国产化Y-STR试剂盒与YFiler^(TM) Platinum PCR扩增试剂盒的法医DNA检验性能比较研究

该文评估4种国产化Y-STR试剂盒与Yfiler^(TM) Platinum PCR扩增试剂盒的法医DNA检验性能,并进行比较分析。结果显示,4种国产化Y-STR试剂盒均可基本满足日常案件检测需要,在灵敏度和拮抗抑制剂的适用性的方面,SureID■ Y40 PCR扩增试剂盒和炎黄Y数据分型盒表现较优,在降解样本的适用性方面,Yfiler^(TM) Platinum PCR扩增试剂盒和国产化炎黄Y数据分型盒表现最优。

华夏^(TM)白金PCR扩增试剂盒的法医学应用评估

目的调查华夏^(TM)白金PCR扩增试剂盒所包含的23个常染色体STR基因座在中国汉族人群中的遗传多态性,评估其在法医遗传学中的应用价值。方法应用华夏^(TM)白金PCR扩增试剂盒对500名汉族无关健康个体进行分型检测,统计分析所含STR基因座的频率分布及群体遗传学参数,与目前国内外常用的7种商品化试剂盒在STR基因座个数、内标、荧光标记、Ladder中等位基因总数以及系统效能上进行比较。结果 23个常染色体STR基因座均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),个体识别率为0.791 5~0.986 2,多态信息含量为0.559 0~0.914 0。系统累积个体识别率高达1-4.1×10-28,三联体累积非父排除率为1-4.1×10^(-10),二联体累积非父排除率为1-8.4×10^(-7)。通过与7种试剂盒比较,华夏^(TM)白金PCR扩增试剂盒含有的等位基因分型标准品(Ladder)中的等位基因数最多。结论 23个常染色体STR基因座在汉族人群中有良好的遗传多态性,可用于法医遗传学亲权鉴定及个体识别。通过与其他常见的7种商业化STR检测试剂盒比较,华夏^(TM)白金PCR扩增试剂盒可进一步提供更为丰富的遗传信息。

3种常用PCR扩增试剂盒检验血样DNA的结果比较

目的探讨常用的ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒检验血样DNA的差异。方法510名无关中国汉族个体血样,分别用ProfilerPlusTM与Powerplex(16试剂盒进行DNA检验,然后对有不同检验结果的同一样本,再用ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16等三种试剂盒进行检验,并比较其结果。结果在510名个体血样的DNA检测结果中,发现同一样本有不同结果的有7例,其差异率为1.3725%;ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16各有1例在D13S317或FGA基因座上出现等位基因缺失现象,缺失率为0.1961%;ProfilerPlusTM有5例在D8S1179基因座上出现扩增严重不平衡现象,相应的IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒的检验结果为正常杂合子。结论ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒检验血样DNA均会出现扩增不平衡和/或基因丢失现象,其发生几率IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒较ProfilerPlusTM少。

不同PCR扩增试剂盒检验血样DNA的结果对比分析

目的分析检验血样DNA时选用不同的PCR扩增试剂盒的结果对比。方法在检验490例血样DNA时选用不同的试剂盒(Powerplex@16、Profiler Plus),并对检验数据进行标记,分别为A类、B类,对结果进行分析对比。结果相同样本存在检验差异的百分比为1.224%(6/490),A类与B类均存在等位基因缺失,异常基因位置分别为FGA和D13,缺失百分比均为0.408%;B类中存在扩增不平衡,异常基因位置为D8,不平衡百分比为0.612%,在此相同的基因位置A类表示为正常杂合子。结论在检验血样DNA时选用不同的试剂盒会出现不同位置的异常基因,表现为基因缺失或扩增不平衡,相较之下,Profiler Plus出现异常的百分比更高。

不同PCR扩增试剂盒检验血样DNA的检验结果对比研究

目的:讨论研究Profiler PlusTM、IdentifilerTM以及Powerplex16扩增试剂盒用于检验血样DNA检验结果的差异,并研究其扩张不平衡和基因丢失现象的发生几率。方法:选取150例完全无血缘关系的个体作为研究对象并采集其血样,分别使用两种扩增试剂盒进行检验。对所得不同结果的同一对象再使用3种扩增试剂盒进行检验。将检验所得结果进行比较。结果:3种试剂盒检测的等位基因缺失率比较差异无统计学意义(P>0.05)。Profiler PlusTM检测扩张不平衡率显著高于其余两种试剂盒(P<0.05)。结论:使用PCR扩增试剂盒对血样DNA进行检测时,会出现不同位置的异常基因,可表现为基因缺失及扩增不平衡。但Profiler PlusTM检验扩增不平衡发生率显著高于其余两种试剂盒。在实际生活对血样DNA进行检测时,除需准备主要检测扩增试剂盒外,还需准备其他不同类备用试剂盒用于互相验证及对比,尽量降低基因等位缺失及扩张不平衡发生率。

