移动打靶在拳击训练中的应用价值

拳击作为一项历史悠久的格斗运动,对于运动员的速度、力量、耐力和反应能力有着较高的要求。随着拳击运动的不断发展,传统的静态打靶训练已不能满足现代拳击比赛的需求,因此,寻求一种更高效、更贴近实战的训练方法尤为重要。文章分析了移动打靶在拳击训练中的应用价值,并提出了相应的训练策略,以期为拳击训练提供有益的参考。

p53^(V149F)突变打靶载体及细胞模型的构建

[目的]构建p53基因突变模型,为研究p53基因突变引发肿瘤的发生和进展提供细胞模型资源。[方法]利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,根据p53^(V149F)突变位点的序列,在线设计合成单链向导sgRNA,构建CRISPR打靶载体;将重组载体转染细胞,流式分选阳性细胞群,提取细胞基因组,Sanger测序分析Cas9核酸酶对靶位点的切割情况,构建同源修复模板,通过T7EN1试验进一步检测编辑效率;将重组载体和同源模板通过电转染方法共同转染至成纤维细胞中,通过单克隆挑取、PCR和Sanger测序鉴定挑取含目标突变的细胞株。[结果]成功构建靶向p53基因目标区域的CRISPR/Cas9打靶载体;获得5个含目标突变的克隆点,点突变率为10%,测序结果出现套峰,表明出现基因型多样化;1个细胞克隆的测序结果无杂峰,TA克隆鉴定结果表明:一个等位基因存在p53^(V149F)位点突变,另一个等位基因存在240 bp缺失。[结论]成功构建了含p53^(V149F)的细胞系,并对基因的功能进行了初步验证,为进一步构建两基因同时修饰模型奠定了基础,并为药物筛选提供可用的细胞模型资源,为创制模拟疾病发生的遗传模式和临床表现的小型猪实验动物模型奠定了基础。

小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体的构建

目的构建小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体,为建立TDO2基因条件性敲除小鼠奠定基础。方法根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor载体,以TDO2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子3作为敲除区,在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件,建立条件性敲除TDO2第3号外显子的条件性基因打靶载体。将CRISPR/Cas9复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,获得阳性F0小鼠,再将阳性F0代小鼠与C57BL/6小鼠交配获得F1代小鼠,并经PCR和基因测序鉴定F1代小鼠基因型。结果结果证实所构建的TDO2基因条件性敲除打靶载体符合设计要求,成功繁育并鉴定出B6/JGpt-TDO2^(em1C)flox/Gpt小鼠。结论成功构建了小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体,为后续进一步构建TDO2基因条件敲除小鼠奠定了基础。

基因打靶技术在乳腺生物反应器中的应用

利用转基因动物的乳腺生产人类重组蛋白,可以获得安全而有效的药用蛋白。目前采用的转基因技术由于其固有的局限性,未能使乳腺生物反应器的研究取得长足的进步。基因打靶克服了随机整合的盲目性和危险性,是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。简述了制备乳腺生物反应器过程中靶细胞、基因打靶的策略、打靶位点及问题,并对其发展方向进行了小结及展望。

基因打靶技术及其应用前景

基因打靶技术是一项新兴的分子生学技术,综述了基因打靶技术的原理、操作以及应用与研究进展。

移动打靶在拳击训练中的应用

拳击对运动员的协调能力、反应能力有着较高的要求。在拳击的教学与训练中,移动打靶是一种基本的训练方式。移动打靶训练不仅能够提升运动员的击打技能,而且能够降低身体的损伤概率。本文在分析移动打靶在拳击训练中的重要性的基础上,提出了移动打靶在拳击训练中的应用策略,希望能够提高移动打靶的应用水平,提升移动打靶的应用效果。

基因打靶技术的研究进展

基因打靶技术是一项新兴的分子生物学技术,是利用外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组,并整合在预定位点上,从而改变细胞遗传特性的方法。它的产生是遗传工程领域的一次革命,为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究手段。目前基因打靶技术在研究基因的结构和功能、表达与调控,转基因及基因治疗等方面均取得了进展。但基因打靶技术仍存在一些问题,主要是打靶的效率太低。本文综述了基因打靶技术的原理、操作程序并对提高基因打靶效率的可能途径进行了探讨。

