菌在人成骨细胞中的生长存活,甚至低浓度也具备抑制结核分枝杆菌生长的能力。