淋病奈瑟菌核酸检测试剂盒国家参考品的制备

目的：制备淋病奈瑟菌（ Neisseria gonorrhoeae,NG）核酸检测试剂盒国家参考品。方法分别将10株NG和10株非NG参考菌株在各自适宜的培养基和温度下培养,收获新鲜无污染培养物,用比浊法和显微计数法将不同的培养物制备成10份NG菌悬液阳性参考品、5份精密性参考品和10份非NG菌悬液阴性参考品以及最低检出限参考品,然后利用5种不同来源的NG核酸检测试剂盒验证各种参考品,并考察参考品在不同处理条件下的稳定性。结果每株菌在各自适宜的培养基和温度下培养后,均生长良好,无杂菌污染。经5种试剂盒验证检测,10份阳性参考品的检测结果均为阳性,10份阴性参考品的检测结果均为阴性,精密性参考品检测结果为Ct值的CV均小于5.0%；5种试剂盒的最低检出限均能达到1000/mL,其中试剂盒B和E的最低检出限达100/mL。参考品在2-8℃放置7 d、37℃放置3 d的热稳定性及反复冻融5次以内的稳定性良好。结论制备的NG核酸检测试剂盒国家参考品的准确性、特异性及精密性均符合要求,可用于NG核酸检测试剂盒的质量评价。

2019-2021年四川成都某医院淋病奈瑟菌对大观霉素、阿奇霉素及头孢菌素类药物敏感性检测及结果分析

目的检测我院2019—2021年淋病奈瑟菌临床分离菌株对大观霉素、阿奇霉素及头孢菌素类药物的敏感性,为淋病的治疗和防控提供参考。方法收集并保存淋病奈瑟菌临床分离株,琼脂稀释法和微量肉汤稀释法测定大观霉素、阿奇霉素、头孢曲松和头孢克肟的最小抑菌浓度(MIC),分析比较菌株对各药物的耐药率或低敏率。结果2019—2021年共分离收集淋病奈瑟菌菌株279株。其中未发现对大观霉素的耐药菌株;发现对阿奇霉素耐药菌株31株,耐药率分别为16.00%、8.82%和8.11%,平均耐药率为11.11%;发现对头孢曲松低敏菌株43株,低敏率分别为12.00%、14.71%和18.92%,平均低敏率为15.41%;发现对头孢克肟低敏菌株27株,低敏率分别为4.00%、2.94%和18.92%,平均低敏率为9.68%。每年发现同时对头孢曲松低敏和阿奇霉素耐药的菌株数量均为2株,占比分别为2.00%、2.94%和1.80%,总体占比2.15%。结论大观霉素和头孢曲松仍适合本地区作为治疗淋病的一线药物,需关注本地区淋病奈瑟菌对头孢曲松低敏率的逐年增长趋势。

淋病奈瑟菌快速检测试剂盒的应用

对20例非性病患者和90例疑似淋病患者分别作涂片、培养和淋病奈瑟菌快速检测(简称淋快法),以培养为对照评价淋快法的应用价值。结果表明,淋快法的假阳性率为7.8％,经统计学处理淋快法与培养的阳性结果相同,无显著性差异,在临床中适用于大批量体检标本的检测和高危人群的筛选。

淋病奈瑟菌孔蛋白PorB的原核表达及其在疫苗血清学检测中的初步应用

目的克隆并表达淋病奈瑟菌孔蛋白Por B,以重组蛋白为抗原,间接ELISA检测免疫血清的抗体水平。方法利用PCR从淋病奈瑟菌WHO株基因组中扩增出Por B的基因,克隆入原核表达载体p ET-30a中,构建出重组表达质粒p ET30aPor B,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。表达的蛋白进行SDS-PAGE分析,Western blot检测其反应原性。以纯化的重组蛋白r Por B作为检测抗原建立间接ELISA方法,用于检测淋病疫苗p VAX1-Por B免疫小鼠后的血清抗体水平。结果 PCR扩增得到淋病奈瑟菌孔蛋白Por B基因,表达的重组蛋白r Por B相对分子质量约40 k D,经Ni-NTA亲和层析纯化后的r Por B在SDS-PAGE中显示单一条带,Western blot证明纯化后的r Por B可与淋病奈瑟菌免疫血清特异性结合,具有良好的免疫反应性。间接ELISA结果表明,淋病疫苗p VAX1-Por B免疫小鼠血清Por B特异性抗体滴度为1∶200。结论成功构建了重组原核表达质粒p ET30a-Por B,Por B在大肠杆菌中获得表达。以纯化的r Por B为检测抗原,间接ELISA可以用于淋病疫苗免疫效果的评价。该研究为淋病奈瑟菌感染诊断、疫苗的研究奠定了基础。

