一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ型受体的构建

目的设计并构建一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ受体(tTGF-βRⅡ)。方法 RT-PCR方法扩增TGF-βⅠ的CDS序列、tTGF-βRⅡ,并将其分别克隆至pGBKT7和pGADT7载体中。利用酵母双杂交和GST-pulldown试验检测tTGF-βRⅡ与TGF-βⅠ间的相互作用。人工合成该tTGF-βRⅡ多肽。结果成功地设计并克隆了一种新的tTGF-βRⅡ,其可以与配体TGF-βⅠ结合。结论制备的tTGF-βRⅡ可以作为TGF-βRⅡ的拮抗剂,竞争性的与TGF-βⅠ结合,为瘢痕治疗奠定了基础。

截短型转化生长因子-βⅡ型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达

目的 研究截短型转化生长因子 -β(TGF-β) 型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达对 TGF-β1 自分泌的抑制作用。 方法 组织块法体外培养正常皮肤成纤维细胞 ,加入重组人 (rh) TGF- β1 (5ng/ ml)或含截短型 TGF- β 型受体基因的重组腺病毒 (50 pfu/ cell) ,并用 Northern印迹观察其对 TGF-β1 的基因调控。 结果 rh TGF-β1 能上调TGF-β1 和 I型前胶原的基因表达。截短型 TGF-β 型受体的过度表达能减少细胞 TGF-β1 的基因表达。 结论 截短型TGF- β 型受体的过度表达可以通过阻断 TGF- β1 的信号转导来抑制皮肤成纤维细胞 TGF- β1 的自分泌。

盆炎通络方对输卵管炎性阻塞性不孕症模型大鼠转化生长因子-β1、Ⅱ型转化生长因子-β受体和Smad3表达的影响

目的:研究盆炎通络方对输卵管炎性阻塞性不孕症(Salpingitis Obstructive Infertility,SOI)模型大鼠转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)、Ⅱ型TGF-β受体(TGF-βTypeⅡReceptor,TβRⅡ)和Smad3表达的影响,并探讨其作用机制。方法:采用双侧输卵管注射苯酚糊剂法制备SOI大鼠模型。造模成功后随机分为假手术组、模型组、康妇炎胶囊组、盆炎通络方低剂量组、盆炎通络方中剂量组、盆炎通络方高剂量组共6组。灌胃治疗30 d后,观察输卵管外观形态,并收集输卵管组织,采用苏木精-伊红染色法观察病理情况,免疫组化法检测输卵管组织中TGF-β1、TβRⅡ和Smad3表达。结果:肉眼观察,与模型组对比,各治疗组输卵管组织充血、肿胀现象均有不同程度的改善,以盆炎通络方高剂量组最为明显。光镜下,各治疗组均不程度地减轻了大鼠输卵管组织炎性反应、改善了输卵管组织纤维化。与假手术组对比,模型组输卵管组织中TGF-β1、TβRⅡ和Smad3表达量明显增加(P<0.01)。与模型组对比,各治疗组输卵组织中TGF-β1、TβRⅡ和Smad3表达量均减少(P<0.05,P<0.01)。结论:盆炎通络方是治疗SOI的有效方剂,其可能的机制是下调输卵管组织中TGF-β1及TβRⅡ和Smad3表达,减轻炎症反应、抑制输卵管组织纤维化,从而改善输卵管组织结构。

洛沙坦对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子-β_1及其Ⅱ型受体表达的影响及机制

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂洛沙坦对糖尿病 (DM )大鼠肾脏的保护作用及其作用机制。 方法 大鼠随机分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和DM洛沙坦治疗组 (DL组 ) ,每组 10只。观察 8周后用半定量RT PCR检测各组肾皮质转化生长因子 βⅡ型受体 (TβRⅡ)和纤维连接蛋白 (FN)mRNA的表达。用免疫组化检测各组肾皮质转化生长因子 β1(TGF β1)、TβRⅡ和FNmRNA的表达。检测血糖 (BG )、尿素氮 (BUN )、肌酐 (Cr)、血胰岛素 (Ins)、AngⅡ、尿白蛋白排泄率(UAER)。 结果 DM组 8周出现平均肾小球体积、肾重 /体重增加 ,UAER、血BUN和Cr水平上升(P <0 .0 5)。DM组肾皮质TβRⅡ和FNmRNA的表达明显增加 ,TGF β1、TβRⅡ和FNmRNA的表达也显著增加 (P <0 .0 5)。洛沙坦治疗 8周后 ,DL组平均肾小球体积、肾重 /体重减少 ,UAER、血BUN和Cr水平下降 (P <0 .0 5)。肾皮质TβRⅡ和FNmRNA的表达降低 ,TGF β1、TβRⅡ和FNmRNA的表达也降低 (P <0 .0 5)。 结论 洛沙坦对DM大鼠肾脏具有保护作用。其机制可能为洛沙坦下调TGF β系统的表达 ,后者抑制肾细胞肥大、减少细胞外基质 (ECM)

