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鉴别鸽新城疫病毒野毒株与疫苗株La Sota的重组酶介导的等温扩增方法的建立
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作者 杜文珍 吴颖臻 +4 位作者 王鹏 陆凡 刘大利 梁海皇 韦天超 《广西畜牧兽医》 2024年第2期47-50,共4页
为建立一种能够区分鸽新城疫病毒(NDV)野毒株与常用新城疫疫苗株La Sota的重组酶介导的等温扩增方法(RAA),本研究针对基因Ⅵ型鸽源NDV和La Sota的NP基因设计出1对特异性引物,经过优化引物浓度、反应时间、反应温度,建立了能够区分鸽NDV... 为建立一种能够区分鸽新城疫病毒(NDV)野毒株与常用新城疫疫苗株La Sota的重组酶介导的等温扩增方法(RAA),本研究针对基因Ⅵ型鸽源NDV和La Sota的NP基因设计出1对特异性引物,经过优化引物浓度、反应时间、反应温度,建立了能够区分鸽NDV野毒株与La Sota的RAA检测技术。对其特异性、敏感性和重复性进行测试,并应用建立的方法检测了45份临床样品。结果显示:该技术在15℃~39℃的恒温条件下,可于15 min内完成对目标基因的扩增;对禽支原体、大肠杆菌、沙门氏菌、传染性支气管炎病毒、禽流感病毒和衣原体等常见病原的检测结果均为阴性;重组质粒标准品检测下限为39.5 copies/反应;45份临床病死鸽样品的检测,检出28份阳性,与常规PCR方法的检测结果一致。本研究结果说明建立的RAA方法可应用于临床样品的快速检测。 展开更多
关键词 鸽新城疫病毒 重组酶介导的等温扩增方法 快速检测
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噬菌体MS2和φX174的双层琼脂平板和液体培养基扩增方法的建立 被引量:14
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作者 王秋英 赵炳梓 +4 位作者 张佳宝 王一明 张辉 陈效民 龚建东 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期297-300,共4页
噬菌体MS2和φX174曾广泛作为指示病毒,用来研究病毒在土柱和田间实验条件下的迁移行为。本文详细介绍了实验室小规模双层琼脂平板扩增和大规模高复数感染法制备纯噬菌体溶液的条件和方法步骤。宿主细菌E.coli(ATCC 15597)的最佳培养时... 噬菌体MS2和φX174曾广泛作为指示病毒,用来研究病毒在土柱和田间实验条件下的迁移行为。本文详细介绍了实验室小规模双层琼脂平板扩增和大规模高复数感染法制备纯噬菌体溶液的条件和方法步骤。宿主细菌E.coli(ATCC 15597)的最佳培养时间为90~120min,而E.coli(ATCC 13706)的最佳培养时间为120~150min,在上述时间段内,它们的生长分别进入对数期。小规模双层琼脂平板扩增方法耗时、耗力,但用高复数感染扩增方法可获取一次大量(约500ml)的高浓度纯噬菌体MS2和φX174溶液,它们的含量分别可达1011pfu/ml和108pfu/ml。 展开更多
关键词 噬菌体 MS2 φX174 扩增方法和步骤
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Potyvirus属成员基因组全序列的简并引物PCR和RACE扩增方法 被引量:30
3
作者 陈炯 陈剑平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期371-374,共4页
Based on multi-alignment of complete polyprotein amino acid sequences of genus Potyvirus,five degenerated primers were designedThey were Sprimer(5′-GGX AAY AAY AGY GGX CAZ CC-3′),pNIa(+)(5′-TNY TGG AAM CAY TGG A... Based on multi-alignment of complete polyprotein amino acid sequences of genus Potyvirus,five degenerated primers were designedThey were Sprimer(5′-GGX AAY AAY AGY GGX CAZ CC-3′),pNIa(+)(5′-TNY TGG AAM CAY TGG AT-3′),pCI2(+)(5′-GCX ACX AAX ATX ATX GAX AA-3′),pCI1(+)(5′-GTX GGX TCX GGX AAX TCX AC-3′)and pHC(+)(5′-TGY GAY AAY CAZ TTX GA-3′)(X=A,T,C or G:Y=T or C;Z=A or G;N=A or T;M=A,T or G)Using degenerated PCR and modified RACE methods,a protocol for determination of complete genome sequence of potyviruses was established and proved to be successful on five 展开更多
