雌激素对骨质疏松大鼠骨折愈合过程成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响分析

目的:探讨雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)的影响,就骨质疏松大鼠骨折愈合进行试验。方法:选择40只雌性Wistar大鼠,随机分为观察组和对照组,每组各20例,取左股骨骨折模型,观察组每隔1d注射雌激素,就各项指标进行分析。结果:观察组优于对照组骨痂密度(P<0.05)。结论:观察组优于对照组的成骨细胞血管生长因子的表达量,其成骨细胞数量优于对照组,故其可促进骨组织的钙化及骨细胞的增殖分化,使骨密度提高。

辛伐他汀对成骨细胞血管内皮生长因子的表达和颅骨内血管新生的影响

目的通过观察辛伐他汀对体外培养成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达及对颅骨血管新生的影响,探讨其促进骨形成的作用机制。方法将离体培养颅骨成骨细胞与辛伐他汀作用24h后,提取RNA行RT-PCR,半定量测定细胞VEGF mRNA的表达,免疫细胞化学染色吸光度测定VEGF蛋白表达水平;小鼠头皮下局部注射辛伐他汀和空白溶剂25μl,连续5d,1个月后取出颅骨做病理检查。结果辛伐他汀可增加成骨细胞VEGF的mRNA和蛋白的表达。局部用药后可见小鼠颅骨增厚,骨质内部有新生血管出现。结论促进成骨细胞VEGF的表达及骨内血管新生,是他汀类药物促进骨形成的作用机制之一。

雌激素对骨质疏松大鼠骨折愈合过程成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究雌激素对骨质疏松大鼠骨折愈合过程成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响,进一步了解雌激素对骨代谢的作用机制。方法采用80只20月龄的雌性大鼠,将其随机分为对照组和实验组,每组40只,麻醉下制作左股骨骨折模型,术后实验组每隔1d注射1次雌激素,分别于1、2、3、4周取骨痂,利用免疫组织化学染色法、原位杂交方法检测成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达,利用骨矿分析仪测定骨痂的密度。结果 VEGF在骨折部位被多种细胞表达,且成骨细胞最明显,其表达强度随时间变化而变化,3周左右达到高峰,实验组比对照组表达更明显,实验组骨痂密度高于对照组(P<0.05)。结论雌激素可促进成骨细胞VEGF的表达,VEGF是雌激素调节骨代谢的机制之一,可促进骨质疏松骨折的愈合。

雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

背景:在众多的血管生长因子中,血管内皮生长因子是最有力的血管生成因子,它具有促进血管内皮细胞分裂、增殖,细胞质钙化聚集并能诱导血管生成等作用,且对于成骨细胞、破骨细胞的增殖、分化及功能活性具有重要调节作用。目的:观察雌激素对成骨细胞上血管内皮生长因子表达的影响。方法:取新生48h大鼠颅盖骨,酶解消化得到成骨细胞,并进行体外培养。采用RT-PCR法测定10-10,10-8,10-6,10-4mol/L17β-雌二醇作用成骨细胞后血管内皮生长因子mRNA的表达。结果与结论:RT-PCR检测结果显示,血管内皮生长因子mRNA在原代成骨细胞内稳定表达;半定量分析证实,不同浓度17β-雌二醇组间血管内皮生长因子mRNA的表达量呈现一定规律,随着17β-雌二醇浓度的升高,血管内皮生长因子mRNA的表达量逐渐增加,10-6mol/L左右时,血管内皮生长因子mRNA的表达量最高,超过此剂量,血管内皮生长因子的表达下降。提示雌激素促进成骨细胞上血管内皮生长因子的表达上调,并存在剂量依赖性。

