鹿茸粗提液对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用

目的 :观察鹿茸粗提液 (PAE)对大鼠成骨肉瘤细胞系UMR 10 6增殖的影响 ,从而为研究鹿茸强筋健骨的分子机理以及筛选鹿茸防治骨质疏松的生物活性成分提供实验依据。方法 :通过SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱对PAE进行初级分离 ,用MTT法检测不同分离组分对UMR 10 6细胞增殖的影响。结果 :发现SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱第 2峰P2次组分 ,当其蛋白质浓度高于 0 .972mg·L - 1并低于 97.2mg·L - 1时 ,对UMR 10 6细胞增殖活性的影响表现为抑制 ;若浓度达到 97.2mg·L- 1后则会促进细胞的增殖 ,且增殖效应随蛋白质浓度的增加而明显上升。当样品蛋白质浓度达到 9.72g·L- 1时 ,相应的细胞增殖率为 477.92 % ,接近PAE的增殖水平 (499.62 % )。经SDS PAGE电泳分析第 2峰分子量集中于 59kDa左右。此外 ,发现第 3、第 4和第 5峰对UMR 10 6细胞增殖有显著的抑制作用。结论 :鹿茸蛋白中含有多种双向调控UMR 10 6细胞增殖的生物活性因子 ,既有剂量双向效应 ,也有与分子量相关的不同调控蛋白 。

Stathmin基因在人成骨肉瘤细胞中的表达及意义

背景与目的:Stathmin作为细胞信号转导分子在细胞分化及恶性肿瘤发生、发展上发挥重要作用。本研究旨在探讨Stathmin基因在人成骨肉瘤细胞中的表达,并探讨阻断其表达对该肿瘤细胞的生物学行为的影响。方法:RT-PCR及原位杂交法检测2个人成骨肉瘤细胞系及45例人成骨肉瘤组织中Stathmin基因表达情况;以高表达Stathmin基因的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607为靶细胞、反义Stathmin(ASODN)为阻断剂,通过MTT实验观察ASODN对该细胞系的生长抑制作用,并用流式细胞仪分析其对细胞增殖周期的影响。结果:Stathmin基因在2个成骨肉瘤细胞系高表达,45例成骨肉瘤组织中24例呈阳性表达(阳性率为53.3%),10例正常组织中2例呈弱阳性表达,Stathmin在人成骨肉瘤组织的表达与正常组织中的表达有显著性差异(P<0.05)。ASODN明显抑制成骨肉瘤细胞的生长(P<0.05)。SOSP-9607在ASODN作用下,细胞分裂阻滞在分裂期的中期,并诱导细胞发生凋亡。结论:Stathmin基因在人成骨肉瘤中高表达,该基因有望成为成骨肉瘤生物治疗中的重要靶点。

紫杉醇诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的 :探讨紫杉醇对成骨肉瘤细胞的杀伤作用及机制。方法 :应用形态学观察 ,MTT分析法 ,DNA梯状电泳 ,流式细胞术检测术 ,研究紫杉醇对成骨肉瘤细胞系SOSP - 96 0 7的细胞毒效应。结果 :紫杉醇作用后成骨肉瘤细胞形态改变明显 ,存活率明显下降。形态学观察 ,DNA梯状电泳 ,流式细胞术检测术证实紫杉醇可诱导成骨肉瘤凋亡。结论 :紫杉醇在体外对成骨肉瘤细胞株SOSP - 96 0 7有较强的杀伤作用 。

caspase-6基因诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的:探讨caspase-6对成骨肉瘤细胞株的凋亡诱导作用。方法:应用RT-PCR方法检测成骨肉瘤细胞株SOSP-9607中caspase-6基因的表达水平。以腺病毒adv5作载体,构建含caspase-6基因的转基因载体,用脂质体包裹法转染SOSP-9607细胞株,用RT-PCR方法检测转染后SOSP-9607细胞中caspase-6基因的表达。用MTF法检测转染caspase-6对SOSP-9607细胞株生长的影响。结果:成骨肉瘤细胞株SOSP-9607中未检出caspase-6表达。RT-PCR法证实转染。caspase-6后SOSP-9607中caspase-6表达显著增强,MTT检测显示对SOSP-9607细胞的生长有抑制作用,形态学观察及DNA电泳证实转染后的细胞株存在细胞凋亡特征。结论:caspase-6对成骨肉瘤细胞的生长有抑制作用,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡。