关键词 Potyvirus属成员 基因组分序列 PCR RACE 扩增方法 马铃薯Y病毒属 简并引物 全序列测定 扩增方法
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获得基因侧翼序列位点信息的几种扩增方法 被引量:8
4
作者 颜静宛 林琳 王锋 《福建农业学报》 CAS 2005年第B12期125-129,共5页
侧翼序列是指染色体中特定位点两侧的DNA序列。在现代分子生物学技术研究中,常常需要对已知位点的侧翼序列进行分析或克隆,以研究基因的遗传表达调控。该文对近年来发展的几种侧翼序列扩增技术进行简述。
关键词 侧翼序列 扩增方法 染色体 分子生物学
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多黏菌素耐药基因mcr-1重组酶介导扩增方法的建立及应用 被引量:5
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作者 车勇良 陈秋勇 +4 位作者 陈如敬 吴学敏 王隆柏 刘玉涛 周伦江 《动物医学进展》 北大核心 2022年第8期46-49,共4页
根据多黏菌素耐药基因mcr-1的保守序列,设计合成一对重组酶介导扩增方法(RAA)特异性引物和一条FAM标记的荧光探针,优化扩增条件,建立了检测多黏菌素耐药基因mcr-1的RAA方法,验证其特异性和敏感性,并应用于临床检测。结果显示,建立的RAA... 根据多黏菌素耐药基因mcr-1的保守序列,设计合成一对重组酶介导扩增方法(RAA)特异性引物和一条FAM标记的荧光探针,优化扩增条件,建立了检测多黏菌素耐药基因mcr-1的RAA方法,验证其特异性和敏感性,并应用于临床检测。结果显示,建立的RAA方法只需21 min就能出结果,能特异性地检测多黏菌素耐药基因mcr-1,最低能检测出10~2的mcr-1阳性质粒拷贝数,也可很好地检测出临床样品中的mcr-1基因。4株临床分离大肠埃希氏菌株样品,有2株mcr-1基因阳性,2株为mcr-1基因阴性。 展开更多
关键词 多黏菌素 耐药基因 mcr-1 重组酶介导扩增方法
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含能材料合成中的氮链扩增方法 被引量:3
6
作者 朱勇 丁可伟 +5 位作者 肖川 李陶琦 卜建华 刘卫 郭松松 葛忠学 《火炸药学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第1期21-29,共9页
综述了含能材料合成中的氮链扩增化学反应方法,总结了氮-卤键的叠氮化取代、叠氮离子的电催化氧化、伯胺重氮转移、二氮烯的二聚、N氨基化及硝化、氨基氧化偶联、氨基重氮偶联等共性反应,介绍了典型氮链扩增反应的机理。重点讨论了N_(5)... 综述了含能材料合成中的氮链扩增化学反应方法,总结了氮-卤键的叠氮化取代、叠氮离子的电催化氧化、伯胺重氮转移、二氮烯的二聚、N氨基化及硝化、氨基氧化偶联、氨基重氮偶联等共性反应,介绍了典型氮链扩增反应的机理。重点讨论了N_(5)^(+)、[N_(7)O]^(+)、N^(-)_(8)等离子型氮链,以及具有N_(3)/N_(4)/N_(5)/N_(6)/N_(7)/N_(8)/N_(10)/N_(11)链等全氮片段的有机化合物的结构演进过程,提出了N^(-)_(7)、N_(10)、N_(12)长氮链化合物的可能合成路线,最后提出了该领域后续发展的趋势和建议。附参考文献65篇。 展开更多
关键词 有机化学 氮链扩增方法 全氮材料 N5 N8 N10 N11
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人骨髓间质干细胞分离和培养扩增方法的研究 被引量:3
7
作者 张丽蓉 项鹏 +4 位作者 夏文杰 陈振光 张秀明 李艳 李树浓 《广东药学院学报》 CAS 2002年第2期135-138,共4页
目的 :探索分离、纯化及培养成人骨髓间质干细胞 (hMSC)的最佳方法。方法 :采用Ficoll Paque淋巴细胞分离液和全血接种两种方法分离成人MSC ,筛选体外培养hMSC适合的培养基和适宜的血清含量 ,流式细胞仪检测hMSC表面抗原表达。结果 :经F... 目的 :探索分离、纯化及培养成人骨髓间质干细胞 (hMSC)的最佳方法。方法 :采用Ficoll Paque淋巴细胞分离液和全血接种两种方法分离成人MSC ,筛选体外培养hMSC适合的培养基和适宜的血清含量 ,流式细胞仪检测hMSC表面抗原表达。结果 :经Ficoll Paque淋巴细胞分离液分离后 ,接种于 φ =10 0mL/L胎牛血清的L DMEM培养液 ,细胞贴壁良好 ,增殖速度快 ,hMSC在体外扩增 5代可获得 1× 10 8细胞。全血接种分离hMSC ,细胞贴壁慢、少 ,生长情况欠佳。除L DMEM ,其他类型的培养基均不适合hMSC的培养扩增。流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD44、CD10 5、CD166表达阳性 ,CD14、CD3 3、CD3 4、CD3 8、CD45、CD11a为阴性。结论 :用Ficoll Paque淋巴细胞分离液分离骨髓单核细胞 ,接种于 φ =10 0mL/LFCS的L DMEM培养液 。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 分离 流式细胞仪 培养 扩增方法