泌尿生殖道淋病奈瑟菌、解脲脲原体、人型支原体的联合检测

采用营养琼脂培养法检测淋病奈瑟菌 ,液体培养法检测解脲脲原体和人型支原体 ,调查本地区性传播性疾病的感染情况。 15 0 0例泌尿生殖道检体中 ,淋病奈瑟菌、解脲脲原体、人型支原体检出率分别为 1.13%、2 6 .73%、7.5 3% ;2种或 2种以上病原体混合感染率为 6 .93%。

实时荧光定量PCR法在淋病奈瑟菌感染检测中的应用效果分析

目的:探讨实时荧光定量PCR法在淋病奈瑟菌感染检测中的应用效果。方法:选取淋病奈瑟菌感染检测患者298例为研究对象,分别采用培养检测法及实时荧光定量PCR法从检测线性范围、检测重复性、检测灵敏度、检测特异性及检测试剂稳定性等方面进行比较。结果:经两组方法比较,在检测线性范围、检测重复性、检测灵敏度、检测特异性及检测试剂稳定性等方面,PCR检测法显示了一定的优势,但也存在一定的漏检率。结论:临床上应充分应用各种检测方法的优势,使之相互补充,以提升淋病奈瑟菌的检出率。

泌尿生殖道感染者淋病奈瑟菌、沙眼衣原体及解脲支原体检测结果分析

目的 :了解本地区淋病奈瑟菌、沙眼衣原体及解脲支原体临床感染现状 ,为临床诊断治疗提供可靠依据。方法 :2 0 0 0年 1月～ 2 0 0 2年 12月在我院门诊就诊病人获取泌尿生殖道标本 5 0 0 8份 ,其中男性标本 2 75 9份 ,女性标本 2 2 4 9份。培养法检测淋病奈瑟菌和解脲支原体 ,单克隆抗体免疫荧光法检测沙眼衣原体 ,或男性急性尿道炎患者用直接涂片革兰氏染色检测淋病奈瑟菌。结果 :5 0 0 8份标本中 ,男性 2 75 9份 ,3种病原体阳性者 6 33例 ,阳性检出率为 2 2 .9% ;女性 2 2 4 9份 ,3种病原体阳性者 4 33例 ,阳性检出率为 19.3%。 3种病原体在 2 0 0 0年感染的阳性检出率为 2 6 .5 % ,2 0 0 1年感染的阳性检出率为 18.1% ,2 0 0 2年感染的阳性检出率为 18%。在 3年中 ,淋病奈瑟菌总的阳性率为 4 .4 % ,沙眼衣原体阳性检出率为 3.9% ,解脲支原体阳性检出率为 13%。 10 6 6份阳性标本中 ,患者年龄分布 <2 0岁 97例 ,占 9.1% ;2 0～ 30岁 5 81例 ,占 5 4 .5 % ;31～ 4 0岁 2 84例 ,占 2 6 .6 % ;>4 0岁 10 4例 ,占 9.8%。结论 :对疑为泌尿生殖道感染病人 ,应同时进行 3种病原体的检测 ,防止性传播疾病的慢延。

聚合酶链反应-单链构型多态性检测细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因变异

目的 :检测与分析淋病奈瑟菌 L 型的 cpp B基因 ,探讨细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌 cpp B基因的影响。方法 :用青霉素诱导淋病奈瑟菌成为 L 型并获得稳定 L 型纯培养物 ,用 cpp B基因特异性引物以聚合酶链反应 (PCR)检测稳定 L型纯培养物的 cpp B基因和进行单链构型多态性 (SSCP)分析。结果 :淋病奈瑟菌的细菌型及其 L型都具有 cpp B基因扩增产物 ,但 PCR-SSCP分析可见异常泳动 DNA带型 (细菌型有 2条带、L型有 3条带 )。结论 :细胞壁缺陷淋病奈瑟菌仍然具有 cpp B基因 。

实时荧光定量PCR法检测淋病奈瑟菌感染的效果

①目的 应用实时荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)技术准确定量检测临床标本中淋病奈瑟菌基因 ,同时与金标准———细菌培养法比较其灵敏度和特异度 ,为临床淋病的诊疗提供依据。②方法 采集 173例病人临床标本 ,以PE5 70 0全自动PCR扩增分析仪和淋病奈瑟菌实时荧光定量PCR检测试剂盒进行核酸检测。同时 ,用含PolyViteX的巧克力板对淋病奈瑟菌进行分离 ,用ATBExpression自动细菌鉴定仪及配套的APINH进行鉴定。③结果 173份临床标本中 ,荧光定量PCR法示 4 7例淋病奈瑟菌阳性 ,阳性率为 2 7.2 % ;细菌培养法示 4 1例淋病奈瑟菌阳性 ,阳性率为 2 3.7%。与细菌培养法相比 ,荧光定量PCR法的灵敏度为 10 0 % ,特异度为 95 .5 % ,两者的符合率为 96 .5 %。④结论 荧光定量PCR技术具有简便、快捷、灵敏度高、特异度高、定量准确等优点 。