化岩胶囊对成骨肉瘤细胞生长抑制作用的实验研究

目的 :观察化岩胶囊对成骨肉瘤细胞的生长抑制作用。方法 :将对数生长期的成骨肉瘤细胞以 5× 10 4 /ml浓度接种于 2 5ml培养瓶 ,每瓶 4ml,每组设 3瓶 ,37℃、 5 %CO2 温箱中培养4 8小时 ,分别加入浓度为 1mg/ml、 5mg/ml、 10mg/ml的化岩胶囊 ,药物作用 8、 16、 2 4、 4 8小时 ,空白对照组仅更换培养液 ,收集细胞 ,计算坏死细胞率。结果 :空白对照组和 1mg/ml、5mg/ml、 10mg/ml化岩胶囊处理 2 4小时 ,细胞坏死率分别为 2 2 %、 8 5 %、 33 6 %、 93 2 % ,5mg/ml化岩胶囊处理 8、 16、 2 4、 4 8小时 ,细胞坏死率分别为 4 1%、 11 1%、 33 6 %、87 4 %。结论 :化岩胶囊对人成骨肉瘤细胞有明显的抑制作用 。

姜黄素对顺铂抑制人成骨肉瘤细胞MG63增殖的影响

目的研究姜黄素对顺铂抑制人成骨肉瘤细胞MG63增殖的影响。方法采用噻唑蓝比色法检测姜黄素和顺铂不同浓度组合时对MG63细胞增殖的影响,荧光倒置显微镜观察药物作用后细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果随着姜黄素和顺铂的药物浓度逐渐升高,单药对MG63细胞的增殖抑制率呈上升趋势(P<0.05)。两药联合作用后细胞明显变形、发泡,细胞凋亡数进一步增加,细胞排列更加紊乱,大量细胞脱落悬浮于培养液中。结论不同浓度的姜黄素对顺铂抑制人成骨肉瘤细胞MG63增殖的影响不一样,可以是拮抗、相加或协同。

固真方对甲状旁腺素激发成骨肉瘤细胞内Ca^(2+)释出的影响

本研究在过去研究工作的基础上观察了用固真方处理后的成骨肉瘤细胞对甲状旁腺素（PTH）激发细胞内 Ca2+释出的影响。材料与方法1 材料乙酰羟甲基酯（Fura-2/Am）由中国医学科院药物所提供;Minmum Essential Medium（MEM）培养基,美国 Gibco 产品;PTH 美国 Cal-biochem 产品;中药固真方提取液（由何首乌、肉苁蓉、女贞子、生地等6味补肾益精中药组成。

Forskolin抑制成骨肉瘤细胞增殖的作用

Forskolin系天然植物中提取到的二萜类化合物，为腺苷酸环化酶的特异激活剂。实验发现它能下调成骨肉瘤细胞的EGF受体，抑制酪氨酸蛋白激酶活性，抑制转化生长因子α（TGFα）的基因表达，抑制3H－TdR参入DNA以及抑制细胞周期的S期，这均支持Forskolin对成骨肉瘤细胞具有抑制增殖的作用。

NS基因克隆及人成骨肉瘤细胞和人胚胎肾细胞NS基因的表达

目的 :研究nucleostemin(核干细胞因子 ,NS)基因在人成骨肉瘤细胞 (OS - 732 )和人胚胎肾细胞 (HEK -2 93)的表达情况 ,并克隆该基因的部分片段。方法 :以OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞为实验材料 ,进行细胞总RNA的提取、反转录反应、PCR反应、NS基因片段的克隆及测序等。结果 :(1)提取的总RNA质量很高 ,基本上无降解 ;(2 )OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞中均有NS基因的表达 ,并且在相同量底物的情况下 ,OS- 732细胞NS基因的表达量明显高于HEK - 2 93细胞 ;(3)将PCR产物成功地与pGEM -T克隆载体连接 ,构建为pGEM -T -NS质粒 ,测序结果表明NS基因片段序列与基因库中登陆的序列完全一致。结论 :本文成功地从OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞克隆到NS基因片段 ,OS - 732细胞NS基因的表达量明显高于HEK- 2

Notch1信号抑制对成骨肉瘤细胞化疗药物敏感性的影响

目的研究抑制Notch1信号对成骨肉瘤细胞化疗药物敏感性的影响及部分机制。方法将人成骨肉瘤细胞系OS-732按γ-分泌酶抑制剂(GSI)作用与否分为GSI组和对照组;脂质体法转染真核细胞表达质粒;Realtime PCR检测NICD、Hes1mRNA表达;流式细胞仪(FACS)检测Annexin V-PE/7-AAD双标的细胞凋亡;MTT法检测化疗药物对细胞的抑制率。结果 GSI组NICD和Hes1 mRNA均较对照组明显降低(P<0.01)。GSI组化疗药物导致的瘤细胞抑制率和凋亡率均明显高于对照组。过表达Hes1可减弱GSI诱导的瘤细胞化疗药物敏感性增高。结论 GSI通过抑制Notch1受体激活和下游靶基因Hes1表达促进人成骨肉瘤细胞凋亡,从而增加人成骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性。