转化生长因子-β_1Ⅱ型受体基因在瘢痕疙瘩中改变的实验研究

目的通过检测瘢痕疙瘩中的转化生长因子-β1Ⅱ型受体(TβRⅡ)PolyA与CA重复序列两个基因突变热点的改变情况,论证瘢痕疙瘩是否与肿瘤具有相同的基因改变。方法选取瘢痕疙瘩标本20例、正常皮肤标本8例,提取标本中的DNA;在TβRⅡ基因PolyA位点和CA重复序列两个突变热点两侧设计并合成引物,利用PCR仪扩增,对PCR产物进行单链构象多态性分析(PCR-SSCP),PCR产物纯化后自动测序仪鉴定基因突变的位点和类型。结果PCR-SSCP显示,20例瘢痕疙瘩标本的TβRⅡPolyA位点有4例、CA重复序列有1例显示泳动条带较正常加快,且均缺失了1bp;基因测序发现,4例SSCP阳性的瘢痕疙瘩标本TβRⅡPolyA位点均出现一个A的缺失突变,正常皮肤基因序列正常;CA重复序列基因测序未见异常。结论瘢痕疙瘩组织中的TβRⅡPolyA和CA重复序列位点表现出类似肿瘤中所发现的基因缺失突变。

道地通管汤对输卵管炎大鼠转化生长因子-βⅡ型受体和Smad2的mRNA表达的影响

目的观察道地通管汤对输卵管炎大鼠输卵管组织中转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)mRNA和Smad2 mRNA的影响。方法 68只雌性SD大鼠,随机抽取12只作为正常组,剩余大鼠采用混合菌制成输卵管炎模型,建模成功的48只大鼠分为模型组和道地通管汤低、中、高剂量组,各12只。正常组与模型组给予生理盐水灌肠,道地通管汤低、中、高剂量组分别给予不同浓度的道地通管汤灌肠[0.35 g/(100 g·d)、0.7 g/(100 g·d)、1.4 g/(100 g·d)],并于给药第15天、30天随机抽取每组6只大鼠检测其输卵管组织中TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的相对表达量情况。结果 (1)与正常组比,模型组给药第15、30天时TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的表达量均增高(P<0.05);道地通管汤各剂量组给药第30天时,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)与模型组比,给药第15、30天时道地通管汤中、高剂量组TGF-βRⅡ和Smad2mRNA的表达量均降低(P<0.05),给药第15天时道地通管汤低剂量组TGF-βRⅡ的表达量也降低(P<0.05)。(3)道地通管汤各剂量组中TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的表达量呈低剂量组>中剂量组>高剂量组,给药第30天时道地通管汤低剂量组与道地通管汤高剂量组的TGF-βRⅡ表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),其余组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)道地通管汤各剂量组中,给药第30天时TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的表达量均低于给药第15天,其中道地通管汤各剂量组中Smad2 mRNA的表达量组内比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论道地通管汤能抑制输卵管炎性大鼠输卵管组织中TGF-βRⅡ和Smad2的mRNA表达;道地通管汤给药30 d作用效果较好,且道地通管汤中剂量与高剂量作用效果相近。

转化生长因子-βⅡ型受体在胃癌中的表达及临床意义

目的 :研究TGF βRⅡ型受体在胃癌组织中的表达意义。 方法 :采用免疫组化SP法 ,检测 6 2例胃癌组织中TGF βRⅡ的表达情况。结果 :胃癌组织中TGF βRⅡ型受体表达阳性率为 14 5 % (9/6 2 ) ,与Rorrmann分型、浸润深度相关 (P <0 0 5 )。生存期超过 5年的患者阳性率显著高于生存期低于5年者 (P <0 0 5 )。结论 :TGF RⅡ参与胃癌的进展 。