打靶法在分数阶微分方程边值问题中的一些应用

本文利用打靶法研究了一类分数阶非线性微分方程边值问题的可解性。其中f:[0,1]×R2→R连续,1 0Dtαy(t)表示标准的Riemann-Liouvile型导数。当f:[0,1]×R2→R在假设下,满足初始条件的解的唯一性和全局存在性时,则相应的边值问题也至少存在一个解。

激光打靶系统中物联网技术的应用研究

鉴于目前部队传统打靶使用实弹射击训练,射击成绩需要人为去查看,该方法效率低、成本高、费时等缺点,激光打靶系统应运而生,论文将物联网技术应用于激光打靶系统中并完成了相关应用研究。论文主要内容包括基于STM32的单一WiFi节点的电路设计,多节点无线组网设计,系统终端上位机设计等,其中WiFi多节点间采用TCP协议通信,把靶标信息传输至机智云平台,最终成功将物联网应用至激光打靶系统,经测试该系统在搭载物联网后,报靶效率大大提高,无线数据传输准确度优于95%,传输延迟优于1S。

基因打靶技术:开启遗传学新纪元

基因打靶技术作为最有效的定向修饰小鼠基因的技术手段在揭示基因的生理功能、研究人类疾病的遗传机制以及寻找新的药物靶标的过程中发挥着重要的作用。近年来,随着条件基因打靶技术的发展使基因失活可以限制在特定时段特定组织或细胞内。文章将主要介绍基因打靶技术的发展简史、近期进展以及在其他模式动物中的应用。

利用细菌内同源重组技术构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体

目的构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体,最终获得胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入小鼠,为胰岛β细胞功能研究提供良好的基因敲除动物模型。方法以低拷贝质粒pBR322-2s为骨架构建取获载体(retrieving vector),应用λ噬菌体Red重组酶介导的缺口修复(gap-repair)方法,通过细菌内的同源重组克隆长度约为12kb的小鼠胰岛素2(Ins2)基因组DNA,同时构建1个带有内部核糖体进入位点(IRES)序列、Cre重组酶序列和正负向筛选标记基因的微型打靶载体(mini-targeting vector),最后通过同源重组获得Ins2-Cre打靶载体。结果以Ins2基因的第3外显子为靶点,成功构建了受内源性Ins2基因启动子严格调控的表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体。结论成功构建了在胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体,为获得胰岛β细胞中基因特异性敲除小鼠模型提供了关键材料。

小鼠β_2m基因打靶载体的构建及序列分析

目的 采用分子生物学技术 ,构建小鼠 β2 m基因打靶载体 ,为下一步进行胚胎干细胞基因敲除、建立β2 m基因缺陷型干细胞奠定基础。方法 通过设计和合成引物 ,经PCR从小鼠 β2 m pSV2ΔHXgpt基因组克隆分别扩增小鼠 β2 m的 4 2kb和 0 8kb片段作为同源臂 ,将其分别插入载体pPNT的neo基因两侧 ,构建小鼠 β2 m基因替换型打靶载体pPNT β2 m。结果 经过PCR、限制性酶酶切鉴定 ,以及DNA序列分析 ,证实此两条同源臂为包含小鼠 β2 m前三个外显子在内的基因片段 ,证明载体构建成功。结论 PCR法构建基因打靶载体是新颖。

基于Cre重组酶体系的鸡卵清蛋白基因打靶载体的构建

利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管反应器的最佳技术路线。为建立基于Cre/loxp系统的鸡卵清蛋白基因(Ovalbumingene,OV)位点的双交换打靶载体系统,本研究克隆了鸡的OV基因7.8kb片段,并与克隆的内部核糖体进入位点(IRES)、人工合成的含有Cre重组酶识别位点变异体交换盒m2/loxp71EGFPloxp66,一起构建了含有Hsvtk负筛选标记的针对鸡卵清蛋白基因位点的敲入型共表达基因打靶载体pSSCm2/71EGFP66IRESOV7.8;以猪β干扰素基因(βInterferon,IFNβ)为目的基因构建了穿梭载体pMDm2/66MCSIFNMCSLoxp71,经过限制酶酶切及部分测序鉴定,所构建载体结构正确。进一步将它们共转化组成性表达Cre的细菌BM25.8。