甲状旁腺素对人成骨肉瘤细胞株SaOS-2内cAMP,IP3,Ca^(2+)的作用研究

目的通过研究ｈＰＴＨ（１～３４）对人成骨肉瘤细胞株ＳａＯＳ－２胞浆内ｃＡＭＰ、ＩＰ３、Ｃａ２＋的影响，来阐明ＰＴＨ与其膜上特异受体结合后的胞浆内主要信息传递途径。方法利用蛋白竞争结合法测定胞浆内ｃＡＭＰ，以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ作为荧光指示剂，激光共聚焦显微系统显示ＳａＯＳ－２内［Ｃａ２＋］ｉ的变化，离子交换层析法测定ｈＰＴＨ（１～３４）作用下胞浆内ＩＰ３的改变。结果ｈＰＴＨ（１～３４）可使ＳａＯＳ－２胞浆内ｃＡＭＰ明显升高且与其浓度呈正相关，其最佳作用时间为１０ｍｉｎ。ｈＰＴＨ（１～３４）能迅速提高ＳａＯＳ－２内［Ｃａ２＋］ｉ，而且作用３０ｓ时ＳａＯＳ－２胞浆内ＩＰ３升高即达最高峰，未发现百日咳毒素对此现象有抑制作用。

Ca^(2+)和cGMP介导的信号转导对大鼠成骨肉瘤细胞株UMR-106C/EBPβ表达的影响

目的:观察Ca2+和cGMP介导的信号转导对大鼠成骨肉瘤细胞株UMR-106的C/EBPβ表达的影响。方法:以Ca2+载体A23187、cGMP类似物CPT-cGMP及CaM阻断剂KN-62等药物作用UMR106细胞株,用WesternBlotting方法检测C/EBPβ的表达。结果:A23187作用后,C/EBPβp35和C/EBPβp20的表达量在一定时间内随着作用时间的延长而增多;CaM-PK抑制剂KN-62可明显抑制A23187的这一作用;且CPTcGMP可使A23187的这一效应增强。结论:Ca2+/CaMPK和cGMP/PKG介导的信号转导能促进UMR-106细胞C/EBPβp35和C/EBPβp20的表达,并呈一定的协同作用。

人巨噬细胞对人成骨肉瘤细胞株杀伤作用的扫描电镜观察

巨噬细胞作为效应细胞在肿瘤免疫中的作用已有不少报道.这种细胞对肿瘤细胞的作用机理及作用部位还不清楚.本文报道用扫描电镜观察巨噬细胞对肿瘤细胞杀伤作用的超微形态学.

人甲状旁腺激素(1-34)在人成骨肉瘤细胞中对基质Gla蛋白及Wnt/β-catenin信号通路的调节作用

目的观察人甲状旁腺激素(PTH)的N端活性片段PTH(1-34)对人成骨肉瘤细胞MG63基质Gla蛋白(MGP)表达的影响,以及PTH通过Wnt/β-catenin信号通路介导MGP表达调控的作用,探讨PTH(1-34)在防治骨质疏松症作用中可能的分子机制。方法(1)用不同浓度PTH(1-34)(10-9、10-8、10-7mol/L),单独或联合Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK-1(200 ng/m L)干预MG63细胞;(2)检测碱性磷酸酶(ALP)染色及活力测定用于判断细胞分化情况;(3)MGP及Wnt/β-catenin信号通路各组分的m RNA及蛋白的表达分别采用实时定量RT-PCR及Western blotting方法。结果 (1)PTH(1-34)上调MGP基因的表达,MGP m RNA的表达分别是对照组的2.56倍、4.14倍、7.81倍(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性增高;(2)PTH增强MG63细胞ALP活力,Dkk-1抑制ALP活性,Dkk-1与PTH联用部分阻断PTH上调ALP活力(P<0.05);(3)PTH上调MGP及Wnt/β-catenin信号通路中相关因子LRP5、β-catenin、Runx2 m RNA及蛋白水平,其m RNA分别是对照组的2.65、4.01、3.48倍(P<0.05或<0.01);DKK-1对PTH(1-34)促MGP表达没有影响,但大部分阻断了Wnt/β-catenin信号通路中相关因子的表达。结论PTH(1-34)能明显上调MGP及Wnt/β-catenin信号通路中相关因子的表达,Wnt/β-catenin信号通路和MGP在PTH调节骨代谢中起重要作用。

不同浓度葡萄糖对人成骨肉瘤细胞株MG63活性的影响

目的观察不同浓度葡萄糖对体外培养的人成骨肉瘤细胞株MG63的影响,探讨糖尿病导致骨质疏松症可能的发病机制。方法采用4种不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L),培养基连续培养人成骨肉瘤细胞株MG63,观察葡萄糖对细胞增殖、分泌活性产物的能力、凋亡以及矿化能力等各个方面的影响。结果升高的葡萄糖浓度对细胞的增殖具有一定的促进作用,但增多的细胞数量并没有带来相应细胞活性的增加。相反,细胞分泌碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)的能力以及矿化能力不同程度的出现了下降,且在不考虑渗透压因素情况下,细胞凋亡比率增加。结论本实验证实了高糖环境对细胞活性,特别是矿化能力的抑制作用,为临床工作中严格控制血糖防止骨质疏松症的发生提供了理论依据。