血管紧张素II1型受体和转化生长因子-β_1在慢性移植肾肾病中的关系及意义

目的研究血管紧张素II1型受体(AT1R)和转化生长因子-β(1TGF-β1)在慢性移植肾肾病(CAN)中的相互关系及意义。方法采用免疫组织化学技术及计算机图像分析系统,观测19例CAN患者移植肾组织中AT1R和TGF-β1的表达情况,分析AT1R同TGF-β1表达和CAN病理分级之间的相互关系。结果CAN移植肾组织中AT1R和TGF-β1的表达比正常肾组织明显增加(P<0.001),并随CAN病理分级呈逐渐递增的趋势;AT1R和TGF-β1两者在肾小球和肾小管间质中的表达呈正相关(r=0.843,P<0.001及r=0.836,P<0.001)。结论血管紧张素II(ATII)通过与AT1R结合,并通过TGF-β1的介导,在CAN移植肾的纤维化进程中起着重要作用。

通肾络胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子-β_1及其Ⅱ型受体表达的影响

目的:观察中药通肾络胶囊对糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)及转化生长因子βⅡ型受体(TβRⅡ)表达的影响,探讨通肾络胶囊对DN大鼠肾脏保护作用的可能机制。方法:采用单侧肾脏切除并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法复制DN大鼠模型。50只大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、缬沙坦组、糖适平组、通肾络胶囊组,每组10只。动态检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、24h尿微量白蛋白(24h mALB),末次给药后测定大鼠血浆糖化血红蛋白(HblAc),计算肌酐清除率(Ccr),透射电镜观察各组大鼠肾脏超微结构改变,应用免疫组化技术及图像采集分析系统测定各组大鼠肾脏组织中TGF-β1和TβRⅡ的表达。结果:通肾络胶囊可显著降低DN大鼠FBG、HblAc、24h mALB的水平,延缓Ccr的下降,减轻肾小球基底膜(GBM)增厚程度,降低TGF-β1、TβRⅡ的表达。结论:通肾络胶囊可能通过降低TGF-β1、TβRⅡ的表达调节ECM代谢从而发挥对DN大鼠肾脏的保护作用。

噬菌体肽库筛选转化生长因子βⅡ型受体亲和肽

目的:从噬菌体随机肽库中筛选转化生长因子β(TGF-β)Ⅱ型受体的亲和短肽。方法:以重组可溶性人TGF-βⅡ型受体作为靶标,应用噬菌体随机十二肽库进行筛选,经过3轮淘选,提取阳性噬菌体克隆ssDNA,测序并进行序列分析。结果:通过筛选噬菌体获得富集,挑选10个能与人TGF-βⅡ型受体特异性结合的噬菌体克隆,测序得到4个核酸序列,未发现共有保守序列。结论:通过噬菌体肽库技术能筛选出与TGF-βⅡ型受体结合的噬菌体展示肽,为进一步研究TGF-βⅡ型受体亲和短肽及在抗肝纤维化中的作用提供依据。

转化生长因子β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在人类肾小球疾病中的表达及促使肾组织硬化的机理

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其Ⅰ、Ⅱ型受体(TGF-βRⅠ、Ⅱ)在人类肾小球疾病中的肾内表达位点及其与各肾小球疾病的关系。方法采用免疫组化SABC法检测系膜增生性肾炎(MsPGN)22例,系膜毛细血管性肾炎(MPGN)6例,局灶节段性肾小球硬化(FGS)9例,膜性肾病(MN)4例中TGF-β1、TGF-βRⅠ、Ⅱ的表达。结果TGF-β1、TGF-βRⅠ、Ⅱ在各肾小球疾病中均有不同程度的阳性表达。各组中MPGN表达均呈强阳性,差异显著(P<0.05);各组球-管染色强度存在显著差异(P<0.05)。结论TGF-β1、TGF-βRⅠ、Ⅱ的过度表达参与肾小球疾病的进展;其在肾小球、小管及间质细胞均有表达位点,但在肾小管-间质表达呈强阳性,而肾小球呈弱表达。