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猪细环病毒1型环介导等温扩增方法的建立 被引量:1
8
作者 张黎 李凯 +2 位作者 田光玲 李德峰 何后军 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期517-521,共5页
猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSu V)是一种无囊膜,单链的DNA病毒,存在猪细环病毒1型和猪细环病毒2型2个亚型。为建立一种新型快速的TTSu V1检测方法。针对TTSu V1保守的非编码区域(untranslated regions,UTR)设计2对LAMP引物,并... 猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSu V)是一种无囊膜,单链的DNA病毒,存在猪细环病毒1型和猪细环病毒2型2个亚型。为建立一种新型快速的TTSu V1检测方法。针对TTSu V1保守的非编码区域(untranslated regions,UTR)设计2对LAMP引物,并对反应体系和反应条件进行了优化调整,建立了TTSu V1 LAMP检测方法。结果表明该方法最佳反应条件为62℃1 h,病毒最低检出限可达9.2 copies/μL,特异性良好。LAMP反应是一种集特异性强,灵敏度高,反应速度快于一体的的基因检测方法,有望成为快速检测TTSu V1的手段之一。 展开更多
关键词 细环病毒1型 环介导等温扩增方法(LAMP) 灵敏度 特异性
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非扩增方法快速检测血流中病原菌进展 被引量:3
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作者 何永贵 王沛 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期301-302,共2页
关键词 扩增方法 快速检测 血流感染
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小概率扩增方法在公共卫生中的应用 被引量:1
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作者 武继磊 郑晓瑛 《中国卫生统计》 CSCD 北大核心 2007年第4期419-423,共5页
关键词 公共卫生 扩增方法 队列人群 概率 层次结构 人群健康水平 社会经济状况 流行病学
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优化的套式核酸体外扩增方法用于甲型流感病毒快速诊断的研究 被引量:3
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作者 李先茜 康向东 +2 位作者 董婕 杜培革 王笑英 《国外医学(流行病学.传染病学分册)》 2005年第2期73-76,共4页
目的临床上对流感的有效控制与治疗在于实验室快速与准确的诊断,这对于指导用药和避免滥用抗生素具有重要意义。RT_PCR在流感病毒检测中特异性和灵敏度较强,nestedmultiplexRT_PCR法可以在此基础上提高灵敏度。实验的目的是应用分子生... 目的临床上对流感的有效控制与治疗在于实验室快速与准确的诊断,这对于指导用药和避免滥用抗生素具有重要意义。RT_PCR在流感病毒检测中特异性和灵敏度较强,nestedmultiplexRT_PCR法可以在此基础上提高灵敏度。实验的目的是应用分子生物学方法对流感病毒进行快速诊断。方法我们结合流感病毒M基因、NS基因、HA基因的结构和进化特性设计多元引物达到流感病毒的型和亚型准确与快速的鉴定。结果甲型流感病毒以M基因保守区域设计引物,PCR后电泳带为413bp;甲型流感病毒以HA基因分亚型,H1N1亚型PCR后电泳带为348bp,H3N2亚型PCR后电泳带为291bp,H5N1亚型PCR后电泳带为326bp。结论应用优化的套式核酸体外扩增方法进行流感病毒的型与亚型的诊断是比较快速的,且所需要的病毒量少(0.01~0.1TCID50),灵敏度较高。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 快速诊断 扩增方法 体外 核酸 套式 优化 RT-PCR法 分子生物学方法 流感病毒M基因 nested H3N2亚型 滥用抗生素 基因保守区 有效控制 重要意义 指导用药 病毒检测 高灵敏度 NS基因 HA基因 设计引物 H1N1 H5N1
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心肌干细胞的体外扩增方法研究
12