华夏^TM白金PCR扩增试剂盒的法医学验证及STR遗传多态性调查

目的测试华夏^TM白金PCR扩增试剂盒的技术性能和指标,并对山东地区汉族群体遗传多态性进行调查。方法从种属特异性、灵敏度、适应性、稳定性、均衡性及混合样本与抑制剂等方面对试剂盒进行验证,并对山东地区的汉族人群383名无关个体进行DNA扩增分型检验。结果华夏TM白金PCR扩增试剂盒具有种属特异性,灵敏度高,适应性、均衡性好,对混合样本及含抑制剂样品具有一定的检测分析能力。23个常染色体STR基因座基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡,杂合度(heterozygosity,H)在0.627~0.930,个体识别能力(discrimination power,DP)在0.783~0.986,非父排除率(power of exclusion,PE)在0.324~0.856,多态信息含量(polymorphism information content,PIC)在0.551~0.916,累积个体识别能力(cumulative probability of discrimination,CDP)为0.999999999999999999999999998319,累积非父排除率(cumulative probability of exclusion,CPE)为0.999999999596233。结论华夏^TM白金PCR扩增试剂盒具有较高的多态信息含量,对群体遗传学研究及法医学应用具有重要价值。

GlobalFiler~PCR扩增试剂盒验证及其STR遗传多态性

目的：测试GlobalFiler PCR扩增试剂盒技术性能指标，评估其法医学应用价值，并对其遗传多态性进行调查。方法从灵敏度、混合样本、种属特异性、适应性、耐受性、一致性、均衡性、稳定性8个方面对该试剂盒进行测试，自动工作站提取北京地区汉族人群373名无关个体血样DNA进行扩增检测。结果GlobalFiler PCR扩增试剂盒灵敏度较高，对混合、酶切降解和含抑制剂样品具有一定的检测分析能力，适应性和均衡性较好。21个STR基因座基因型频率分布均符合Hardy－Weinberg 平衡（P＞0．05），PIC 值在0．536～0．940，H值在0．558～0．933，DP值在0．783～0．992，PE值在0．243～0．874。结论 GlobalFiler PCR 扩增试剂盒可用于法庭科学实际检案与建库，21个STR基因座在北京汉族人群中具有较高的遗传多态性，对法医学应用和群体遗传学研究具有重要意义。

19种扩增试剂盒的确证试验

目的测试11种国产试剂盒(包含DNATyperTM15、Goldeneye16A、Goldeneye16BT、Goldeneye16C、Goldeneye20A、Goldeneye BASIC、AGCU17+1、AGCU Expressmarker16、AGCU Expressmarker22、AGCU Expressmarker20、STRtyper-21G)和8种进口试剂盒(包含Identifiler、ID-Direct、ID-Plus、Sinofiler、Power Plex16、Power PTheselex16HS、Power Plex18D、Power Plex21)的技术性能指标,评估其法医学应用能力,并对各种试剂盒进行分析比较。方法制定测试方案,从方法学、准确性、均衡性、灵敏度、批次间试剂的稳定性、耐受性、适应性与一致性、种属特异性、混合样本、不同反应体系的适应性等10个方面进行测试。结果阳性DNA样本分型正确,内标和等位基因分型标准物符合要求;等位基因间、同一荧光标记基因座间及不同标记物间的均衡性较好;试剂盒使用说明书中推荐的最小DNA模板量的阳性DNA样本均能检出全部STR基因座分型;不同批次间和反复冻融后试剂盒测试可以获得正确分型;对降解检材和混有抑制剂的样本等具有一定的耐受性;能对案件中多种检材进行分型且分型结果一致;各种试剂盒均具有种属特异性和混合DNA样本检测的能力;各种试剂盒在扩增体系为25μL、10μL时均可以得到完整的DNA分型。结论所检测试剂盒在上述性能指标等方面已经达到国际同类产品的技术水平,可用于法庭科学的实际检案与建库。