转化生长因子βI型及Ⅱ型受体mRNA在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义

目的:检测转化生长因子βI型受体(TβRI)及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)mRNA在正常子宫内膜组织及子宫内膜样腺癌组织中表达水平的差异,以探讨TβRI及TβRⅡ在子宫内膜癌组织中的临床意义。方法:利用RT-PCR方法检测15例正常子宫内膜组织及50例子宫内膜样腺癌组织中TβRI及TβRⅡ的mRNA表达水平,比较这两种受体在正常子宫内膜组织及子宫内膜样腺癌组织中表达的差异,并分析这两种受体的表达水平与临床病理参数之间的关系。结果:TβRI及TβRⅡmRNA在子宫内膜样腺癌组织中的表达水平均明显低于正常子宫内膜组织(P<0.05),且TβRI及TβRⅡmRNA的表达水平与子宫内膜样腺癌的临床病理分期、肌层浸润深度及淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与组织学分级未见明显相关(P>0.05)。结论:TβRI及TβRⅡ基因转录水平表达的异常可能与子宫内膜癌的发生和发展密切相关,检测子宫内膜样腺癌组织中TβRI及TβRⅡmRNA的表达水平对评价子宫内膜癌的预后有重要价值,可能为将来子宫内膜癌的分子靶向治疗提供新的理论依据,从而寻找出潜在的治疗靶点。

转化生长因子-β_1及其受体在大肠癌的表达及其意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体TβRⅡ在大肠癌发生发展过程中的作用。方法采用免疫组化SP法从蛋白水平分析TGFβ1、TβRⅡ在大肠腺瘤及大肠癌组织中的表达情况。结果TGFβ1蛋白阳性表达率在腺瘤组织为28.6%,大肠癌组织中为57.1%(P<0.05);TβRⅡ在大肠癌组织中的表达率为51.8%,低于腺瘤组织(90.5%)(P<0.01);TGFβ1、TβRⅡ表达的改变与大肠癌浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05或P<0.001)。结论TGFβ1的过度表达与大肠癌侵袭转移演进密切相关;TβRⅡ的失表达不仅有助于提高细胞对TGFβ1的生长抵抗,也增强了大肠癌的侵袭性。

糖尿病大鼠视网膜内转化生长因子-β_2及其受体的表达

目的 探讨糖尿病视网膜损伤和转化生长因子 β2 (TGF -β2 )产生的关系以及 TGF- β2的作用机制。方法 链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型,用 Western blot方法检测不同病程糖尿病动物模型(2 周及 20 周)视网膜中 TGF -β2 的表达,RT -PCR测定其受体 TGF- βRⅠ及 TGF βRⅡ的表达。结果 糖尿病大鼠视网膜内 TGF β2 随糖尿病进展表达增加,其受体 TGF βRⅠ的表达和对照组相比无显著差异,而TGF- βRⅡ的表达显著增加。结论 TGF- β2 在糖尿病视网膜病变(DR)形成过程中有重要作用,并有可能通过TGF- βRⅡ型受体起作用。

高亲和PDGFβR多肽修饰的截短型TβRⅡ的可溶性表达条件优化

目的 探讨高亲和血小板衍生生长因子受体(Platelet derived growth factor-β receptor, PDGFβR)多肽ZPDGFβR修饰的截短型转化生长因子β Ⅱ型受体(Truncated transforming growth factor-β receptor type Ⅱ,tTβRⅡ)的重组蛋白(Z-tTβRⅡ)最佳可溶性表达的条件。方法 将含有原核表达质粒pET28/Z-tTβRⅡ的阳性大肠杆菌(Rossta/pET28-Z-tTβRⅡ)置于LB培养基中培养,接着加入不同浓度的IPTG,使其终浓度为0.2、0.4、0.6、0.8 mmo/L,应用SDS-PAGE技术分析在不同温度时间下(16℃、18 h, 20℃、20 h和37℃、6 h)重组蛋白Z-tTβRⅡ的可溶性表达。结果 Z-tTβRⅡ在16℃、18 h下,0.8 mmol/L IPTG时,诱导后全菌表达约22%和诱导后上清表达约13%;Z-tTβRⅡ在20℃、20 h下,诱导后全菌0.8 mmol/L IPTG时表达约23%,诱导后上清0.2 mmol/L IPTG时表达约14%;Z-tTβRⅡ在37℃、6 h下,0.2 mmol/L IPTG时,诱导后全菌约30%和诱导后上清约20%。结论 Z-tTβRⅡ蛋白最佳表达条件为37℃、6 h、IPTG浓度为0.2 mmo/L。