作者 严全能 席玉胜 +2 位作者 李志梁 傅强 徐春生 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1069-1070,共2页
目的探索Sca-1+心肌干细胞的分离及体外扩增方法。方法采用免疫磁珠方法分离小鼠Sca-1+心肌干细胞,以DMEM培养基为基础培养基加上SCF、LIF、B27、EGF进行培养,通过流式细胞仪检测Sca-1+表达。通过公式计算其扩增效率,并对扩增细胞的分... 目的探索Sca-1+心肌干细胞的分离及体外扩增方法。方法采用免疫磁珠方法分离小鼠Sca-1+心肌干细胞,以DMEM培养基为基础培养基加上SCF、LIF、B27、EGF进行培养,通过流式细胞仪检测Sca-1+表达。通过公式计算其扩增效率,并对扩增细胞的分化功能进行评估。结果与结论Sca-1+心肌干细胞在扩增后数量可以最多增加1倍,阳性率维持在90%左右,扩增效率为180%。 展开更多
关键词 SCA-1 心肌干细胞 体外 扩增方法
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饱合氯化钠提取基因组DNA和PCR扩增方法
13
作者 李敏 《中国优生与遗传杂志》 2002年第S1期128-128,共1页
20世纪中叶由于电子显微镜的问世超微病理学得到了迅猛发展,最令人兴奋不已的是近30年随着细胞生物学、免疫学、遗传学和分子生物学的进步,推动了分子病理学的形成和不断充实。分子病理学的出现使人们得以在蛋白质和核酸等分子水平上研... 20世纪中叶由于电子显微镜的问世超微病理学得到了迅猛发展,最令人兴奋不已的是近30年随着细胞生物学、免疫学、遗传学和分子生物学的进步,推动了分子病理学的形成和不断充实。分子病理学的出现使人们得以在蛋白质和核酸等分子水平上研究疾病的原因。 展开更多
关键词 扩增方法 PCR DNA 分子病理学 超微病理学 细胞生物学 免疫学 发病机制 抗凝全血 上清
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NASBA——一种新的核酸扩增方法 被引量:2
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作者 王太重 刘剑雄 +1 位作者 王学东 李艳 《生命的化学》 CAS CSCD 1992年第5期38-39,共2页
1991年Cangene公司首次介绍了一种新的核酸扩增技术NASBA(Nucleic acid seguence-base amplification)。与PCR不同,NASBA是由一对引物指导的、连续均一的、体外特异核苷酸序列等温扩增的酶促反应过程。反应在42℃进行。
关键词 核酸 扩增方法 NASBA
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分析沙门菌属环介导等温扩增方法在食品卫生检验中的应用价值
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作者 朱根忠 《心血管外科杂志(电子版)》 2018年第4期755-756,共2页
目的在食品卫生检验工作中运用沙门菌属环介导等温扩增方法的具体效果进行分析。方法选取2013年1月-2018年11月500例食品样本,均借助沙门菌属环介导等温扩增方法以及常规分离培养法检测,对检测结果进行分析。结果统计可知,在检测阳性率... 目的在食品卫生检验工作中运用沙门菌属环介导等温扩增方法的具体效果进行分析。方法选取2013年1月-2018年11月500例食品样本,均借助沙门菌属环介导等温扩增方法以及常规分离培养法检测,对检测结果进行分析。结果统计可知,在检测阳性率上,沙门菌属环介导等温扩增方法明显居高(P<0.05)。且检测时间具备较高时效性。结论在食品卫生检验中运用沙门菌属环介导等温扩增方法可有效提升该环节检测工作效率。 展开更多
关键词 沙门菌属环介导等温扩增方法 食品卫生检验 效果
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解旋酶恒温基因扩增方法快速检测酸乳中醋化醋杆菌 被引量:3
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作者 朱华东 刘东 +3 位作者 贾昭斌 刘昊 刘帅 周巍 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第14期3720-3724,共5页
目的建立解旋酶恒温基因扩增方法(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测酸乳中醋化醋杆菌的分析方法。方法以醋化醋杆菌的16S-23S rRNA ITS序列为目的基因,设计一对特异性引物,优化反应条件UvrD helicase、T4 ... 目的建立解旋酶恒温基因扩增方法(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测酸乳中醋化醋杆菌的分析方法。方法以醋化醋杆菌的16S-23S rRNA ITS序列为目的基因,设计一对特异性引物,优化反应条件UvrD helicase、T4 gp32的浓度,通过解旋酶恒温基因扩增方法直接检测酸乳中醋化醋杆菌,扩增产物通过电泳进行检测。结果 HDA法检测酸乳中醋化醋杆菌的特异性强,实验涉及的其他菌株均未发生扩增,只有醋化醋杆菌得到与设计序列长度一致的197 bp基因片段,方法检出限为3.6×10~1 CFU/g,实验条件优化后T4 gp32、UvrD helicase的终含量分别为4.0、0.15μg。结论该方法灵敏度较高,时间较短,为酸乳中醋化醋杆菌的检测提供了新的思路,同时也为其他食品污染菌的快速检测提供了借鉴意义。 展开更多
