毛细管电泳-电致化学发光检测法分离测定中药马尿泡中的托烷类生物碱成分

以铕离子掺杂类普鲁士蓝（Eu-PB）化学修饰铂电极为工作电极,采用毛细管电泳-电致化学发光检测法对4种托烷类生物碱成分（如山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品和樟柳碱）进行了分离检测。考察了氧化电位值、运行缓冲液酸度、盐浓度和甲醇含量等实验条件对电泳分离效果及检测灵敏度的影响。在优化的实验条件下,以20mmol/L的磷酸盐（pH8.0）-7%（体积分数）甲醇为运行液,各组分在6min内可达到基线分离,其峰面积的相对标准偏差小于5.0%,迁移时间的相对标准偏差小于1.1%（n=12）。并将该法成功地应用于测定中药马尿泡根茎中的山莨菪碱和东莨菪碱的含量,其含量平均值分别为27.8g/kg和4.43g/kg。样品的加标回收率为97.8%~102%。

人工栽培山莨菪和野生山莨菪中4种托烷类生物碱含量的比较研究(英文)

为了评估人工栽培山莨菪的药用价值 ,采用高效液相色谱技术对人工栽培和野生山莨菪的地上部分和根中具有生物活性的 4种托烷类生物碱 :樟柳碱、山莨菪碱、东莨菪碱和阿托品的含量进行了测定 .结果表明无论是人工栽培还是野生植物 ,地上部分中 4种生物碱含量均远低于根 ,这解释了人们为什么用山莨菪的根而不是整株入药 .在栽培植物的根中 ,一年生山莨菪中各生物碱含量均小于二年生山莨菪 ,其根中 4种生物碱总量与野生根相比差异不是很明显 ;二年生山莨菪根中 ,4种生物碱总量以及樟柳碱、东莨菪碱和阿托品含量均比野生的高 .这说明人工栽培的山莨菪 ,尤其是二年生山莨菪 ,同野生山莨菪一样具有一定的药用价值 .

HPLC法测定天仙子和马尿泡中3种托烷类生物碱的含量

采用 Kromasil C18ODS色谱柱 (4.6 mm× 15 0 mm,5 μm) ,以甲醇 -水 (2 5∶ 75 ,水中含 2 0 mmol·L-1醋酸钠、 0 .0 2 %三乙胺、 0 .3%四氢呋喃 ,p H 6 .0 )为流动相 ,流速为 1.0 m L· min-1,检测波长为 2 15 nm,外标法定量。此方法将 3种生物碱同时进行了定量测定 ,且方法简便、高效、灵敏、重现性好。

托烷类生物碱的合成研究进展

托烷类生物碱是具有 8氮杂双环 [3,2 ,1]辛烷分子骨架的一类化合物。它们及其类似物在医疗上占有重要地位。就其代表物东莨菪碱、山莨菪碱和包公藤甲素以及重要中间体的合成方法进行综述。

不同炮制方法对蒙药泡囊草中托烷类生物碱含量的影响

目的:探讨不同的炮制方法对泡囊草中托烷类生物碱含量的影响。方法:以硫酸阿托品为对照品,用酸性染料溴甲酞绿染色,采用分光光度法,在414nm波长处对泡囊草不同炮制品中托烷类生物碱进行含量制定。结果:生品、奶制品及煎膏制品中硫酸阿托品含量分别为4.875mg/g、4.505mg/g、3.740mg/g,即生品>牛奶炮制品>煎膏制品。结论:泡囊草经牛奶炮制和煎膏炮制后,其托烷类生物碱的含量较生品均有所降低。

