中国对虾一种C型杆状病毒随机扩增多态性DNA分析

于1994和1995两年的7月从青岛崂山上马镇养虾场中染病的中国对虾中分离纯化出一种C型杆状病毒。为建立中国对虾病毒的鉴别和检测技术，利用随机扩增多态性DNA技术对电泳纯化的病毒DNA进行分析和研究。将病虾匀浆、经差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化获得完整病毒粒子；从病毒中提取DNA后再进行电泳纯化，收集长度完整、均一的病毒DNA；在其他参数保持不变的情况下，对Operon生产的10碱基随机引物K试剂盒进行扩增试验。结果显示：1．病毒DNA有两种存在形式；2．K试剂盒中有2个引物能将病毒DNA扩增出长度不同的产物，其中编号为OPK—01的随机引物可产生多态性DNA片段；3．1995年中国对虾杆状病毒的RAPD分析结果与1994年相同，证实1994和1995两年度引起中国对虾疾病的病原是同一种杆状病毒。由此可以认为：随机扩增多态性DNA技术能将中国对虾C型杆状病毒扩增出多态性DNA片段而达到病毒鉴别和诊断的目的。

中药材厚朴的DNA扩增产物指纹分析研究

采用DNA扩增产物指纹分析(DNA amplification fingerprinting,DAF)技术鉴别中药材厚朴、凹叶厚朴及其常见的伪品、混淆品,获得了清晰可靠的DNA指纹图谱。根据聚丙烯酰胺凝胶上显示的DNA带型差异可简便地区分出厚朴、凹叶厚朴和其它伪品、混淆品。证明DNF技术可以准确、快速地鉴别出中药材厚朴及其伪、混品,在正确引种方面具有较高的价值。

朱鹮人工饲养群体扩增DNA指纹分析

利用 2 0个 10碱基的随机引物对陕西朱保护站人工饲养的 10只朱 (N ipponia nippon)进行了DNA扩增。结果表明 ,其中 16个引物对所测个体产生了一致的扩增 DNA带纹 ,4个引物产生的 DNA带纹具有多态性。据此计算了扩增 DNA指纹条带的平均带纹相似率为 0 .85 ,平均杂合度为 0 .5 4;在此基础上 ,分析了

蒙古羊、兰州大尾羊和哈萨克羊随机扩增多态DNA分析

从 2 4个随机引物中筛选出 5个引物 ,对蒙古羊、兰州大尾羊和哈萨克羊 3个绵羊品种共计 89个个体进行了随机扩增多态 DNA分析 ,根据扩增片段计算了蒙古羊、兰州大尾羊和哈萨克羊扩增 DNA指纹条带的平均带纹数分别为 5 .32 ,5 .2 8和 5 .78;平均带纹相似率分别为 0 .5 9,0 .6 0和 0 .6 2 ;平均杂合度分别为 0 .75 ,0 .78和 0 .77。用 Nei氏片段共享度公式计算了 3个群体的遗传距离 ,构建了其关系图 ,聚类分析结果表明 ,蒙古羊与兰州大尾羊的遗传距离最小 (0 .0 34) ,彼此亲缘关系较近。相对而言 ,兰州大尾羊与哈萨克羊的遗传距离最大(0 .10 4 ) ,彼此亲缘关系较远。

快速DNA提取环介导等温扩增技术检测结核分枝杆菌的成本分析

结核病的早期诊断，对于很好地控制结核病的传播具有十分重要的意义。固体培养具有很高的诊断价值，但耗时较长，至少需要6～8周的时间。近年来涌现出很多新的技术和方法用于结核分枝杆菌的快速诊断及鉴定。然而除了检测效能，检测成本也是制约各种技术或方法能否推广的决定性因素之一。结核分枝杆菌快速DNA提取环介导等温扩增检测技术（procedure for ultra rapid extraction of loop-mediated isothermal amplification, PURE-LAMP；Eiken Chemical，日本）是一种基于分子生物学原理的快速检测试剂盒，整个试剂盒采用封闭的反应体系，在反应体系内加入2条内引物和2条外引物，