骨髓纤维化患者TGF-β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体测定的临床意义

目的 研究转化生长因子 β1(TGF β1)及其Ⅰ、Ⅱ型受体 (TGFR1及TGFR2 )在骨髓纤维化发生、发展中的作用 ,并观察其在骨髓纤维化预后方面的意义。方法 用SABC免疫组织化学方法观察TGF β1及TGFR1、TGFR2在 2 3例骨髓纤维化患者骨髓组织的表达情况 ,并应用ELISA法测定骨髓纤维化患者血清中的TGF β1水平。结果 原发性和继发性骨髓纤维化患者骨髓组织TGF β1及TGFR1的表达水平均明显高于对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,而TGFR2的表达水平与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。骨髓纤维化患者血清TGF β1水平明显高于对照组 ,差异非常显著 (P <0 .0 1) ,继发性骨髓纤维化患者升高更明显 ,骨髓纤维化临床缓解后血清TGF β1水平下降至接近正常。结论 TGF β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体参与骨髓纤维化的发生 ,骨髓纤维化患者TGF β1、TGFR1的检测有助于判断其预后。

培哚普利和缬沙坦对肝纤维化大鼠TGF-β_1及其Ⅱ型受体mRNA与Smad3、Smad7表达的影响

目的 观察培哚普利和缬沙坦抗大鼠肝纤维化的疗效。方法 6 0只Wistar大鼠随机平均分为 4组 :正常组、模型组、培哚普利治疗组和缬沙坦治疗组。四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型 ,治疗组于造模第 4周开始分别予以培哚普利和缬沙坦灌胃。RT PCR检测肝组织转化生长因子 β1(TGF β1)、Ⅱ型受体 (TGFRⅡmRNA) ;免疫组化技术检测TGF β1、Smad3及Smad7在肝内的表达及定位 ,肝组织HE染色检测病理改变。结果 与模型组大鼠比较 ,经培哚普利或缬沙坦治疗大鼠肝内TGF β1与TGFRⅡmRNA、以及Smad3蛋白表达明显降低 ;而Smad7的表达增加。TGF β1与Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7则主要在肝细胞浆表达 ,上述物质在两种药物组之间表达差异无显著性 (P >0 0 5 )。培哚普利或缬沙坦治疗后肝小叶均趋于正常 ,纤维间隔明显变薄。结论 培哚普利或缬沙坦均能有效地减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度 ,其机理可能与直接或间接抑制肝内TGF β1、与TGFRⅡmRNA及Smad3表达 ,并促进Smad7表达有关。

单发性与多发性瘢痕疙瘩转化生长因子-β_1Ⅱ型受体Poly A位点基因突变研究

目的检测瘢痕疙瘩组织转化生长因子-β1Ⅱ型受体(transforming growth factor-1βreceptorⅡ,TβRⅡ)PolyA位点基因突变情况,探讨单发性与多发性瘢痕疙瘩发病机制差异。方法瘢痕疙瘩标本20例,单发性14例,多发性6例,提取组织中DNA;在TβRⅡ基因Poly A位点两侧设计并合成引物,利用PCR仪扩增TβRⅡDNA;对PCR产物进行单链构象多态性分析(PCR-SSCP);PCR产物纯化后,利用自动测序仪鉴定基因突变的类型。结果瘢痕疙瘩组织中TβRⅡPoly A位点表现出基因缺失突变,其阳性率多发性瘢痕疙瘩为50%(3/6),单发性瘢痕疙瘩为7.1%(1/14),二者差异有统计学意义(P<0.05)。结论多发性与单发性瘢痕疙瘩发病机制可能不同。

结肠癌组织中TGFβ_1及其Ⅱ型受体和Smad4蛋白的表达

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Sm ad4的关系,及其在结肠癌中的可能作用机制。方法用EnV ision免疫组化法检测38例石蜡包埋人结肠癌标本中TGF-β1、TβRⅡ和Sm ad4蛋白的表达情况。结果TGF-β1阳性率为52.6%(20/38),65.8%的TβRⅡ和63.2%的Sm ad4表达下降。Sm ad4的表达与肿瘤分化程度及Dukes分期相关(P<0.05)。TGF-β1与TβRⅡ之间有相关关系(P<0.05)。结论TGF-β1与TβRⅡ对结肠癌的发生可能有协同作用。Sm ad4是TGF-β信号通路中的关键因子,但Sm ad4上游可能还存在其他信号通路,调控其表达。