类特异性分子印迹固相萃取/高效液相色谱法分析马尿泡果实中4种托烷类生物碱

以樟柳碱（ASD）为模板分子,甲基丙烯酸（MAA）为功能单体,三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯（TRIM）为交联剂,乙腈为致孔剂,采用沉淀聚合法,合成了对4种托烷类生物碱（樟柳碱、东莨菪碱、山莨菪碱、阿托品）具有类特异性识别能力的聚合物。通过紫外光谱预测法筛选了最佳功能单体与配比。采用振荡平衡吸附实验对印迹和非印迹聚合物进行了吸附性能表征,结果表明,印迹聚合物对4种生物碱的饱和吸附量分别为7.53,10.90,24.27,11.04μg/mg,相对选择性系数分别为3.58,1.49,1.62,2.25。以该分子印迹聚合物为固相萃取柱填料,采用分子印迹固相萃取/高效液相色谱法实现了藏药马尿泡中4种托烷类生物碱的高效富集和快速分离。该方法在2-250μg/m L范围内具有较好的线性关系,相关系数（r^2）为0.999 9,检出限为0.26-0.39μg/m L,在10,50,100μg/g加标浓度下的平均回收率为70.0%-96.3%,相对标准偏差（RSD）≤5.7%。该固相萃取柱重复使用率高,分离效果良好,有效去除了样品中杂质的干扰,大大提高了马尿泡果实中4种托烷类生物碱的萃取效率。

托烷类生物碱生物合成机理及其生物工程研究进展

托烷类生物碱主要包括阿托品、莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪碱和樟柳碱,是主要抗胆碱类药物。解析药用茄科植物托烷类生物碱合成的分子调控机制以及研发高产托烷类生物碱的植物生物反应器一直是近几年的研究热点。该文对近年来国内外有关托烷类生物碱在不同茄科植物中的合成部位、分子调控和利用转基因技术研发高产托烷类生物碱的发根生物反应器的研究进展进行综述,并对可能存在的问题以及应用前景进行了展望。

PMT和H6H双基因共转化提高三分三托品烷类生物碱质量分数

三分三是我国特有的托品烷类生物碱药源植物.采用基于发根的外源基因表达技术,农杆菌介导遗传转化三分三,获得转烟草PMT和莨菪H6 H基因的发根、基因组PCR鉴定转基因发根、液体摇床培养后,HPLC检测发根中莨菪碱和东莨菪碱质量分数.结果发现:在三分三转基因发根中,能够同时检测到1 177bp的莨菪H6 H基因片段和451bp的烟草PMT基因片段,而非转基因发根没有检测到这2个基因,表明外源PMT和H6 H这2个基因整合进了三分三基因组.转基因发根系T11中东莨菪碱质量分数最高,比非转基因发根系高出近6倍,比自然根高出近25倍;转基因发根系T25中莨菪碱质量分数最高,比非转基因发根系高出近8倍,比自然根高出近75倍;转基因T25中东莨菪碱和莨菪碱总量最高,比非转基因发根系高出近7倍,比自然根高出近44倍.

藏药资源植物铃铛子托品烷类生物碱含量测定

托品烷类生物碱(tropane alkaloids,TAs)是一类主要来自于茄科植物的含氮小分子有机物,其中莨菪碱(hyoscyamine)和东莨菪碱(scopolamine)被广泛应用于临床抗胆碱药物,可用于手术前麻醉、抗晕动症、戒毒脱瘾、治疗帕金森症、改善微循环、治疗有机农药中毒等。铃铛子(Anisodus luridus)产自我国西藏、云南高海拔地区,属于茄科山莨菪属多年生宿根草本,该物种具有生物量大、生物碱含量高的特点。本研究采用HPLC测定了铃铛子各器官中托品烷类生物碱含量,发现各部位均表现为莨菪碱含量高于东莨菪碱含量,表明铃铛子属于莨菪碱型资源植物。莨菪碱最高的部位为子房(18.92563mg.g^(-1) DW),其次是种子(15.85058mg.g^(-1) DW)、主根(10.5159mg.g^(-1) DW),东莨菪碱最高的部位也是子房(3.14404 mg.g-1 DW),其次是花萼(2.09926 mg·g^(-1) DW)、花冠(1.75487mg.g^(-1) DW),茎中两种TAs含量均为最低。铃铛子中莨菪碱和东莨菪碱含量都高于我国传统药源植物颠茄中的含量,因此铃铛子适合被作为新型TAs高产药源植物进行产业化种植。