中国不同地区烟草寄生疫霉 (Phytophthora parasitica var.nicotianae)菌株的随即多态性DNA扩增分析(英文)

来自中国云南、辽宁、山东 3省的烟草寄生疫霉 (Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)菌株的致病性已被划分为 3种致病类型组 ,即强致病性组、中致病性组和弱致病性组。上述省是中国的烟草主产区 ,选自云南省的 15个烟草寄生疫霉菌株、山东省的 13个烟草寄生疫霉菌株和辽宁省的 2 0个烟草寄生疫霉菌株 ,选择 3个烟草栽培品种在温室内进行接种试验测定不同菌株的致病性分化。提取受试菌株的DNA ,利用PCR技术对受试菌株的模板DNA进行随机多态性扩增分析 ,对扩增DNA片段谱带借助于UPGMA分析法构建遗传树 ,结果表明 ,受试菌株被划分为4个遗传聚类组 ,每个遗传聚类组内包括不同的烟草寄生疫霉致病性菌株 ,而且来自于不同烟区相同的致病性菌株和每种致病性的不同菌株皆不属于同一个遗传聚类组内。结果表明RAPD -PCR的遗传标记分析结果与不同致病性组的划分未有明显的区别。因此 ,随机多态性DNA图谱的相同与不同不能当作区分来自不同烟区的烟草寄生疫霉的致病性分化的分子检测的工具。

PCR扩增体系的体积减少对DNA分析的影响

目的探讨PCR扩增体系的体积减少对DNA分析的影响。方法4份样品采用ProfilerPlus试剂盒,在同样条件下,对50μl、25μl、12.5μl、6.25μl四种体积的体系进行扩增,扩增产物分别经ABIPRISMTM310型基因分析仪、ABIPRISMTM377型测序仪、ABIPRISMTM3100型基因分析仪电泳,并经GeneScan3.1基因扫描软件和Genotyper2.5分析软件分析得到实验结果。结果小体积的扩增体系容易出现等位基因的丢失、额外等位基因的产生等现象。结论在检材情况较差时,应该慎用小体积的扩增体系。

基于核糖体DNA大亚基片断序列探讨中国东海海域赤潮原甲藻的分子分类

采用PCR扩增技术对分类上有争议的中国东海赤潮原因种(被称为东海原甲藻,本文简称:东海株系)的基因组DNA进行了核糖体DNA大亚基片断(LSU rDNA)的扩增和测序,并与一同扩增的来自美国CCMP的被称为具齿原甲藻(本文简称:CCMP株系)的同源序列进行分析比较.结果表明,两者710 bp的LSU rDNA同源序列中仅存在7个碱基的差异,遗传相似度高达99.01%,遗传差异为0.99%.进一步与Genebank其他3种原甲藻即P.mexicanum、P.micans和P.minimum的同源序列进行比较,发现其他3种原甲藻两两间的种间遗传相似度在91.1%～95.5%之间,而P.micans和P.minimum种内不同株系的遗传相似度为99.4%～99.9%,均为99%以上.综合这些数据说明东海株系与CCMP株系之间的0.99%的遗传差异应视为种内差异,原甲藻的东海株系与CCMP株系当属异名同种.因此本试验结果从分子水平支持了被称为东海原甲藻的原甲藻与被称为具齿原甲藻(P.dentatum)的原甲藻同为一种的观点.

螺旋通道微流控PCR芯片连续自动扩增DNA片段的研究

研制了由内向外流动的螺旋通道微流控 PCR玻璃芯片 ,减少了 PCR反应液在微通道中流动时的分散和阻力 ;讨论了扩增循环数和进样速度对长片段基因扩增的影响 ,在 2 6min内成功扩增了质量浓度仅为1 0 ng/m L的 60 1 2 bpλ-DNA;通过将小孔径石英毛细管作为顺序注射 (SI)系统的连接管路 ,使其死体积降到 0 .3 0 μL.实现了微升级样品的自动换样、连续 PCR扩增和微通道洗涤等功能 .样品间无交叉污染 .每小时可扩增 5 0 0 bpλ-DNA试样 7个 .扩增产物片段大小和荧光强度的相对标准偏差分别为 0 .4%和 6.7% .