几种常用PCR扩增试剂盒检验血样DNA的结果比较

目的探讨Profiler PlusTM、IdentifilerTM与Powerplex 16HS3种试剂盒对检验血样DNA的结果,探讨3种方法的扩增不平衡和/或基因丢失现象发生机率。方法选取600名无血缘关系的中国汉族个体为研究对象,采其血样,先用其中2种试剂盒对600份血样进行DNA检验,选出出现不同检验结果的标本,再分别用3种试剂盒对以上具有不同结果的同一样本进行检验,比较检验结果,观察3种试剂盒扩增不平衡和/或基因丢失现象的发生机率。结果 600份血液样本的检验差异率为1.333%;用3种试剂盒分别对以上8份样本进行DNA检验,等位基因缺失发生率均为0.1667%;Profiler PlusTM、IdentifilerTM与Powerplex 16HS3种试剂盒的扩增不平衡的发生率分别为1.167%、0.1667%和0.1667%。结论 3种试剂盒在检验血样DNA时均会出现等位基因缺失和扩增不平衡现象,等位基因缺失的发生率之间无统计学差异,但Profiler PlusTM试剂盒扩增不平衡的发生率较另外2种较高,具有统计学差异。在实际工作中,在使用一种主要试剂盒的同时,还应注意备用其他试剂盒作为相互验证之用,减少因等位基因缺失和扩增不平衡带来的误差。

Identifiler与Identifiler Plus扩增试剂盒检验结果的比较

该文通过对Identifiler与Identifiler Plus扩增试剂盒对于含有PCR抑制物、DNA降解检材样本扩增结果的比较,结果表明:Identifiler Plus扩增试剂盒相比于Identifiler具有更好的抗PCR抑制物作用,对于低模板降解DNA样本具有更高的灵敏度。

不同RT-PCR扩增试剂盒检测甲肝病毒效果评价

讨论评价ABI公司、天根公司和Roche公司扩增试剂盒用于检测食品中甲肝病毒结果的差异,为甲肝病毒扩增检测提供便捷、准确的技术参考。在食品样品中添加盔甲病毒作为病毒富集的过程质控,甲肝减毒疫苗作为阳性对照。根据一步法RT-PCR检测人工污染样品的Ct值对三种扩增试剂盒的扩增效率、特异性和灵敏度进行评价和数据分析。ABI公司扩增试剂盒扩增效率最高(EFF%:91.584),灵敏度最高(0.314CCID50/μL),三种扩增试剂盒均具有良好的特异性。采用盔甲病毒作为过程控制病毒进行食品中甲肝病毒的检测,为甲肝病毒的质量控制提供分析依据。ABI公司扩增试剂盒在总体性能上优于其他两个厂家,更适用于各级实验室甲肝病毒的日常检测工作,为一线检测工作提供最佳的扩增方案及质量控制措施。

DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒在案件中的应用研究

本文探讨DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒在案件中应用的可行性。应用DNATyper mtDNASNP60^(TM)试剂盒对100个汉族无关个体和20组全同胞进行mtDNA SNP检验;取25 pg/μL马、牛、羊、猪、鸡、鸭、猫、狗、兔、鼠和大肠杆菌的DNA样品进行种属特异性测试;取5、10、20、40μmol/L血红素进行抗抑制性测试;取两个批次的DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒经反复冻融10次后进行稳定性测试;分别应用VeriFiler^(TM)Plus PCR扩增试剂盒和DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒对100份陈旧、腐败、降解检材进行检验。结果表明,100个汉族无关个体均获得清晰的mtDNA SNP分型结果,其检验结果与通过mtDNA测序获得的结果完全一致;100个汉族无关个体含有100种不同的单倍型;20组全同胞中每组个体之间mtDNA SNP分型结果相同;DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒对马、牛、羊、猪、鸡、鸭、猫、狗、兔、鼠和大肠杆菌的DNA样品进行检测,均未出现特异性分型;当血红素浓度≤40μmol/L时,所有mtDNA SNP位点均获得正确分型;两个批次的DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒经反复冻融10次后,所有mtDNA SNP位点均可正确分型;对于100份陈旧、腐败、降解检材,STR检出率为55%,mtDNA SNP的检出率为86%,mtDNA SNP的检出率显著高于STR。当模板DNA浓度大于5 pg/μL时,DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒能得到完整的分型谱图。综上,DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒可应用于陈旧、腐败、降解检材的检验,具有很好的实战应用价值。