亚甲蓝衍生物光化学反应对人成骨肉瘤细胞细胞株灭活作用的实验研究

目的探讨光化学反应中不同浓度亚甲蓝衍生物（M007）对人成骨肉瘤细胞（MG-63）的灭活作用，提供将M007应用于肿瘤手术血液回收的前期研究基础。方法实验设空白（c）对照组、单纯光照（P）对照组、不作红光光照的M007对照组及实验组（M007-PCT）。将10^6个／ml的MG-63单细胞悬液与不同浓度的M007混匀反应，经震荡暗反应及可见红外光照射（M007-PCT）后，采用台盼蓝染色检测肿瘤细胞死亡率。结果M007-PCT组，M007为（2～4）μmol／L时，MG-63细胞株死亡率随光敏剂浓度增加而增大（P〈0．05）；M007在（4～32）μmol／L内，MG-63细胞的死亡率达到较高水平（〉93％），且不再随M007浓度增加而增大（P〉0．05）。M007对照组的MG-63细胞株死亡率随M007浓度增加有增加的趋势，但明显低于相同光敏剂浓度M007-PCT组肿瘤细胞死亡率（P〈0．05）。结论新型光敏剂M007对MG-63细胞具有有效的灭活作用，是肿瘤手术术中血液回收方面极具应用前景的光敏剂。

Bak1腺病毒表达载体的构建及对人成骨肉瘤细胞的影响

目的构建人Bcl2拮抗1(Bak1)基因重组表达腺病毒pAd-Bak1,并感染人成骨肉瘤细胞MG63建立过表达Bak1的细胞模型,检测其对细胞活性的影响。方法利用qPCR扩增Bak1全长cDNA,利用穿梭质粒pENTER构建载有Bak1基因的重组穿梭质粒pENTER-Bak1,通过基因测序鉴定载体序列。将重组载体PmeⅠ线性化、脱磷酸化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAd-Amp的感受态BJ5183细胞中进行基因同源重组。将重组腺病毒质粒pAD-Bak1经PacⅠ酶切线性化后,用Lipofectamine 2000脂质体转染到HEK-293细胞中进行包装扩繁,荧光定量PCR法测定病毒滴度。感染MG63细胞,qPCR和Western blot检测Bak1的表达,MTT检测细胞活性。结果测序及酶切验证pENTER-Bak1构建成功。pAD-Bak1感染MG63细胞,qPCR检测到细胞中Bak1基因过表达(与NC对照组和空白对照组相比P<0.01、P<0.01),Western blot检测到细胞中Bak1蛋白过表达。MTT检测显示与NC对照组相比,细胞活性减弱(P<0.05)。结论成功构建了Bak1重组表达腺病毒,验证了其能够感染MG63细胞表达Bak1蛋白,证明了过表达Bak1可以减弱细胞的活性。为进一步研究Bak1的功能奠定了基础。

IGF-1及TNF-α对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用

目的：通过对大鼠成骨肉瘤ＵＭＲ１０６细胞增殖状态及细胞周期变化的观察，探讨胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ１）及肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对该细胞增殖调节作用的机理。方法：将ＵＭＲ１０６细胞培养于含１０％小牛血清的ＭＥＭ培养基中。细胞长满后换无血清培养７２ｈ，然后分别用生理剂量的ＩＧＦ１和ＴＮＦα刺激细胞１２ｈ，应用３ＨＴｄＲ参入、磺基罗丹明染色法和流式细胞技术对细胞增殖状态及细胞周期进行定量测定。结果：ＩＧＦ１有明显促细胞ＤＮＡ合成作用，并使Ｓ期细胞所占比例明显增加；而ＴＮＦα则具有相反的作用。定量测定细胞增殖也显示ＵＭＲ１０６受ＩＧＦ１的正性调节而受ＴＮＦα的负性调节。结论：ＩＧＦ１和ＴＮＦα对ＵＭＲ１０６细胞增殖的调节作用与该细胞ＤＮＡ复制水平调节有关。

超声灭活后的国人成骨肉瘤细胞(OS-732)的超微结构变化

随着针对骨肉瘤基础研究的深入和保肢手术治疗的开展,有效灭活骨肉瘤组织成为手术当中最为关键的一环,它直接关系到术后复发、远处转移以及生存率的问题。我们采用超声灭活成骨肉瘤细胞（OS-732）,观察灭活后细胞形态和超微结构改变及细胞成活率,为临床应用提供基础研究依据。