缺氧状态下体外培养成骨细胞血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白2的表达及意义

目的研究缺氧对体外培养成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)表达的影响及意义。方法采用酶消化法获取人成骨细胞并进行原代培养,倒置显微镜下观察成骨细胞的生长形态;采用Gomori改良钙钴法和免疫组织化学SABC法分别检测原代培养成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)的表达,进行原代培养成骨细胞鉴定。细胞传至第2代时,按继续培养条件的不同将细胞分为缺氧组(氧分压<4.8kPa、氧容积比<5%)和常氧组,在传代培养24、48、72h时分别收集2组细胞,采用免疫组织化学SABC法检测VEGF和BMP-2的表达,应用图像分析系统进行半定量检测,结果以平均灰度值表示,平均灰度值低示表达水平高。结果原代培养成骨细胞可表达ALP和OCN,初步确定经体外培养获得了具有生物活性的成骨细胞。在培养24、48、72h时,缺氧组成骨细胞VEGF表达水平均明显高于常氧组(平均灰度值分别为123.53±7.38vs141.21±6.03、116.45±6.34vs138.37±5.04、108.11±5.37vs136.65±6.54,均P<0.01),且缺氧组成骨细胞VEGF表达水平随缺氧时间延长而逐渐升高。缺氧组成骨细胞BMP-2表达水平在培养24h时明显高于常氧组(平均灰度值为143.28±2.82vs146.91±2.06,P<0.01),而在培养48、72h时与常氧组比较,差异均无统计学意义。结论缺氧可诱导成骨细胞VEGF的表达上调;而缺氧延长则不利于成骨细胞BMP-2的表达。缺氧对VEGF和BMP的早期表达调控可能与骨修复的启动相关。

掺锶聚磷酸钙骨修复材料对成骨细胞血管内皮生长因子蛋白分泌量的影响

目的探讨掺锶聚磷酸钙骨修复材料对成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)蛋白分泌量的影响。方法制备不同含锶量的掺锶聚磷酸钙骨修复材料,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定成骨细胞的VEGF蛋白分泌量,并采用噻唑蓝(MTT)法考察其对成骨细胞增殖的影响。结果 ELISA法结果表明,培养7 d后,1%,3%,5%,8%,10%含锶量的掺锶聚磷酸钙作用的成骨细胞VEGF分泌量均高于聚磷酸钙,差异均有统计学意义(t=6.561,11.454,11.256,15.149,9.778,P<0.05),其中,8%含锶量掺锶聚磷酸钙作用的成骨细胞VEGF分泌量最高。MTT法结果表明,培养3,5,7,9 d后,8%掺锶聚磷酸钙、聚磷酸钙浸提液作用的成骨细胞的吸光度(A)值高于阴性对照,差异均有统计学意义(t=3.960,5.029,5.229,4.808,2.584,2.954,2.657,2.798,P<0.05);培养5,7,9 d后,8%掺锶聚磷酸钙浸提液作用的成骨细胞的A值高于聚磷酸钙,差异均有统计学意义(t=2.583,2.930,1.934,P<0.05)。结论掺锶聚磷酸钙作为一种新型的骨修复材料,能促进成骨细胞分泌VEGF,具有良好的临床应用前景。

血管内皮生长因子165/骨形态发生蛋白改善缺氧复氧状态下成骨细胞损伤

背景:研究发现,血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白两种因子在缺氧复氧过程中相互作用,通过调节细胞内信号通路的活化,参与骨细胞损伤的修复过程。目的:进一步探究血管内皮生长因子165/骨形态发生蛋白与缺氧复氧成骨细胞损伤的关系分析。方法:取成骨细胞,建立缺氧复氧损伤模型,建模前后Real-Time PCR法和免疫印迹法检测血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白2的mRNA及蛋白表达。分别给予建模后成骨细胞不同质量浓度(10,20,40ng/mL)血管内皮生长因子165或骨形态发生蛋白2处理12,24,36,48,72 h,CCK-8法检测细胞增殖,DAPI检测细胞凋亡。结果与结论:(1)与建模前相比,建模后成骨细胞中血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白2的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);(2)成骨细胞增殖率随着血管内皮生长因子165质量浓度的升高而明显升高(P<0.05);成骨细胞凋亡率随着血管内皮生长因子165质量浓度的升高而明显降低(P<0.05);(3)成骨细胞增殖率随着骨形态发生蛋白2质量浓度的升高而明显升高(P<0.05);成骨细胞凋亡率随着骨形态发生蛋白质量浓度的升高而明显降低(P<0.05);(4)结果表明,血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白在缺氧复氧成骨细胞损伤中低表达,给予血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白处理后缺氧复氧成骨细胞损伤明显降低,且呈浓度依赖性,提示血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白对缺氧复氧成骨细胞损伤有明显保护作用。

