湿生扁蕾呫吨酮联合益生菌调控TGF-β1/Smads通路及炎性因子干预大鼠结肠炎癌转化

目的基于TGF-β1/Smads通路及炎性因子探讨湿生扁蕾呫吨酮(GPX)联合益生菌干预结肠炎癌转化的机制。方法将90只大鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组[饮用右旋糖酐硫酸钠(DSS)3 d]和给药组。其中,模型组又分为炎症期组、炎癌前期组[注射二甲基肼(DMH)4周]、炎癌中期组(注射DMH 13周)、炎癌末期组(注射DMH 21周);给药组是在炎癌末期组的基础上边建模边给药且根据所给药物再分组,即饮用DSS 3 d,在饮用DSS的第1天就开始灌胃各组药物,每日1次,持续8周,分别为GPX 69.3 mg/kg(GPX组)、益生菌400 mg/kg(益生菌组)、GPX 69.3 mg/kg+益生菌400 mg/kg(联合组)、沙利度胺13.5 mg/kg(沙利度胺组)。对各组疾病活动指数(DAI)、结肠长度和湿质量指数进行比较;观察大鼠结肠瘤体特征;HE染色观察结肠病理变化;Western blot和酶联免疫吸附试验分别检测转化生长因子(TGF)-β1,Smad4,Smad7和白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果与炎癌末期组比较,各给药组结肠长度增加,结肠壁厚、湿质量指数与瘤体最大直径降低,TGF-β1和Smad4蛋白表达水平升高,Smad7、IL-6、TNF-α水平降低,GPX组与联合组DAI得分降低(P<0.05),GPX组、益生菌组和联合组的肠黏膜层结构和形态改善,结肠隐窝结构与杯状细胞数量增加;与益生菌组和GPX组比较,联合组结肠壁厚、结肠湿质量指数、瘤体数量降低,TGF-β1和Smad4蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。结论GPX和益生菌联用可抑制结肠炎癌转化,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smads通路和抑制IL-6、TNF-α表达有关。

基于质控与药效统一的扁蕾颗粒标准提升探讨

采用薄层色谱法,对扁蕾颗粒中齐墩果酸进行定性鉴别;采用萃取重量法测定扁蕾颗粒中乙酸乙酯提取物;采用高效液相色谱法测定药效成分木犀草素的含量。色谱柱为Agilent C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(50:50),V/V;流速1.0mL/min;检测波长为350nm;柱温:25℃。薄层色谱图谱获得斑点较多,分离效果好,阴性对照无干扰;乙酸乙酯提取物为2.56mg/g~2.87mg/g;木犀草素在0.11μg~1.06μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.10%,RSD为2.05%(n=6)。该方法科学合理,简单易行,可较为全面的评价扁蕾颗粒质量。

蒙药扁蕾HPLC指纹图谱及3种成分含量测定研究

目的建立蒙药扁蕾的高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)指纹图谱,建立其中3种成分的含量测定方法。方法采用HPLC法,选用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃,甲醇-0.1%乙酸洗脱,紫外检测波长260 nm,流速0.8 mL/min,记录时间110 min;采用化学计量学软件建立10批扁蕾HPLC指纹图谱,进行相似度评价并测定样品中3种成分的含量。结果建立了蒙药扁蕾药材的指纹图谱,确定了16个特征峰,其中3、4、11号峰分别为当药黄素、当药醇苷和木犀草素,10批药材相似度≥0.974;含量测定结果显示,3种成分的线性关系良好(r≥0.9991),加样回收率为97.30%~100.2%。结论此研究所建立的HPLC指纹图谱和含量测定方法具有操作简便、准确、重复性好等特点,可用于蒙药扁蕾药材的质量控制。

