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尼帕病毒截短G蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量:
1
1
作者
王琼
莫若
+5 位作者
张颖
冯娜
闫飞虎
王铁成
王开
赵永坤
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期1223-1231,共9页
以截短的尼帕病毒(NiV)G基因原核表达产物为抗原建立检测尼帕病毒抗体的间接ELISA检测方法。对编码尼帕病毒G蛋白基因的部分序列进行扩增,将扩增获得的目的片段克隆至原核表达载体pET-30a(+),并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。菌落PCR鉴定后...
以截短的尼帕病毒(NiV)G基因原核表达产物为抗原建立检测尼帕病毒抗体的间接ELISA检测方法。对编码尼帕病毒G蛋白基因的部分序列进行扩增,将扩增获得的目的片段克隆至原核表达载体pET-30a(+),并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。菌落PCR鉴定后,在最佳诱导条件下表达目的蛋白。用Ni-NTA柱纯化截短的G蛋白,并进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以纯化的蛋白为抗原建立尼帕病毒抗体间接ELISA检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性、稳定性进行验证。结果显示:成功构建重组质粒pET-30a(+)-NiV-G;表达的尼帕病毒截短G蛋白分子质量为50 ku,与预期值相符;截短的G蛋白能被His-tag抗体、抗尼帕病毒G蛋白粗提IgG识别。以该蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法检测已知阳性血清尼帕病毒抗体效价为1︰20480,裂谷热病毒、西尼罗病毒及克里米亚-刚果出血热病毒阳性马血清的检测结果均为阴性,且该方法批内、批间试验变异系数均小于10%。结果表明,成功构建了重组质粒pET-30a(+)-NiV-G,并诱导表达尼帕病毒截短G蛋白。以该蛋白建立的尼帕病毒抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、灵敏性、稳定性,可用于尼帕病毒疫苗免疫效果的评价、尼帕病毒病的监测及尼帕病毒抗体检测试剂盒的研发。
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关键词
尼帕病毒
间接ELISA
原核表达
截短g蛋白
原文传递
题名
尼帕病毒截短G蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量:
1
1
作者
王琼
莫若
张颖
冯娜
闫飞虎
王铁成
王开
赵永坤
机构
吉林农业大学动物医学院
中国农业科学院长春兽医研究所
东北林业大学野生动物与自然保护地学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期1223-1231,共9页
基金
国家重点研发计划项目(2022YFC2305005)。
文摘
以截短的尼帕病毒(NiV)G基因原核表达产物为抗原建立检测尼帕病毒抗体的间接ELISA检测方法。对编码尼帕病毒G蛋白基因的部分序列进行扩增,将扩增获得的目的片段克隆至原核表达载体pET-30a(+),并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。菌落PCR鉴定后,在最佳诱导条件下表达目的蛋白。用Ni-NTA柱纯化截短的G蛋白,并进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以纯化的蛋白为抗原建立尼帕病毒抗体间接ELISA检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性、稳定性进行验证。结果显示:成功构建重组质粒pET-30a(+)-NiV-G;表达的尼帕病毒截短G蛋白分子质量为50 ku,与预期值相符;截短的G蛋白能被His-tag抗体、抗尼帕病毒G蛋白粗提IgG识别。以该蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法检测已知阳性血清尼帕病毒抗体效价为1︰20480,裂谷热病毒、西尼罗病毒及克里米亚-刚果出血热病毒阳性马血清的检测结果均为阴性,且该方法批内、批间试验变异系数均小于10%。结果表明,成功构建了重组质粒pET-30a(+)-NiV-G,并诱导表达尼帕病毒截短G蛋白。以该蛋白建立的尼帕病毒抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、灵敏性、稳定性,可用于尼帕病毒疫苗免疫效果的评价、尼帕病毒病的监测及尼帕病毒抗体检测试剂盒的研发。
关键词
尼帕病毒
间接ELISA
原核表达
截短g蛋白
Keywords
Nipah virus
indirect ELISA
prokaryotic expression
truncated
g
protein
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
尼帕病毒截短G蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
王琼
莫若
张颖
冯娜
闫飞虎
王铁成
王开
赵永坤
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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