供转染的截短型PDGF-α受体高滴度腺病毒的制备及作用分析

目的 制备高滴度供转染的切除功能结构域的血小板衍生生长因子α受体 (truncatedPDGF αR)重组腺病毒 ,观察其在对平滑肌细胞增殖的影响。方法 通过基因重组技术 ,切除PDGF α受体功能结构域 ,将cDNA片段克隆入腺病毒载体 ,重组质粒导入病毒包装细胞 2 93扩增制备高滴度的腺病毒 ,感染大鼠主动脉平滑肌细胞 ,3 H TdR掺入法测定腺病毒对PDGF AA介导的增殖反应影响。结果 重组腺病毒滴度最高为 1.4× 10 5CFU/mL ;截短型PDGF α感染平滑肌细胞 ,PDGF AA介导的3 H TdR掺入减少。结论 制备高滴度供转染的截短型PDGF α受体腺病毒 ,感染平滑肌细胞后 ,PDGF AA介导的增殖反应减弱。

一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ型受体的构建

目的设计并构建一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ受体(tTGF-βRⅡ)。方法 RT-PCR方法扩增TGF-βⅠ的CDS序列、tTGF-βRⅡ,并将其分别克隆至pGBKT7和pGADT7载体中。利用酵母双杂交和GST-pulldown试验检测tTGF-βRⅡ与TGF-βⅠ间的相互作用。人工合成该tTGF-βRⅡ多肽。结果成功地设计并克隆了一种新的tTGF-βRⅡ,其可以与配体TGF-βⅠ结合。结论制备的tTGF-βRⅡ可以作为TGF-βRⅡ的拮抗剂,竞争性的与TGF-βⅠ结合,为瘢痕治疗奠定了基础。

截短型转化生长因子-βⅡ型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达

目的 研究截短型转化生长因子 -β(TGF-β) 型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达对 TGF-β1 自分泌的抑制作用。 方法 组织块法体外培养正常皮肤成纤维细胞 ,加入重组人 (rh) TGF- β1 (5ng/ ml)或含截短型 TGF- β 型受体基因的重组腺病毒 (50 pfu/ cell) ,并用 Northern印迹观察其对 TGF-β1 的基因调控。 结果 rh TGF-β1 能上调TGF-β1 和 I型前胶原的基因表达。截短型 TGF-β 型受体的过度表达能减少细胞 TGF-β1 的基因表达。 结论 截短型TGF- β 型受体的过度表达可以通过阻断 TGF- β1 的信号转导来抑制皮肤成纤维细胞 TGF- β1 的自分泌。

HER2靶向重组截短型Bid片段融合蛋白对骨肉瘤细胞的促凋亡作用

目的:观察人上皮细胞生长因子受体2(HER2)靶向重组的活性截短型Bid(tBid)融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素(PE)的转膜结构域基因(PEII)和tbid基因连接,构建成immuno-tbid(e23sFv-PEII-tbid)基因,将其克隆入真核表达载体pCMV中,转染SOSP-9607细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测观察其促凋亡作用。结果:转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测出tB id的表达,SOSP-9607细胞出现明显的固缩,核浓缩等凋亡特征。AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,凋亡率为42%,对照组细胞仅6%,表明细胞膜表面有磷脂酰丝氨酸外翻,提示重组immuno-tbid基因表达后有促凋亡作用。结论:重组immuno-tbid基因可在转染的SOSP-9607细胞中表达,并诱导其细胞凋亡。