外源甜菜碱对盐胁迫下颠茄生理特性及托品烷类生物碱含量的影响

以颠茄(Atropa belladonna L.)幼苗为材料,通过人工模拟盐胁迫条件,探讨在100 mmol/L盐胁迫下喷施不同浓度(20 mmol/L和40 mmol/L)的甜菜碱(GB)溶液对颠茄幼苗生理特性及托品烷类生物碱含量的影响。结果显示,外源甜菜碱增强了颠茄叶片的光合作用,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性均有不同程度的提高;丙二醛(MDA)含量显著下降,硝态氮、可溶性蛋白、游离氨基酸含量及硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸脱氢酶(GDH)活性显著升高。颠茄次生代谢途径中的前体氨基酸(鸟氨酸和精氨酸)的含量以及托品烷类生物碱(莨菪碱和东莨菪碱)的含量也明显升高。研究结果表明100 mmol/L盐胁迫处理对颠茄的生长产生了抑制作用,而20 mmol/L甜菜碱处理能较好地缓解这种伤害。

诱导子对颠茄毛状根生长及托品烷类生物碱质量分数的影响

目的:研究不同浓度茉莉酸甲酯(MJ)、硝酸银(AgNO_3)、水杨酸(SA)、酵母提取物(YE)4种诱导子对颠茄毛状根生长及托品烷类生物碱合成的影响.方法:将0.5g新鲜颠茄毛状根接种于B5液体培养基中,黑暗培养12d后,将原有培养基换成加有不同浓度诱导子的4种新培养基,同样条件下再培养2d,收集颠茄毛状根材料,测定其鲜质量与干质量及托品烷类生物碱的含量.结果:MJ抑制了毛状根生长与托品烷类生物碱的积累,而AgNO_3虽然抑制了颠茄毛状根的生长,但却显著提高了托品烷类生物碱的积累,托品烷类生物碱的产量在100μmol/L AgNO_3处理下达到26.191mg,是对照的219.9%.在SA处理下,较小程度地抑制了毛状根的生长,对东莨菪碱的积累有促进作用.在YE处理下,随试验浓度升高,对毛状根生长及托品烷类生物碱的积累的促进作用也逐渐增强.结论:AgNO_3是提高毛状根中托品烷类生物碱的最佳诱导子,而YE是对颠茄毛状根生长的最佳诱导子.

托品烷生物碱生物合成与代谢工程研究进展

托品烷生物碱是医药史上最古老的一类药物,常用的有莨菪碱(或其外消旋体阿托品)和东莨菪碱,它们都具有显著的抗胆碱活性,在现代临床上应用相当广泛。目前,市场上托品烷生物碱的供应完全依赖植物提取,但药源植物中生物碱含量往往较低,培育高含量托品烷生物碱的药源植物成为领域内共同追求的目标,利用生物技术提高发根或植株中托品烷生物碱含量成为次生代谢领域的研究热点。近10年来,托品烷生物碱的生物合成分子生物学研究取得了重要进展,代谢工程也获得了大量研究成果,本文对这两方面的研究进展进行综述,并对存在的关键问题和未来研究方向进行分析和展望。

HPLC-MS/MS法同时测定华山参滴丸中阿托品、山莨菪碱和东莨菪碱的含量(英文)

华山参滴丸是含有托烷类生物碱的中药制剂,主要用于治疗哮喘,具有很好的临床疗效,但缺乏较有效的定量方法控制其质量.建立了一种快速、简单、准确的HPLC-MS/MS法同时测定华山参滴丸中阿托品、山莨菪碱和东莨菪碱的含量.首先采用超声的方法对滴丸进行提取来制备样品溶液,然后采用C18色谱柱对样品进行分离.流动相为20 mmol/L醋酸铵水溶液:甲醇(70:30);流速为0.3 mL/min.质谱检测器采用电喷雾正离子模式的多重反应监测方式进行测定,整个分析时间仅耗时1.5 min.阿托品和山莨菪碱在250～4000 ng/mL范围内、东莨菪碱在62.5～1 000 ng/mL范围内均呈良好的线性关系(r^2>0.999).三种成分的日内和日间精密度均小于3.0;平均回收率均大于98%.此方法快速、可靠、重现性好,适用于华山参滴丸的日常质量控制.