酸性成纤维细胞生长因子调控Ang1/Tie2信号通路抑制炎症促进血管内皮细胞功能恢复

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的影响,以及Ang1/Tie2通路在其中的作用。方法:培养HUVEC细胞,不同浓度脂多糖(LPS)和aFGF刺激HUVEC,CCK-8实验确定刺激浓度,并观察生长活性;细胞划痕实验检测aFGF对HUVEC迁移能力的影响;Westernblot实验检测增殖蛋白PCNA,凋亡蛋白Cleavedcaspase3、Bax,抗凋亡蛋白Bcl2,炎症相关蛋白NLRP3、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4和IL-10,血管生成相关蛋白CD31和通路相关蛋白Ang1、Tie2的表达水平;免疫荧光实验检测PCNA、Cleavedcaspase3、IL-6、IL-10以及CD31的荧光强度。分离小鼠主动脉,离体培养后进行免疫荧光实验,观察PCNA、Cleavedcaspase3、IL-6、IL-10以及CD31蛋白的荧光强度。结果:CCK-8实验显示LPS抑制HUVEC生长活性,5μg/mL为最适刺激浓度(P<0.01);aFGF促进HUVEC生长活性,其中100ng/mL为最适刺激浓度(P<0.01)。细胞划痕实验提示aFGF促进细胞迁移。Westernblot和免疫荧光实验结果显示,aFGF促进增殖蛋白和血管功能蛋白表达,抑制凋亡蛋白和炎症蛋白表达,上调Ang1/Tie2通路蛋白(P<0.05)。离体血管免疫荧光实验显示aFGF上调PCNA、IL-10以及CD31的荧光强度,下调Cleavedcaspase3和IL-6的荧光强度(P<0.05)。结论:aFGF增强HUVEC生长活性和迁移能力,促进其增殖,抑制其凋亡,并通过调控Ang1/Tie2通路抑制炎症反应,促进血管功能修复。

iRoot BP Plus应用于年轻恒牙血运重建术对患者牙根发育及龈沟液血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白细胞介素-8、白细胞介素-1β水平的影响

目的:探讨iRoot BP Plus应用于年轻恒牙血运重建术对牙根发育及龈沟液血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平的影响。方法:选取88例年轻恒牙血运重建术患儿作为研究对象,按照随机数字表法将其分为对照组(44例,44颗牙)和试验组(44例,44颗牙)。对照组使用无机三氧化物聚合物(MTA)作为填充材料,试验组选择iRoot BP Plus作为填充材料,两组术后均随访1年。比较两组随访1年后的疗效、牙根发育情况,术前、随访1年后的牙根长度、根管壁厚度、咬合功能、咀嚼功能、疼痛程度、牙周指数,术前、术后1周的龈沟液VEGF、bFGF、IL-8、IL-1β水平及随访期间的不良反应发生情况。结果:随访1年后,试验组总有效率及牙根发育Ⅰ型患儿占比分别为95.45%、47.73%,高于对照组的79.55%、25.00%(均P<0.05)。与术前比较,随访1年后,两组牙根长度、根管壁厚度增加,试验组高于对照组(均P<0.05);两组咬合功能、咀嚼功能、视觉模拟评分法(VAS)、牙周袋深度(PD)、牙龈指数(GI)、龈沟出血指数(SBI)、菌斑指数(PLI)评分降低,试验组低于对照组(均P<0.05)。与术前比较,术后1周,两组龈沟液VEGF、bFGF水平升高,试验组高于对照组(均P<0.05);两组龈沟液IL-8、IL-1β水平降低,试验组低于对照组(均P<0.05)。随访期间,试验组不良反应总发生率为4.55%,低于对照组的22.73%(P<0.05)。结论:与MTA比较,iRoot BP Plus应用于年轻恒牙血运重建术中可调节患儿龈沟液VEGF、bFGF、IL-8、IL-1β水平,减轻炎症,促进牙根生长发育,并可减轻患儿疼痛程度,改善咬合功能、咀嚼功能及牙周状况,进而有利于提高疗效,且具有较好的安全性。