关键词 解旋酶恒温基因扩增方法 酸乳 醋化醋杆菌 检测
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新的扩增方法向Cetus的PCR技术挑战
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作者 李思经 《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第6期28-29,共2页
有一种扩增DNA杂种探针的新方法。该方法比Cetus公司发布的聚合酶链反应(PCR)方法更快、更简便、且灵敏度一样。这种新技术是根据酶Q-β-复制酶而制备的。它能在半小时内产生高达十亿倍的探针扩增量,而且,大体上能控制检测出单个样本中... 有一种扩增DNA杂种探针的新方法。该方法比Cetus公司发布的聚合酶链反应(PCR)方法更快、更简便、且灵敏度一样。这种新技术是根据酶Q-β-复制酶而制备的。它能在半小时内产生高达十亿倍的探针扩增量,而且,大体上能控制检测出单个样本中该靶的单分子。国立卫生研究院的Fred Kramer,Paul Lizardi及其同事研究的这个系统有两种主要成分。其一是将核苷酸聚合成RNA的Q-β-复制酶;另一成分是一种天然RNA质粒MDV-1, 展开更多
关键词 扩增方法 Cetus PCR技术 聚合酶链反应 复制酶 DNA Kramer 技术挑战 RNA 单分子
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荷兰科研人员研究采用环介导等温扩增方法快速检测生牛乳中的乳房琏球菌
18
《乳业科学与技术》 2016年第3期I0002-I0002,共1页
最近荷兰研究人员建立一种环介导等温扩增法检测生牛乳中的乳房链球菌,并评价了该方法的性能。评价了3个基因(soda、pauA、cpn60)作为环介导等温扩增靶基因的适用性。
关键词 乳房链球菌 快速检测 生牛乳 扩增方法 等温 介导 科研人员 荷兰
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开发环介导等温扩增方法快速检测猪博卡类病毒
19
《中国猪业》 2012年第2期72-72,共1页
最近,瑞典研究人员在患病猪(猪断奶后多系统衰竭综合征)中发现猪博卡类病毒(Pbo—likeV)。在这个研究中,开发了环介导的等温扩增分析,该方法具有检测博卡类病毒的特异性和敏感性。扩增博卡类病毒VP1/2六个区域的四个特异引物用... 最近,瑞典研究人员在患病猪(猪断奶后多系统衰竭综合征)中发现猪博卡类病毒(Pbo—likeV)。在这个研究中,开发了环介导的等温扩增分析,该方法具有检测博卡类病毒的特异性和敏感性。扩增博卡类病毒VP1/2六个区域的四个特异引物用在线软件设计出来。 展开更多
关键词 猪断奶后多系统衰竭综合征 快速检测 类病毒 扩增方法 等温 介导 开发 研究人员
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山羊支原体山羊肺炎亚种重组酶聚合酶扩增技术的建立 被引量:1
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作者 豆玲 周峰 +2 位作者 张莉 王志宇 康文彪 《动物医学进展》 北大核心 2023年第9期38-43,共6页
为检测山羊传染性胸膜肺炎,选择Mccp-arcA假基因作为靶基因,用Primer 3 plus设计筛选生物素标记的特异引物和荧光素标记的探针,将双标记扩增产物结合到核酸检测试纸条,通过优化反应温度和时间,建立了一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的... 为检测山羊传染性胸膜肺炎,选择Mccp-arcA假基因作为靶基因,用Primer 3 plus设计筛选生物素标记的特异引物和荧光素标记的探针,将双标记扩增产物结合到核酸检测试纸条,通过优化反应温度和时间,建立了一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的重组酶聚合酶扩增技术,对其灵敏度、重复性、准确性和特异性进行了试验,并初步用于临床样品的检测。结果显示,山羊传染性胸膜肺炎核酸阳性样品能够在核酸检测试纸条上显示阳性条带,阴性样品无条带。试验具有良好的重复性和敏感性(达到10 copies/μL)。用建立的重组酶聚合酶扩增技术与普通PCR方法同时检测疑似山羊传染性胸膜肺炎8份样品,结果均为3份阳性和5份阴性,符合率100%。该检测方法适用于山羊传染性胸膜肺炎的快速诊断,为Mccp的快速检测提供了新的技术。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增方法 试纸条 山羊支原体山羊肺炎亚种 山羊传染性胸膜肺炎
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