对阿托品检验方法的探讨

《中国药典》记载了鉴别阿托品的经典方法。但笔者在检测一含阿托品重大中毒的毒检样品中发现,使用药典方法的检验结果不准确,呈阴性反应。而采用非药典记载的薄层层析法和紫外分光光度法检测,发现样品中含大量阿托品。本文分析了药典方法产生误差的原因,并提出了对该项目检测方法的四点意见和看法。

托品烷类生物碱生物合成分子生物学与代谢工程

莨菪碱和东莨菪碱属于托品烷类生物碱,是重要的抗胆碱类药物。托品烷类生物碱生物合成分子生物学和代谢工程一直是植物次生代谢工程研究的热点。随着植物功能基因组学和代谢组学的发展,托品烷类生物碱生物合成研究取得重要进展。重点对托品烷类生物碱生物合成途径、功能基因和代谢工程研究进展进行综述,并对可能存在的问题以及应用前景进行展望。

天仙子有毒,别被好听的名字迷惑

天仙子,一个飘飘欲仙的名字,您一定好奇它是谁,长什么样。作为茄科植物一员,天仙子其实是一种致幻有大毒的植物。天仙子又名著、牙痛子、黑著、马铃草、米罐子,是中国古代医学中极为有名的致幻且有毒的中药,天仙子植物全株各个部位均含有影响神经系统的托烷类生物碱,即著碱(亦称天仙子碱)、东著碱及阿托品。早在《神农本草经》中记载:“列为下品,性味苦、辛、温;有大毒,治齿痛出虫,多食令人狂走。”李时珍在《本草纲目》中也记载:“若其子服之,令人狂狼放荡。”这也是天仙子名字的由来。

^(99m)Tc-TRODAT-1脑SPECT显像对帕金森病的早期诊断价值

目的:评价脑99Tcm-2β[N,N′-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基,3β-(4-氯苯基)托烷(99mTc-TRODAT-1)SPECT多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)显像对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)早期诊断的临床应用价值。方法:对21例早期PD患者(Hoehn-Yahr 1级12例,2级9例)及15例健康对照者分别进行99mTc-TRODAT-1SPECT脑显像,剂量为740 MBq。应用计算机感兴趣区技术及2个数学模型分别计算早期PD患者及健康对照者双侧纹状体体积(V,cm3)、质量(W,g),代表相应部位的多巴胺转运蛋白功能水平。结果:健康对照组SPECT扫描示DAT核素密度集中于双侧纹状体呈红色,左右基本对称,双侧纹状体貌似“熊猫眼”。早期PD患者双侧纹状体DAT核素分布不均匀,形状各异,其体积和质量均低于健康对照者,差异有显著性(P<0.01);早期PD患者症状对侧纹状体体积和质量均显著低于症状同侧(P<0.01);Hoehn-Yahr 2级PD患者双侧纹状体DAT体积和质量均低于Hoehn-Yahr 1级PD患者,差异有显著性(P<0.05)。结论:DAT数量减少是PD发病的重要环节之一,99mTc-TRODAT-1脑SPECT显像有助于PD的早期临床诊断。

3种常用培养基对颠茄毛状根生长与次生代谢产物积累的影响

研究了B5,MS,N6 3种培养基对颠茄毛状根的生长及托品烷类生物碱质量分数和产量的影响.结果表明:B5,MS培养基中颠茄毛状根的生物量明显高于N6培养基,两者之间差异无统计学意义,但B5培养基中东莨菪碱和莨菪碱质量分数与产量均显著高于MS培养基.因此,比较3种培养基,B5培养基作为基本培养基不仅有利于颠茄毛状根的生长,也对托品烷类生物碱的合成有促进作用,为建立适合其生长和次生代谢产物产生的离体培养体系提供了理论依据.