湿生扁蕾质量标准研究

目的:建立湿生扁蕾的质量控制方法。方法:采用薄层色谱法对湿生扁蕾中有效成分熊果酸进行定性鉴别,采用HPLC法测定湿生扁蕾中有效成分木犀草素、当药醇苷、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基[口山]酮和芒果苷的含量。结果:在TLC色谱中,熊果酸色谱鉴别斑点清晰,且阴性对照无干扰;HPLC测定木犀草素、当药醇苷、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基[口山]酮和芒果苷四种成分线性关系良好(r≥0.9998),平均加样回收率分别为99.85%、97.35%、97.06%、97.81%,RSD分别为0.72%、0.85%、0.79%、0.80%。结论:该文建立的质量方法专属性强,简便可行、重现性好,可用于湿生扁蕾的质量控制。

湿生扁蕾总[口山]酮通过调控TGF-β/Smad和自噬相关通路对NCM460细胞上皮间质转化的影响

目的探讨湿生扁蕾总[口山]酮介导TGF-β/Smad和自噬相关通路对NCM460细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用2.5μg/mL脂多糖(LPS)持续干预细胞14 d建立EMT模型,CCK-8法筛选最佳湿生扁蕾总[口山]酮给药剂量。设计空白组、模型组、吡菲尼酮组(200μg/mL)和湿生扁蕾总[口山]酮低、中、高剂量组(50、100、200μg/mL),采用Western blot法检测细胞ZO-1、α-SMA、Beclin-1、P62、Bcl-2、LC3B蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞ZO-1、α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Snail1 mRNA表达,免疫荧光观察细胞中α-SMA表达,TUNEL染色观察细胞凋亡情况,MDC染色和透射电镜分别观察细胞中自噬囊泡和自噬小体数目。结果湿生扁蕾总[口山]酮质量浓度小于200μg/mL时对细胞活率无明显影响(P>0.05),故选择50、100、200μg/mL为低、中、高剂量组。与空白组比较,模型组细胞ZO-1、Beclin-1、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白和ZO-1 mRNA表达降低(P<0.01),α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Snail 1 mRNA和α-SMA、P62蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,湿生扁蕾总[口山]酮组均能改善以上指标(P<0.05,P<0.01)。结论湿生扁蕾总[口山]酮能抑制NCM460细胞EMT发生进程,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路和增强细胞自噬有关。

西藏湿生扁蕾根际土壤微生物群落结构特征分析

【目的】探究西藏不同产地湿生扁蕾根际土壤微生物群落组成特征,揭示根际土壤核心微生物菌群与根际土壤微生物群落的相互作用,以及影响微生物群落组成的环境因素。【方法】采用Illumina MiSeq高通量测序技术和生物信息学方法对西藏林芝市巴宜区(BY)、察隅县(CY)和工布江达县(GB)湿生扁蕾根际土壤微生物群落组成,及其与土壤理化因子间的相关性进行分析。【结果】湿生扁蕾根际土壤共获得4738个细菌OTUs和3600个真菌OTUs,BY样品根际土壤细菌和真菌丰富度指数最高,CY样品根际土壤细菌和真菌多样性指数最高;不同产地湿生扁蕾根际土壤细菌和真菌群落结构组成存在差异;根际土壤核心细菌菌群有322个属,核心真菌菌群有175个属;根际土壤细菌和真菌互作网络均具有模块化结构且以协同作用为主,核心微生物菌群相对分散,变形菌门、放线菌门、子囊菌门和担子菌门是根际土壤微生物的关键类群;相关性分析表明,核心微生物菌群的改变与土壤理化因子间存在不同程度的相关性;pH、总钾、总磷、总氮、速效钾和速效氮含量与根际土壤微生物群落结构组成显著正相关,总钾、总磷和总氮是影响根际土壤微生物α多样性的关键因子。【结论】不同产地湿生扁蕾根际土壤细菌和真菌群落组成及多样性存在一定的差异,根际土壤微生物菌群的改变与土壤理化因子间存在不同程度的相关性。本研究为湿生扁蕾人工种植及益生微生物菌群的筛选提供了理论依据。

