人血基因组PCR扩增模板的制备及其保存

建立一种简单的人血基因组PCR反应扩增模板制备及其保存方法 ,用于α -globin基因HS4 0位点扩增。

大肠杆菌asd基因PCR引物设计及其长模板PCR扩增

目的获得大肠杆菌全长ａｓｄ基因。方法采用计算机引物设计软件，长模板ＰＣＲ扩增法及限制性内切酶酶切分析。结果设计一对Ｅ．ｃｏｌｉａｓｄ基因ＰＣＲ引物；经长模板ＰＣＲ扩增获得１５１０ｂｐＰＣＲ扩增片段；经限制性内切酶酶切分析，证明该片段与电脑查询的Ｅ．ｃｏｌｉａｓｄ基因酶切谱相同。结论以本文设计的引物用长模板ＰＣＲ扩增法得到的片段初步确认为Ｅ．ｃｏｌｉａｓｄ基因。

通用模板信号扩增技术

CR是最常用的分子生物学诊断技术 ,但目前常用的PCR都存在种种不足 ,制约了其在临床的应用。我们在Taq man荧光PCR的基础上开发了通用模板信号扩增技术 (UT PCR)比较好的解决了传统PCR核酸模板质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因 /多位点同时检测两大难题。UT PCR具有灵敏度高、特异性强、假阴性低 ,并能实现高通量检测 ,在临床诊断和科学研究中有广泛的应用空间。

通用模板信号扩增技术(UT-PCR)

PCR是最常用的分子生物学诊断技术,但常用的PCR都存在种种不足,制约了其在临床的应用。通用模板信号扩增技术(UT-PCR)解决了传统PCR核酸模板质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因/多位点同时检测两大难题。UT-PCR具有灵敏度高、特异性强、假阴性低,并能实现高通量检测,在临床诊断和科学研究中有广泛的应用空间。

微量模板DNA扩增技术

综述了任意引物PCR和巢式PCR两种方法应用于微量模板DNA扩增的原理和应用优势。

表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK^-突变株的构建

提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PRVKa plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL25、全部UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失270个核苷酸。将L片段和R片段克隆于pBluescriptM13-载体上,获得pSKLR;再将绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1上含GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLRG。提取pSKLRG质粒,经单酶切线性化后用脂质体与PRVBartha-K61株共转染143TK-细胞,在细胞培养液中有5 溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下筛选出表达绿色荧光蛋白的重组PRVBartha-K61毒株:PRVrBGFP。

3种检测乙型肝炎病毒YMDD变异方法比较及结果分析

目的对检测乙型肝炎病毒（HBV）YMDD变异的3种方法进行比较并分析结果。方法对101例用拉米夫定治疗的HBV感染者，测定其治疗前HBV DNA水平，定期随访，分别以通用模板信号扩增（UT-PCR）、限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）和DNA测序法检测病毒YMDD变异。结果UT—PCR和PCR-RFLP的检测结果与DNA测序结果的符合率均为98．11％。按治疗前HBV DNA水平分为5×10^2～5×10^4拷贝／mL，5×10^4～5×10^6拷贝／mL，5×10^6～5×10^8拷贝／mL，〉5×10^8拷贝／mL4个组，YMDD变异率分别为10％，12．90％，32．43％和53．85％。YMDD突变后，HBV DNA水平显著降低，其中WDD突变株的HBV DNA水平高于YIDD突变株（P〈0．01）。结论UT-PCR法适合临床检测HBV YMDD变异。乙型肝炎患者用拉米夫定治疗时，病毒DNA水平越高，发生YMDD变异的几率越大。突变株的复制能力低于野生株，YVDD突变株复制能力强于YIDD突变株。

乙型肝炎病毒YMDD变异不同检测方法比较与评价

目的比较检测乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的3种不同方法,评价其在监测拉米夫定抗HBV治疗中发生耐药突变的价值。方法对80例接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者,测定其治疗前后血清HBVDNA含量、ALT水平变化,分别用聚合酶链反应微板核酸杂交-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)、通用模板信号扩增(UT-PCR)技术、以及基因测序3种方法进行HBVYMDD变异检测,并分析结果。结果80例患者用基因测序法检测出34例发生YMDD变异,变异发生率为41.25%;用PCR-ELISA法检测出21例变异阳性,与基因测序检测出的阳性率差异有显著性(χ2=4.68,P<0.05),两者结果的符合率为61.76%;用UT-PCR法检测出33例变异阳性,与基因测序检测出的阳性率无统计学差异(χ2=0.03,P>0.05),两者结果的符合率为97.06%。结论基因测序和UT-PCR方法检测HBVYMDD变异非常可靠,是监测拉米夫定耐药株的非常有效的方法,UT-PCR方法更适合临床应用,而PCR-ELISA方法需提高其敏感性。

乳头瘤病毒的PCR检测及临床意义进展

人乳头瘤病毒(HPV)是女性子宫颈癌的一个危险因子,研究表明,反复被HPV感染容易引起宫颈癌。由于HPV至今为止还无法在体外培养,检测手段主要以分子生物学方法为主。本文对各种HPV的PCR检测技术作简要分析,并描述其临床意义。