山丘疫区杜氏利什曼原虫核糖体基因内转录间隔区的克隆及序列分析

目的 构建我国山丘疫区杜氏利什曼原虫分离株前鞭体核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区 (ITS)片段克隆 ,并进行测序及同源性分析。 方法 提取杜氏利什曼原虫前鞭毛体DNA进行PCR扩增 ,将扩增出rDNAITS片段克隆入pMD18 Tvector上 ,双脱氧链末端终止法测序。 结果 扩增出约 10 0 0bp的rDNAITS片段。测序结果表明山丘疫区的2株利什曼原虫L .d .SC10和L .d .6分别为 10 2 7bp和 10 2 8bp。序列分析结果表明 ,L .d .SC10和L .d .6有一定差异。 结论 获得了我国山丘疫区杜氏利什曼原虫分离株L .d .SC10和L .d .6的前鞭体rDNAITS序列。

天麻总DNA提取及聚合酶链反应扩增鉴定

目的:改良常用的植物DNA提取的CTAB,SDS法,以有效去除天麻多糖类杂质。方法:用CTAB法提取天麻鲜品不同部位(块茎、花序轴和胚芽)DNA;用生理盐水浸泡天麻干品之后,在应用CTAB,SDS法提取天麻干品的DNA;通过已知序列的天麻抗真菌蛋白基因片段的聚合酶链反应(PCR)扩增和PCR产物测序鉴定天麻DNA及其质量。结果:提取了44份天麻样本DNA,用CTAB法提取天麻鲜品不同部位的DNA,成功地用于PCR扩增,并通过DNA测序进一步鉴定;应用改良的CTAB,SDS法提取天麻干品DNA可用于PCR扩增,但DNA测序未成功。结论:用CTAB法提取的天麻鲜品各个部位DNA均可用于基因分析,而用天麻胚芽提取DNA的效果最理想;改良CTAB法能有效提取天麻干品DNA,提取的DNA可用于基因扩增。

橄榄基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化

以橄榄叶片为材料,进行橄榄基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化。试验表明,采用改良的SDS法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析。在25μL反应体积中,RAPD反应的优化体系为:18.5μLddH2O,0.5μLdNTP,2.5μlBuffer,1μL引物,0.5μLDNA模板,2μLTaqDNA聚合酶。

恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因体外扩增、克隆及序列分析

目的 构建恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因原核表达质粒pET2 8α -Pf12 ,测定Pf12基因序列 ,并为FCC1/HN株Pf12的体外表达奠定基础。方法 采用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增出Pf12基因 ,扩增产物经纯化后 ,用BamHI +XhoI双酶切 ,定向克隆入pET2 8α质粒 ,转化大肠杆菌DH5α,再用BamHI +XhoI酶切及PCR扩增对重组子进行鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定 ,并应用PCGENE软件进行同源性比较及预测抗原表位。结果 筛选出编码FCC1/HN株Pf12基因的原核表达质粒 pET2 8α -Pf12 ,FCC1/HN株Pf12基因序列与FMG株高度同源 ,Pf12基因序列中可能存在抗原表位。 结论 pET2 8α-Pf12重组质粒的构建 ,为恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因的体外表达奠定基础。

甲醛溶液保存的中华哲水蚤基因组DNA提取和PCR扩增

提取了保存于5%甲醛溶液中的单只中华哲水蚤基因组DNA.经凝胶电泳后虽无清晰条带,但PCR扩增后可得线粒体DNA细胞色素氧化酶I亚基基因(mtCOI)片段.测序分析,该片段长度为710bp,与GenBank中的序列(索引号AF332769)比对后确定为中华哲水蚤mtCOI序列的一部分.利用本实验方法所提取的基因组DNA可适用于系统发生、种群遗传结构等领域的分子水平研究,为保存在甲醛溶液中的小型海洋浮游动物的基因信息利用提供实用技术.