湿生扁蕾HPLC指纹图谱及6个成分含量测定研究

目的:建立藏药湿生扁蕾HPLC指纹图谱,并同时测定6个成分的含量。方法:采用Waters SunFire ODS C_(18)(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱;以甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;检测波长为254 nm;采用化学计量学软件建立18批湿生扁蕾HPLC指纹图谱,进行相似度评价、聚类分析和主成分分析;同时测定样品中6个成分的含量。结果:建立了湿生扁蕾HPLC指纹图谱,确定19个共有峰,指认出当药苷等6个成分,18批样品相似度均≥0.894,化学计量学分析可以对18批样品的相似性与差异性进行区分。含量测定显示6个成分的线性关系良好(r≥0.9997),平均加样回收率为95.35%~99.85%,RSD≤2.01%。结论:该研究建立的指纹图谱和含量测定方法操作简单、准确,结合化学计量学分析可用于控制湿生扁蕾的整体质量。

基于黄酮成分优化张家口产湿生扁蕾的采贮研究

探究张家口地区湿生扁蕾的最佳药用部位、采收期、贮存条件,为湿生扁蕾的资源开发及利用提供实验依据。采用薄层色谱法检测不同药用部位、采收期、贮存条件湿生扁蕾样品中所含木犀草素,并计算醇提物的干浸膏率;采用可见分光光度法测定各组湿生扁蕾样品中总黄酮含量。湿生扁蕾茎叶部位木犀草素、总黄酮含量和干浸膏率均显著优于根部,且差异具有统计学意义(P<0.05);不同采收期和贮存条件湿生扁蕾茎叶部位总黄酮具有显著性差异(P<0.05),以9月中下旬采收最佳,阴凉干燥处贮存最宜。本实验为张家口地区湿生扁蕾药材的开发利用提供实验依据。

高效液相色谱法同时测定扁蕾颗粒中5种有效成分含量

目的建立同时测定扁蕾颗粒中马钱苷酸、当药苷、芒果苷、木犀草素、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Waters SunFire ODS C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果马钱苷酸、当药苷、芒果苷、木犀草素、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮的进样量分别在0.0206~0.4120μg、0.2010~4.0200μg、0.0080~0.1600μg、0.0566~1.1320μg、0.0150~0.3000μg范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9998,n=6);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);平均加样回收率分别为96.24%,98.16%,96.67%,98.06%,97.84%,RSD分别为0.84%,0.89%,1.06%,0.92%,1.57%(n=6);5批样品中上述成分的含量分别为0.53~0.56 mg/g、8.30~8.44 mg/g、0.23~0.26 mg/g、1.06~1.11 mg/g、0.73~0.76 mg/g。结论该方法快捷简便、分别可靠、稳定性好,可用于扁蕾颗粒制剂的质量控制。

扁蕾颗粒质量标准提升研究

目的 提升扁蕾颗粒的现有质量标准。方法 采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的1,7-二羟基-3,8-二甲氧基(口山)酮进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法测定制剂中的当药苷、木犀草素、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基(口山)酮的含量,色谱柱为Waters SunFire C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果 1,7-二羟基-3,8-二甲氧的TLC图斑点清晰,分离度高,阴性对照无干扰。当药苷、木犀草素、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基(口山)酮质量浓度分别在0.020 5~0.409 6 mg/mL、0.005 6~0.111 6 mg/mL、0.001 5~0.030 0 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于1.0%;平均加样回收率分别为98.24%,98.11%,97.88%,RSD分别为0.88%,0.93%,1.54%(n=6)。结论 该方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于扁蕾颗粒的质量控制。

藏药湿生扁蕾及扁蕾的相关本草考证

就扁蕾和藏药湿生扁蕾两药从文献记载、植物形态、生境分布、化学成分等方面进行考释,以期今后更好地开发应用本种或本属植物资源。

藏药湿生扁蕾的化学成分研究Ⅰ

目的 :对湿生扁蕾全草进行化学成分研究。方法 :用常压硅胶柱和薄层色谱法分离 ,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构。结果 :分离得到了 6个化合物 ,鉴定为 1,7 二羟基 3,8 二甲氧基酮 (Ⅰ ) ,1 羟基 3,7,8 三甲氧基酮 (Ⅱ ) ,1,8 二羟基 3,7 二甲氧基酮 (Ⅲ ) ,1 羟基 3,7 二甲氧基酮 (Ⅳ ) ,β 谷甾醇 (Ⅴ ) ,胡萝卜苷(Ⅵ )。结论 :化合物Ⅲ～Ⅵ为首次从该植物中分离得到。