弥漫大B淋巴瘤血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白介素-6水平与预后的关系

目的探讨弥漫大B淋巴瘤血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白介素-6(IL-6)水平与预后的关系。方法选取2020年2月至2022年2月佛山市第一人民医院收治的100例弥漫大B淋巴瘤患者作为观察组,按照临床分期的不同分为Ⅰ~Ⅱ期(20例)和Ⅲ~Ⅳ期(80例),按照分子亚型的不同分为N-GCB(60例)、GCB型(40例)。选取同期的100例健康体检者作为对照组。经过治疗后,根据患者治疗效果分为治疗有效组、治疗无效组,对患者VEGF、bFGF、IL-6水平进行测定,分析弥漫大B淋巴瘤患者的VEGF、bFGF、IL-6水平与预后的关联性。结果观察组的IL-6、VEGF、bFGF水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前后,观察组Ⅰ~Ⅱ期患者的IL-6、VEGF、bFGF水平均低于Ⅲ~Ⅳ期,GCB患者的IL-6、VEGF、bFGF水平低于N-GCB患者,治疗有效组患者(n=80)的IL-6、VEGF、bFGF水平低于治疗无效组(n=20),差异有统计学意义(P<0.05);弥漫大B淋巴瘤患者的VEGF、bFGF、IL-6水平与预后均呈负相关(r=-0.625、-0.741、-0.779,P<0.05)。结论弥漫大B淋巴瘤VEGF、bFGF、IL-6水平能够反映患者病情,能够判断患者病理分期以及预后情况,具有一定的指导价值。

靶向成纤维细胞生长因子受体1信号改善类风湿关节炎的骨破坏

背景:尽管科研人员已注意到成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中展现出巨大潜力,但尚未有学者对成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中的研究进展作全面综述。目的:通过查阅国内外相关文献,综合分析成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中的机制。方法:以“成纤维细胞生长因子受体1,类风湿关节炎,骨破坏,骨细胞,成骨细胞,破骨细胞,软骨细胞,巨噬细胞,滑膜成纤维细胞,T细胞,血管内皮细胞”为检索词检索中国知网数据库,以“fibroblast growth factor receptor 1,rheumatoid arthritis,bone destruction,osteocytes,osteoblasts,osteoclasts,chondrocytes,macrophages,synovial fibroblasts,T cells,endothelial cells”为检索词检索PubMed数据库,检索时间范围重点为1992年4月至2024年1月。通过阅读文献题目、摘要及全文,根据纳入与排除标准进行筛选,最后纳入82篇文献进行综述。结果与结论:成纤维细胞生长因子受体1广泛表达于骨组织相关细胞,包括骨细胞、成骨细胞、破骨细胞等,可以通过调控这些细胞的功能来影响骨重塑过程和维持骨稳态,促进类风湿关节炎骨破坏的发生和发展。成纤维细胞生长因子受体1还可以在滑膜成纤维细胞和巨噬细胞中参与炎症反应,在内皮细胞中调控滑膜血管生成,从多个方面促进骨破坏。成纤维细胞生长因子受体1可能是类风湿关节炎骨破坏的一个重要参与因素,为进一步研究类风湿关节炎治疗靶点提供依据。

