扣囊拟内孢霉α-淀粉酶基因的克隆和在酿酒酵母中表达

以穿梭质粒pCN60为载体,大肠杆菌C600为受体构建了扣囊拟内孢霉(Endomycopsis fibuligera)G45 Sau 3A基因文库。从基因文库中提取重组质粒DNA并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BJ1991,选出四个具有o-淀粉酶活性的转化子,琼脂糖凝胶电泳结果证实插入的DNA片段为9.0kb。对插入DNA片段亚克隆,确定。-淀粉酶基因位于PstI-Sall 3.9kb片段上,启动子位于PstI-EcoRI 的1.3kb片段上。用亚克隆PGK11.9kb片段置换。-淀粉酶启动子区,其转化子的e-淀粉酶活性有明显提高。

酿酒酵母与扣囊拟内孢霉属间原生质体融合的研究

通过原生质体融合技术，在酿酒酵母与扣囊拟，内孢霉属间原生质体融合产物中，获得兼有两亲株遗传特性的融合子Ｐ５０１和Ｐ５１９，对两融合子进了木薯粉液化物的发酵试验，结果显示乙醇含量分别达６．９％（体积比和７．７％（体积比），比亲本提高５３．３％和３７．５％，酒精得率分别提高７．４８％和１０．８９％，提示该技术可用于筛选优良菌株。

扣囊拟内孢霉原生质体形成与再生条件的研究

研究了一株产淀粉酶酵母-扣囊拟内孢霉的原生质体形式与再生条件,通过正交实验研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、稳渗剂种类等对原生质体形成与再生的影响。结果表明,对数生长期早期的细胞(18～24h),用1.5％的蜗牛酶液,0.7mol/L的KCl做渗透压稳定剂,30℃水浴酶解60min,可获得最佳的形成率与再生率。

布拉酵母与扣囊拟内孢霉混合固体发酵的酶活力测定

试验采用布拉酵母菌和扣囊拟内孢霉混合固体发酵饲料,研究发现扣囊拟内孢霉对布拉酵母发酵有促进作用。对不同固体发酵样品进行α-淀粉酶、糖化酶和蛋白酶的活力测定,并测定相应菌数。淀粉酶活力测定结果表明,混合菌种的最佳培养时间为25 h。糖化酶活力测定结果表明,混合菌种的最佳培养时间为20 h。蛋白酶活力测定结果表明,混合菌种的最佳培养时间为30 h。菌数测定结果表明混合菌种的最佳培养时间为20 h。综合酶活力和菌数的研究结果得出结论：布拉氏酵母菌和扣囊拟内孢霉混合固体发酵的最佳时间为20~25 h。

产黄青霉、扣囊复膜孢酵母替代部分大曲提高食醋原料利用率

从分离自山西老陈醋大曲中高产糖化酶和纤维素酶的菌株中筛选优良菌株,制成麸曲与大曲共发酵,采用混料回归设计确定最佳原料配比并检测食醋质量。结果表明,以菌株AS3.4309(M0)为对照菌株,筛选出产黄青霉(M4)和扣囊复膜孢酵母(M8),大曲与麸曲的最佳总添加量为主料的40%,其中大曲25.10%,M8麸曲6.81%,M4麸曲8.09%,安琪酵母0.06%,料水比1∶3(g∶m L),此时酒精度为11.2%vol。制成麸曲与大曲共发酵后酒精度显著高于菌株M0(P<0.05),与大曲单独发酵相比,麸曲M4+M8+大曲共酵提高原料利用率提高了31.81%,减少大曲用量37.25%,且食醋各项质量指标均符合国家标准。

扣囊内孢霉处理米粉加工废水生产单细胞蛋白的研究

测定了广东省东莞市一家大型米粉加工厂排放废水中几种主要营养物质的含量,并探讨了以此米粉加工废水来生产扣囊内孢霉菌体蛋白的可行性。结果表明,该废水中含有0.09%的还原糖、0.31%的淀粉糖、0.63%的粗蛋白,扣囊内孢霉能利用该废水中的营养物质来快速地生长;扣囊内孢霉处理米粉加工废水生产单细胞蛋白的优化发酵工艺为:(NH4)2SO4添加量2 g/L,发酵温度25℃,初始pH 6.5,6%(V/V)的接种量,发酵24 h,扣囊内孢霉菌体蛋白的得率为4.34 g/L。

黄芩药渣固态发酵生产单细胞蛋白

对黄芩药渣的成分进行分析,采用稀硫酸时黄芩药渣进行预处理,并测定还原糖的含量；以黄芩药渣为原料,利用扣囊拟内孢霉固态发酵生成单细胞蛋白,确立了固态发酵培养基的最佳配比及pH值．正交试验结果表明,最佳发酵条件为：发酵温度30℃,接种量15%,含水量55%,培养时间24 h．在上述的条件下发酵后,药渣中粗蛋白的质量分数由8．99%提高到24．80%．

酵母菌最适生长条件和自溶条件研究

采用正交实验设计,研究了酿酒酵母和扣囊拟内孢霉混合培养的最适条件和菌体的自溶作 用,得到了最佳的条件组合.实验结果表明,酿酒酵母和扣囊拟内孢霉混合培养的最适条件为: 1.5％豆饼,2％玉米粉,28℃,pH 5.0,0.2％酵母膏;酿酒酵母和扣囊拟内孢霉混合菌体的自溶条 件为:pH 5.0醋酸-醋酸钠缓冲液,55℃,0.5％NaCl.