青藏高原不同生境下湿生扁蕾(Gentianopsis paludosa)个体大小依赖的繁殖分配

植物对资源的投资和分配是生态学中的重要问题,它反映了植物应对环境变化时的生活史策略。选择青藏高原东缘同一海拔下的嵩草草甸(Kobresia sp.meadow)、金露梅灌丛(Potentilla fruticosa shrub meadow)以及草甸-灌丛交错带3种生境类型,并以3种生境下的湿生扁蕾(Gentianopsis paludosa)为对象,研究了其繁殖分配特征。结果发现:(1)在种群水平上,在生境从草甸经交错带到灌丛的变化中,湿生扁蕾个体大小和繁殖分配比例逐渐增加;3个种群湿生扁蕾的总花数目没有显著差异,但草甸生境湿生扁蕾的蕾期花数目显著高于灌丛生境,而果期花数目则显著低于灌丛生境;(2)在个体水平上,湿生扁蕾的繁殖绝对投入与个体大小显著正相关,且各种群植株都存在繁殖所需的个体大小阈值,而繁殖阈值在生境从草甸经交错带到灌丛的过渡中逐渐减小;湿生扁蕾的繁殖相对投入与个体大小负相关,但相关系数随着生境从草甸经交错带到灌丛的过渡中逐渐减小;各种群花数目与湿生扁蕾植株个体大小显著正相关。研究表明,湿生扁蕾的繁殖投资存在大小依赖效应,但生境差异会对其繁殖投资和生活史策略造成显著影响,而这种影响主要是由不同生境下自然条件的不同造成的。同时,资源分配也与湿生扁蕾的遗传特性和延迟自交的繁育系统特征有关。湿生扁蕾这种不同生境下个体大小依赖的繁殖投资差异是湿生扁蕾与其生境长期适应和进化(生境选择)的结果。

高山植物扁蕾的延迟自交机制

扁蕾(Gentianopsisbarbata)具有鲜艳的花和显著的腺体,并且花开放的前5d柱头和花药始终处于不同的位置(雌雄异位),这些花综合征表明该植物应为异花传粉。为检验这一假设,我们对青藏高原植物扁蕾的海北站种群进行了3年的传粉生物学研究实验。与花综合征所表明的繁育系统相反,两年的野外观察发现昆虫的访花频率十分低,不去雄并隔离昆虫处理也能产生大量种子,说明这一种群的繁殖主要是依赖于自花传粉。尽管利用种子结实评价的柱头可授性从花开放4d后开始下降,但随着花的发育进程,雄蕊的伸长能使得花药与柱头完全接触。实验也证明,柱头可授性和花粉活力都超过5d,说明花药和柱头的接触能够发生自花授粉。扁蕾的这种自花传粉机制应属于典型的延迟自交类型。自花授粉发生在单花花期快要结束前,自交之前仍然保持异交传粉机制,这种延迟自交避免了自交与异交竞争造成的花粉或者种子折损,并为扁蕾在青藏高原极端环境下由于访花昆虫缺乏造成的异交失败提供了繁殖保障。

扁蕾化学成分的研究

目的 对扁蕾化学成分进行研究。方法 用色谱法和光谱法分离鉴定化学成分。结果 从扁蕾石油醚部分得到 3个化合物 ,鉴定为 1 羟基 3 ,7,8 三甲氧基 口山 酮 (Ⅰ ) ,1,7 二羟基 3 ,8 二甲氧基 口 山 酮 (Ⅱ )和齐墩果酸 (Ⅲ )。结论 均为首次从该植物中分得。