保阴煎加味对围绝经期功能失调性子宫出血虚热证疗效及血清血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子水平的影响

目的探讨保阴煎加味对围绝经期功能失调性子宫出血(dysfunctional uterine bleeding,DUB)虚热证的疗效以及血清血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平的影响。方法纳入2018年4月-2021年4月在德清县中医院治疗的DUB患者68例,随机分成对照组和治疗组各34例。对照组予黄体酮胶囊;治疗组于对照组的基础上予保阴煎加味内服;两组均观察3个月经周期。比较两组完全止血时间、虚热证症状评分、子宫相关指标改善、性激素水平、临床疗效以及血清VEGF和bFGF水平。结果治疗组的完全止血时间显著短于对照组(P<0.01);治疗后,治疗组的虚热证症状评分明显低于对照组(P<0.01);治疗后,两组子宫内膜厚度及血清促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌激素(E2)水平显著减少,子宫平滑肌收缩幅度明显增加,且治疗组以上指标改善均明显对照组(P<0.01);治疗组的总有效率明显高于对照组(P<0.05);治疗后,两组血清VEGF和bFGF水平明显增加,且治疗组明显高于对照组(P<0.01)。结论在西医常规治疗基础上,保阴煎加味能更有效地控制DUB虚热证患者的出血症状,促进中医证候、性激素水平改善,提高治疗效果,上调VEGF和bFGF水平。

黄韧带中成纤维细胞生长因子1、血管内皮生长因子表达与腰椎管狭窄患者腰椎减压术后再狭窄的关系

目的 探讨腰椎管狭窄(LSS)患者黄韧带中成纤维细胞生长因子1(FGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达与腰椎减压术后再狭窄的关系。方法 选择138例行腰椎减压术治疗的LSS患者,分为轻度组[绝对跛行距离(ACD)≤200 m,41例]、中度组(ACD 201~400 m,67例)和重度组(ACD> 400 m,30例),另选择138例非LSS患者为对照组。检测黄韧带组织FGF-1、VEGF表达,术后随访统计再狭窄发生情况。结果 LSS组黄韧带组织中FGF-1表达低于对照组(P <0.001),VEGF表达高于对照组(P <0.001)。重度组黄韧带组织中FGF-1表达低于中度组和低度组(P <0.05),VEGF表达高于中度组和低度组(P <0.05)。LSS椎管重度狭窄、减压不彻底、VEGF高表达是LSS患者腰椎减压术后再狭窄危险因素(P <0.05,P <0.001),FGF-1是保护因素(P <0.05)。结论 LSS患者黄韧带组织中FGF-1表达降低,VEGF表达升高,且与椎管狭窄程度以及术后再狭窄有关。

乐伐替尼对甲状腺癌SW579细胞放射敏感性及血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子受体表达的影响

目的:探究乐伐替尼对甲状腺癌SW579细胞放射敏感性以及对血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(bFGFR)表达的影响。方法:体外培养甲状腺癌SW579细胞,筛选最佳放射剂量,取培养至对数生长期的SW579细胞分为对照组(常规培养SW579细胞)、放射组(使用4 Gy X射线照射SW579细胞)、乐伐替尼低(在含SW579细胞的培养基中加入5μmol/L的乐伐替尼后,再使用4 Gy X射线照射SW579细胞)、高(在含SW579细胞的培养基中加入10μmol/L的乐伐替尼后,再使用4 Gy X射线照射SW579细胞)浓度组,培养48 h后。检测SW579细胞存活率、细胞凋亡率和细胞中B细胞淋巴瘤-2相关X(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、活化胱天蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、VEGF、bFGF、bFGFR蛋白表达。结果:随着放射剂量的升高,SW579细胞存活率依次降低(均P<0.05),选取4 Gy X射线进行后续实验;与对照组相比,放射组、乐伐替尼低、高浓度组SW579细胞存活率、Bcl-2、VEGF、bFGF、bFGFR蛋白表达依次降低(均P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达依次升高(均P<0.05)。结论:乐伐替尼能增强SW579细胞的放射敏感性,其机制可能与抑制VEGF、bFGF、bFGFR蛋白表达有关。

