手工显微切割技术在基层实验室的应用

目的:分析手工显微切割技术在基层实验室的应用价值。方法:结合基层实验室的客观条件,应用手工显微切割技术于病理切片分离目标细胞。结果:本技术共成功分离36例目标细胞。结论:手工显微切割具有操作简便、经济实惠、准确性较强的特点,尤其适合基层实验室使用。

手工显微切割技术用于膀胱尿路上皮癌DNA提取与分析

①目的手工显微切割技术用于提取微量的目的DNA或RNA,为基因扩增和分析提供较纯化及较高质量的研究材料。②方法肿瘤组织石蜡切片,苏木素染色,在显微镜直视下,手动分离癌巢,仅收集癌细胞,用于DNA提取,扩增及分析。③结果普通石蜡切片在苏木素染色处理下,手工显微切割可获取较高纯度的癌细胞,DNA提取质量较组织粉碎法有明显提高。④结论手工组织显微切割可用于较大组织石蜡切片的DNA提取和纯化;操作简单方便,经济实惠;提取的DNA纯度高,杂质少,可以很好地用于基因扩增与分析。

手工组织显微切割后的快速DNA提取技术

目的：为寻找一种操作简便、结果稳定可靠的组织处理及切片染色技术，尝试应用组织切片手工显微切割后快速提取DNA的方法，观察提取的DNA质、量是否能满足后续分子水平研究的需要。方法：实验于2004-07／2007-07在广东医学院病理学实验室完成。取广东医学院附属医院病理科提供的子宫颈癌石蜡包埋组织切片，将切片贴于载玻片长时间完全脱蜡后，用苏木精对细胞核进行淡染，再在倒转置显微镜下进行显微切割，将切割下的组织放入装有提取缓冲液的EP管中，整个过程不需更换EP管，不经过复杂的酚-氯仿抽提，采用细胞裂解并蛋白酶K消化的方法，快速、简便提取DNA。结果：经分光光度计检测提取的DNA浓度为0．14～5．25g／L，A260/A280值在1．6～1．8；PCR检测扩增出了预期长度为231bp的目的片段。结论：手工组织显微切割后快速DNA提取法可以提供足量浓度的DNA，PCR反应模板结果稳定可靠，可满足后续分子水平研究的需要。

手工显微切割技术在分子病理学研究中的应用

目的比较手工显微切割技术和激光捕获显微切割技术对多成分组织切片进行特异性的同质细胞的分离,进而为下一步的分子生物学研究提供纯净的目标细胞。方法用PCR和放射自显影法分析PCR产物。结果手工显微切割技术和激光捕获显微切割技术分离的组织细胞的LOH无明显区别。结论手工显微切割技术具有简单快速、经济实惠、操作方便等特点,目前在我国基层实验室具有较高的使用意义。

手工组织显微切割食管癌不同病变阶段细胞提取高质量RNA

目的建立手工组织显微切割方法准确挖取食管癌不同病变阶段细胞,从中提取高质量RNA,以满足后续基因表达分析的需要。方法常规制备冰冻组织切片,用无水乙醇一次性脱水固定,显微镜下用1ml注射器针头从组织冰冻切片中分别挖取不同病变阶段的细胞,用TRIzol提取总RNA。结果手工挖取面积可准确到1/25mm2,从挖取的细胞中提取出高质量的总RNA,凝胶电泳分析见清晰的18S和28SrRNA带,可满足后续分子水平研究的要求。结论无水乙醇固定冰冻组织切片可有效保存RNA的完整性,手工组织显微切割能够准确挖取小至1/25mm2面积的细胞,方法简单、易掌握、易操作,不须特殊仪器设备,适合在一般实验室推广应用。

鼻咽癌组织的显微切割及其RNA线性扩增

从微小体积鼻咽癌活检标本中获取纯净癌细胞一直是鼻咽癌分子生物学研究中的难题.为了寻找一种能从鼻咽癌活检组织中获得高纯度、高质量RNA来完成cDNA微阵列(cDNA Microarray)实验的简便实用方法,采用RNAlater技术保存鼻咽癌活检组织,显微切割技术来获得高纯度鼻咽癌细胞,利用RNA线性扩增技术得到cDNA微阵列实验所需RNA.结果表明:利用RNAlater技术可以很好地保持组织RNA的稳定,通过优化显微切割和RNA线性扩增的条件获得了cDNA微阵列实验所需的高纯度、高质量RNA.

联合显微切割及PCR方法对结外NK/T细胞淋巴瘤中EB病毒的检测

目的:研究结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中EB病毒基因的表达。方法:筛选NK/T细胞淋巴瘤56例,应用手工显微切割进行组织纯化后,用PCR检测EBV的基因序列,并同时对相应组织用EBV抗体做免疫组织化学染色检查,对两种方法进行了比较。结果:56例NK/T细胞淋巴瘤应用手工显微切割进行组织纯化后,用PCR方法EBV阳性率为39/56(69.64%),而用免疫组化方法阳性率为7/56(12.50%),二者检出率有显著差异。结论:显微切割联合PCR技术能明显提高EB病毒检出率和准确性,是检测EBV的有效方法。