藏药湿生扁蕾有效成分抑菌作用初探

利用K-B纸片扩散法和生长速率法分别研究了从湿生扁蕾中得到的6个化合物对细菌和真菌的抑制作用。结果表明:6个化合物对供试菌有一定的抑制作用。其中1,7-二羟基-3,8-二甲氧基口山酮对毛霉,辣椒疫霉,瓜类枯萎病菌的抑制率分别达到58.3%,51.4%,50.7%。

藏药湿生扁蕾提取物的止泻作用及其急性毒性研究

目的研究湿生扁蕾提取物(GTP)的止泻作用及其急性毒性,为湿生扁蕾的开发利用提供理论依据。方法采用番泻叶诱导的小鼠腹泻模型,以腹泻潜伏期和湿便总数为指标评价GTP的止泻作用;用Bliss法测定小鼠灌胃GTP的半数致死量(LD50)。结果 GTP各剂量均有止泻作用;GTP的半数致死量为127.4 g/kg。结论 GTP对番泻叶所致的小鼠腹泻有明显的对抗作用,表现在腹泻潜伏期延长和在相同时间内累积腹泻次数减少,且具有剂量依赖性;小鼠灌胃GTP的LD50 95%可信限为(116.6～139.4)g/kg,其急性毒性较低。

藏药湿生扁蕾的抑菌作用研究

目的探讨湿生扁的体外抑菌作用。方法用K-B纸片扩散法和生长速率分别研究了湿生扁蕾对细菌和真菌的抑制作用。结果湿生扁蕾的提取物和各部位对供试菌都有一定的抑制作用,其中对辣椒疫霉的抑制作用最强;氯仿部位的抑菌作用则最好。结论湿生扁蕾在体外有明显的抑菌作用。

藏药湿生扁蕾抗大鼠实验性溃疡性结肠炎有效部位筛选研究

目的:通过比较湿生扁蕾乙醇提取物各极性组分抗大鼠实验性溃疡性结肠炎的效果,筛选出湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎的有效部位。方法:乙醇回流提取湿生扁蕾,提取液浓缩并经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到极性不同的5部分产物。用三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇溶液复制大鼠UC模型,以柳氮磺胺吡啶(SASP)作为阳性对照药,观察各组大鼠腹泻与粪便隐血的动物数、结肠组织形态学与组织内髓过氧化物酶(MPO)活性的变化。结果:乙醇提取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物能显著减少UC模型大鼠发生腹泻与粪便隐血的动物数(P<0.05);并且能显著改善UC模型大鼠结肠局部组织形态学损伤;能显著降低UC模型大鼠结肠组织中MPO的水平(P<0.05);与阳性对照药柳氮磺胺吡啶比较无显著性差异。结论:湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎的活性成分在氯仿及乙酸乙酯萃取物中含量较高,可对这2个组分作进一步的分离筛选研究。

藏药湿生扁蕾对三硝基苯磺酸诱导的大鼠溃疡性结肠炎模型的影响

目的观察藏药湿生扁蕾提取物(GTP)对实验性结肠炎大鼠过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平的影响。方法采用三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇溶液灌肠制备大鼠实验性结肠炎(UC)模型,以正常大鼠、UC模型大鼠作对照,从大鼠结肠组织形态学改变及结肠组织内髓MPO、SOD活性和MDA水平等方面,考察GTP对大鼠UC的影响。结果 UC模型组的SOD活性显著低于正常组(P<0.05),MPO活性、MDA水平显著高于正常组(P<0.05);GTP各剂量组大鼠结肠组织大体形态和组织学损伤明显改善(P<0.05),SOD活性显著高于UC模型组(P<0.05),MPO活性、MDA水平显著低于UC模型组(P<0.05),与治疗药柳氮磺胺吡啶(SASP)比较无显著性差异(P>0.05)。结论藏药湿生扁蕾提取物对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎有一定的治疗作用,抗氧化应激可能是其作用机制之一。