血管内皮生长因子基因转染促进成骨细胞增殖及其功能的实验研究

目的探讨外源性血管内皮生长因子（VEGF）基因表达在成骨细胞增殖、分化中的作用。方法利用阳离子脂质体Lipofectamine将pBLAST49-mVEGF基因导人体外培养的成骨细胞，观察外源性VEGF在成骨细胞内的表达，及其对成骨细胞生长曲线、细胞周期和成骨细胞分泌骨钙素和Ⅰ型胶原的影响。结果同步培养后第1、2d，pBLAST49-mVEGF基因转染组细胞数大于对照组，二者间差异无统计学意义（P〉0．05）；从第3d开始，二者间差异具有统计学意义（P〈0．05）。pBLAST49-mVEGF基因转染组第1～5代细胞（G2／M＋S）％明显高于对照组，差异具有统计学意义（P〈O．05）。pBLAST49-mVEGF基因转染组第1～5代细胞合成分泌骨钙素浓度和Ⅰ型胶原的表达均明显高于对照组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论pBLAST49-mVEGF基因转染能促进成骨细胞的增殖和成骨活性。

掺锶聚磷酸钙对成骨细胞分泌血管内皮生长因子的影响

背景:掺锶聚磷酸钙作为一种新型骨修复材料,具有良好的生物相容性和可控降解性。课题组前期研究表明其具有促进血管生成的作用,但其机制尚不清楚。目的:将ROS17/2.8成骨细胞与掺锶聚磷酸钙支架在体外共培养,观察细胞增殖情况和促血管生成因子血管内皮生长因子的分泌情况。设计、时间及地点:对比观察实验,于2008-10/2009-06在四川大学组织工程研究室完成。材料:制备掺锶量为1%,2%,5%,8%,10%的掺锶聚磷酸钙和未掺锶聚磷酸钙骨组织工程支架材料。ROS17/2.8成骨细胞株购自于四川大学华西医院移植免疫与移植工程实验室。方法:①制备细胞支架复合物:将材料置于24孔培养板中,每孔接种300μL细胞悬液(细胞浓度为2×107L-1),培养14d,隔天换液。②分别于1,3,5,7,10,14d行MTT法观察成骨细胞的增殖情况。③将培养7d的细胞支架复合物,离心取上清液,用夹心ELISA法检测血管内皮生长因子的分泌情况。主要观察指标:观察掺锶聚磷酸钙和未掺锶聚磷酸钙支架上成骨细胞的增殖情况及血管内皮生长因子的分泌情况。结果:MTT法实验结果表明,与未掺锶聚磷酸钙组相比,掺锶聚磷酸钙组能促进成骨细胞的增殖,且8%掺锶聚磷酸钙效果最好;ELISA结果表明,与未掺锶聚磷酸钙组相比,掺锶聚磷酸钙组能上调血管内皮生长因子的蛋白分泌量,其中以8%掺锶聚磷酸钙促进作用最为明显(P<0.05)。结论:锶能有效促进成骨细胞增殖,并能明显上调血管内皮生长因子的分泌,且以8%掺锶聚磷酸钙效果最好,在一定程度上揭示了其具有促血管化作用的机制。