淋病奈瑟菌三种检测方法的评价

本文评价泌尿生殖道标本中淋病奈瑟菌（NG）用直接涂片、细菌培养和实时荧光PCR三种方法同时检测300例标本，并设50例健康对照组。直接涂片革兰氏染色法检出率为28．7％；培养法检出率为26．3％；PCR法检出率为31．7％。实时荧光PCR法特异性强、灵敏度高，但有假阳性^[1]；培养法是诊断NG感染的“金标准”Ⅲ，检出率较PCR法低；直接涂片革兰氏染色法易被球杆菌等混淆，易误诊。现将结果报告如下。

细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因的检测

目的 :了解细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌隐蔽性质粒B基因 (cppB)的影响。方法 :用青霉素诱导淋病奈瑟菌成L型 ,以非高渗液体培养基传代培养并获得L型纯培养物 ,用cppB基因特异性引物以聚合酶链反应 (PCR)检测不同代次稳定L型纯培养物的cppB基因。结果 :淋病奈瑟菌细菌型及其传 1～ 4代的L型培养物具有cppB基因 ,传 5代后的L型培养物不能检出cppB基因。结论 :细胞壁缺陷可造成淋病奈瑟菌隐蔽性质粒丢失 ,导致cppB基因PCR检测漏诊。

淋病奈瑟菌的细菌培养与PCR方法检测的结果对比

目的:比较细菌培养法与聚合酶链反应(PCR)检测方法对淋病奈瑟菌的检测效果。方法:对60例疑似淋病患者生殖道分泌物同时进行细菌培养、PCR检测,并对其结果进行比较分析。结果:采用细菌培养法检测60例样本中26例为淋病奈瑟菌阳性,阳性检出率为43.3%;采用PCR方法检测60例样本中45例为淋病奈瑟菌阳性,阳性检出率为75.0%。两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对于淋病奈瑟菌采用PCR检测方法具有高效率、高特异性、低误诊率、低漏诊率,是临床上检测淋病奈瑟菌的好方法。

沙眼衣原体、淋球菌和解脲脲原体的检测及筛查方法研究进展

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、淋病奈瑟菌,(Neisseria gonorrhoeae,NG)和解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)是泌尿生殖系统感染常见的病原体,在我国感染率较高且较容易出现混合感染。因此,建立一种能够同时检测这3种病原体的检测方法对降低其传染性及危害性具有重要的临床意义,本文就沙眼衣原体、淋球菌、解脲脲原体的检测方法及筛查方法的研究进展进行概述。

三种检测淋病奈瑟菌方法的比较

目的:比较三种检测淋病奈瑟菌(NG)的方法。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测法、NG细菌培养法和直接涂片革兰(Gram)染色法,对97例临床分泌物标本同时进行检测。结果:NG3种检测方法以PCR最为灵敏,且特异性强。细菌培养检出率次之,Gram染色再次之。结论:PCR是一种比较先进的分子生物学检验技术,在淋球菌的检测中显示出优越性及独到之处,可提高检验工作的质量,值得推广。

关于细菌培养法和PCR检测法在淋病奈瑟菌检测中的效果

目的探讨在淋病奈瑟菌(NG)检测中应用聚合酶链反应(PCR)法、细菌培养法的效果。方法选择2015年2月至2016年5月期间在我院接受诊治的疑似淋病患者88例作为对象,取其生殖道分泌物分别应用细菌培养法、PCR检测法进行检测,观察2种方法检测结果。结果 PCR检测法、细菌培养法的检测阳性检出率分别为76.14%、44.32%,PCR检测法显著高于细菌培养法(P<0.05)。结论应用PCR检测法实施淋病奈瑟菌检测可取得更加理想的检测效果。

聚合酶链反应在淋病奈瑟氏菌检测中的应用

聚合酶链反应在淋病奈瑟氏菌检测中的应用湖南医科大学检验系临床微生物学、免疫学教研室（４１００７８）吴水河，查国章湖南医科大学９０级本科师资班学员周国兴湖南医科大学湘雅医院现代技术研究中心范春，张阳德淋病是我国目前流行的性传播性疾病中发病率最高的病种。...

PCR检测淋病奈瑟氏菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人乳头瘤病毒的核酸

1997-01～1998-07我院门诊对1435例泌尿生殖系统感染的尿道及阴道分泌物和慢性前列腺炎的前列腺液用PCR检测淋病奈瑟氏菌(NGH)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)及人类乳头瘤病毒(HPV)等四种病原体的核酸,结果报告如下。 材料与方法 ①研究对象:本组1435例病人为我院皮肤科、妇产科和泌尿外科就诊的泌尿生殖系统感染病例,其中男性427例,女性1008例。②标本采集:用加有无菌生理盐水之无菌有盖塑料离心管,