酶免疫法量化分析乙型肝炎病毒核酸扩增产物

有关聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术应用研究的重点，是利用其能够短时间内在体外扩增出数百万个特异性靶ＤＮＡ序列拷贝的特点，对感染者体内含量极低的病原体核酸模板（如乙型肝炎病毒ＨＢＶ、丙型肝炎病毒ＨＣＶ等）进行...

利用模拟酶催化显色和等温核酸扩增反应检测特定序列DNA

基于血红素（Hemin）与G-四联体（G4）所形成模拟酶的催化作用,结合等温指数扩增反应（IEX-PAR）,建立了特定序列DNA的显色检测方法.目标DNA引发IEXPAR,通过设计模板序列,IEXPAR产生大量富含鸟嘌呤的单链DNA,在K＋存在时,该单链DNA可形成G4结构,G4可以与Hemin结合形成具有过氧化物酶活性的模拟酶（Hemin-G4）,Hemin-G4催化H2 O2氧化2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）,使体系颜色发生变化,反应产物最大吸收波长为421 nm.对显色反应体系中的实验参数进行了优化,包括Hemin浓度、ABTS浓度、H2 O2浓度、IEXPAR时间和显色反应时间.在最佳条件下,所建立的体系可以简便、快速检测0.1 ～ 10 nmol/L的目标DNA分子,且本方法能够很好地区分单个碱基的差别,具有良好的特异性.

铜绿假单胞菌随机扩增DNA多态性基因分型研究

利用微量液体稀释法进行药敏检测和RAPD技术进行基因分型,调查了铜绿假单胞菌在临床各科中的流行情况,以期建立稳定的临床检测系统,在控制院内感染的流行病研究中发挥更大的作用.结果表明耐药谱分6型,Ⅰ型占44.5%,Ⅱ型占18.5%,Ⅲ型占7.4%,Ⅳ型占7.4%,Ⅴ型占11.1%,Ⅵ型(不定型)占11.1%;RAPD分9型,A型占51.9%,B型占7.4%,C型占7.4%,D型占7.4%,E型占7.4%,F型占3.7%,G型占3.7%,H型占7.4%,I型占3.7%.说明基因型A型、耐药谱Ⅰ型的铜绿假单胞菌是此次ICU医院感染暴发流行的菌株,其他型别为非流行相关菌株.比较结果还说明RAPD基因分型的灵敏性、特异性及可靠性优于耐药谱分型,在医院感染流行病学调查中具有较大的应用价值.

罗非鱼的SRY基因PCR扩增分析

SRY与性别有关,本文通过对罗非鱼SRY基因分析来探索罗非鱼的性别决定机制。引物对A是根据人的SRY基因来设计的,它特异扩增正常男性SRY基因含保守区在内约600bpDNA片断。用引物对A扩增三种罗非鱼的SRY基因,结果表明:在奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼、以及奥尼杂交鱼这些鱼的雌雄中都只出现了大小一致的1条带,经检测为SRY的同源基因,无性别特异性。

神经营养素-3基因的扩增及序列分析

目的 :从人脑基因组DNA获取神经营养素 3(neurotrophic 3 ,NT 3)基因 ,并对该项目的基因进行测序。方法 :本实验直接从人脑组织中提取人脑基因组DNA ,根据人的神经营养素 3基因的cDNA序列 ,设计一对寡核苷酸引物 ,采用聚合酶链反应 (PCR) ,获得人NT 3基因 ,DNA序列分析NT 3基因。结果 :本实验采用PCR方法获得的基因片段长度为 377bp ,该基因序列为编码神经营养素 3的序列。结论 :采用PCR获取NT 3基因序列是正确的 ,为进一步基因克隆和表达奠定基础。