骨形态发生蛋白-2对原代鼠胚成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的通过不同剂量重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)刺激原代培养的小鼠胚胎成骨细胞,探讨BMP-2对成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及规律。方法取19 d胎龄的小鼠胚胎颅骨成骨细胞进行体外培养,采用RT-PCR法或Western blot法染色法检测不同浓度rhBMP-2、不同作用时间下对成骨细胞VEGF mRNA表达的影响及规律。结果RT-PCR法检测到VEGF mRNA在原代成骨细胞内稳定表达；半定量分析表明,随着rhBMP-2浓度的升高,VEGF mRNA的表达量逐渐增加,当rhBMP-2浓度为300 ng/mL左右时,VEGF mRNA的表达量最高,超过此浓度,VEGF的表达则有下降趋势；应用终浓度rhBMP-2(300 ng/mL)刺激成骨细胞时,不同作用时间下VEGF mRNA的表达量呈双时相,分别在3 h和24 h时出现高峰,48 h时VEGF mRNA的表达仍保持较高水平。除去各自对照组的影响,各时间点VEGF表达的相对值[(rhBMP-2组/对照组)比值]亦呈时间依赖性关系,6 h时明显升高为对照组的2．5倍(P＜0．05),36 h时约升高为对照组的2倍。结论VEGF可在原代鼠胚成骨细胞内稳定表达；rhBMP-2在体外可刺激原代骨细胞VEGF的表达,并呈一定的浓度和时间依赖性关系。

血管内皮生长因子调节成骨细胞中Ihh和p38 MAPK的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对大鼠成骨细胞Ihh和p38 MAPK的调节作用。方法取胎鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,采用实时PCR检测成骨细胞中Ihh及其受体Ptch1和p38 MAPK的表达,检测成骨细胞在不同浓度(0,2,20 ng/ml)及不同时间(0,12,24 h)的VEGF作用下Ihh和p38 MAPK的表达情况。结果成骨细胞表达Ihh及其受体Ptch1,同时表达p38 MAPK。随着VEGF浓度的增加I,hh和p38 MAPK的表达量均明显增加;随着VEGF作用时间的增加I,hh和p38 MAPK的表达量与对照组相比有明显的增长趋势。结论 Ihh与其受体Ptch1在成骨细胞中共表达I,hh以自分泌方式调节成骨细胞功能;VEGF上调成骨细胞中Ihh和p38 MAPK的表达,并且VEGF可能通过调节p38 MAPK的表达而影响Ihh的表达,可能存在VEGF-p38 MAPK-Ihh通路。

转染血管内皮生长因子基因的人成骨细胞增殖及其生物学功能

背景:传统的自体或异体骨移植治疗骨缺损都存在难以克服的缺点,基因治疗可能是一种新途径。目的:观察转染外源性血管内皮生长因子基因的人成骨细胞体外生物学特性。设计、时间及地点:对比观察,细胞学实验,实验于2005-05/2006-05在辽宁医学院科学实验中心完成。材料:人髂骨骨块取自需髂骨植骨的颈椎病患者的植骨块修洁剩余部分的骨质,患者知情同意。质粒pCDI/VEGF121为北京大学人类疾病治疗中心马大龙教授惠赠;感受态大肠杆菌DH5a为辽宁医学院刘丹平教授惠赠。方法:体外分离和培养人成骨细胞。实验分为血管内皮生长因子基因转染组与对照组。利用阳离子脂质体将pCDI-VEGF121真核表达质粒导入体外培养的人成骨细胞。主要观察指标:传代后1,3,5,7d观察血管内皮生长因子在人成骨细胞内的表达,及其对人成骨细胞增殖活力和细胞分泌骨钙素和碱性磷酸酶能力的影响。结果:pCDI-VEGF121真核表达质粒转染人成骨细胞后第3,7天,以反转录聚合酶链反应方法检测到其中有血管内皮生长因子mRNA表达。转染组的细胞数在第1,3,5,7天均高于对照组(P<0.05或P<0.01)。培养3d时转染组成骨细胞的碱性磷酸酶阳性率大于对照组(P<0.01);转染组的骨钙素含量高于对照组(P<0.05或<0.01)。结论:血管内皮生长因子基因转染可以促进体外培养人成骨细胞的增殖能力和相应的生物学功能。

血管内皮生长因子在人类成骨细胞样细胞中的表达

应用RT-PCR方法检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1和KDR/Flk-1mRNA在SaOS-2和MG63细胞中的表达,探讨VEGF在人类成骨细胞样细胞中的自分泌作用方式。