基因打靶技术及其影响因素

基因打靶是 2 0世纪 80年代发展起来的一项新的基因操作技术 ,本文综述了近年来基因打靶和筛选的几种常用策略及影响基因打靶的一些主要因素。基因打靶在基因功能研究、家畜遗传改良。

高效率基因打靶载体的构建及受体成肌细胞的制备

通过建立高效率"双无"(无启动子、无polyA)打靶载体MSTN-GFP和MSTN-neo及新生绵羊和胎儿成肌细胞的培养和鉴定,优化了培养条件,改善了细胞状态,为提高打靶效率及体细胞克隆提供了稳定的核移植供体;同时无启动子打靶载体的构建也有利于打靶后阳性细胞克隆的分子鉴定.

牛α(1,3)-半乳糖转移酶基因片段的克隆及一种全新的无启动子打靶载体的构建

利用La-PCR的方法,从牛的基因组中成功地获得分别约为2.4kb、15.0kb的两段扩增产物。两个片段分别克隆于pCR—XL—TOPO载体。测序结果表明所克隆的两片段均为牛α(1,3)GT基因的基因组序列。其中2.4kb片段位于5～7外显子之间,包括了完整的第五及第六内含子;15.0kb片段位于3～4外显子,包括了完整的第三内含子。15.0kb、2.4kb片段分别作为打靶载体的5’、3’同源臂,使用融合基因策略构建了一种全新的无启动子打靶载体7zf—neo17.4。电击转染牛胎儿成纤维细胞以期敲除牛的α(1,3)—GT基因。

基因打靶载体选择标记盒的构建及表达

为构建山羊乳腺基因打靶载体的选择标记盒,将loxP位点分别引入正、反向引物,以含新霉素磷酸转移酶(neo)基因的质粒pTarget为模板,用高保真聚合酶链反应(PCR)扩增得loxP neo loxP选择标记盒。将PCR产物克隆到pGEM T载体后进行的序列分析结果显示,引入的loxP位点及扩增后的neo基因序列均是正确的。将此选择标记盒克隆到不含neo基因的真核表达载体ΔpTarget后转染COS 1细胞,经过G418筛选获得药物抗性细胞克隆。再将此选择标记盒克隆到山羊β 乳球蛋白基因打靶载体并转染山羊成纤维细胞,经过G418选择后也获得抗性细胞克隆。结果表明:克隆的loxP neo loxP选择标记盒可用于基因打靶载体的构建。

植物的基因打靶

对拟南芥、苔藓等几种模式植物基因打靶的研究新进展作了概述 ,并对目前基因打靶领域的一些新技术 (如含有重组酶和稀有限制性内切酶的基因打靶载体技术、异源重组基因的过表达技术、参与重组酶的基因突变技术、寡核苷酸诱导的基因打靶技术等 )作了介绍。

基于Gauss伪谱法和直接打靶法结合的月球定点着陆轨道优化

将一种求解最优控制问题的新方法—高斯伪谱法(Gauss Pseudospectral Method-GPM)和传统的直接打靶法有效结合,对月球着陆器定点软着陆轨道快速优化问题做出了研究。推导了高精度模型下着陆动力学方程。针对优化方法各自的特点和多约束条件下最优月球软着陆轨道设计的难点,提出了问题求解的串行优化策略:将控制变量和终端时间一同作为优化变量,同时离散控制变量与状态变量,取较少的Gauss节点,利用GPM求解初值,初值的求解采用从可行解到最优解的串行优化策略;在Gauss节点上离散控制变量,利用直接打靶法求解精确最优解。仿真结果表明,本文提出的轨道优化方法具有较强的鲁棒性和快速收敛性。

激光打靶系统的设计

介绍了一种简单实用的激光打靶模拟训练系统 ,该系统由半导体激光枪、传感器靶、信号处理、显示电路组成 ,并可用计算机实时显示打靶者的成绩 ,具有精度高、形象逼真、能自动判断、显示环数。