DNA Typer^(TM)15 plus直扩试剂盒在DNA数据库建设中的应用

目的测试DNA TyperTM15 plus直扩试剂盒的技术性能指标,评价其在DNA数据库建设中的应用价值。方法采用DNA TyperTM15 plus试剂盒,并使用IdentifilerTM和DNA TyperTM15试剂盒进行比较,设定不同体系和引物量、不同退火温度和循环次数以进行方法验证;设定不同模板量标准品、不同比例混合样本,取猪、狗、兔等动物的血液样品,血痕、骨骼、唾液斑等常见检材样本以及不同建库样本,以验证试剂盒灵敏度、特异性、稳定性以及混合样本、常见检材及建库样本的检测能力。结果直扩试剂盒分型结果准确,重复性好,灵敏度可达0.125ng,不同批次间试剂检测结果稳定,对不同检材有很好的适应性。10μL扩增体系时FTA卡和加强型血液采集卡取样直径应为0.5mm,而血滤纸、血液采集卡样本和经典型血液采集卡取样直径应为1.0mm。结论 DNA TyperTM15 plus直扩试剂盒的性能可以满足DNA数据库建设及检案的需要,可在相关实验中选择使用。

DNATyper Y21直扩试剂盒技术指标测试及应用价值评价

目的测试DNATyper Y21直扩试剂盒的技术性能指标,评估其在法医学中的应用价值。方法收集270份无关男性血液采集卡、80份常见检材和40份日常检案样本。对DNATyper Y21直扩试剂盒方法学(扩增体系、引物量、退火温度和循环次数),技术指标(灵敏度、稳定性、种属特异性,对混合样本、常见检材及建库样本的检测能力)进行测试。结果该试剂盒分型准确、图谱清晰,各等位基因峰高均>400相对荧光单位,最佳条件为10μL体系,1×引物量,59℃退火温度,28次循环。试剂盒准确性、一致性、均衡性、种属特异性均良好,最小检出量为0.125ng,女性DNA存在下(300∶1)仍然具有高灵敏性,且在不同批次试剂间结果稳定,对骨骼、血痕、唾液斑等不同常见检材有较好的适应性。结论 DNATyper Y21直扩试剂盒可应用于法庭科学实际检案与建库。

新鲜血痕样本直接扩增试验条件比较

目的探讨新鲜血痕在不同直接扩增试剂盒的试验条件。方法存放2d内的新鲜血痕FTA卡540份和存放1～3m的陈旧性血痕FTA卡270份，各分别随机均分为3组，每份血痕打3片1．0mm纸片，分别用ONATyper^TM15Plus试剂盒、Goldeye^TM20A试剂盒和华夏。”试剂盒在标准条件（说明书条件）、优化条件1（标准条件＋1μLDMSO）和优化条件2（标准条件＋室温浸泡1h）扩增检验，比较在3种条件下各组STR检验成功率。结果陈旧血痕样本用3种直扩试剂盒，在3种条件下，检验成功率均〉97．00％，且均高于新鲜血痕。新鲜血痕在标准条件和优化条件1下，成功率为27．22％～31．67％，在优化条件2下，检验成功率相似（〉97．00％），与标准条件和优化条件1比较，有统计学差异（P〈0．01）。结论新鲜血痕在加入直接扩增试剂后于室温浸泡1h，可有效提高STR检验成功率。

不同亲子鉴定试剂盒对D7S820基因座稀有等位基因检测结果比较

目的:观察分析用不同亲子鉴定试剂盒对D7S820基因座稀有等位基因检测结果的差异。方法:280名不同个体的血样DNA提取和基因型检测,按中华人民共和国公共安全行业标准GA/T382-2002和GA/T383-2002进行;分别用Identifiler试剂盒(美国AB公司)、PowerPlex誖18Dsystem试剂盒(美国普洛麦格公司)、GoldeneyeTM20A试剂盒(北京基点认知技术有限公司),经PCR复合扩增STR基因座,用AB公司DNA序列分析仪电泳分离扩增产物和激光扫描分析。结果:检测到280名不同个体的常用常染色体STR基因座的等位基因。其中六份样本在D7S820基因座上,Identifiler试剂盒检测的基因型与PowerPlex誖18D-system和GoldeneyeTM20A试剂盒检测的基因型结果有差异。结论:不同厂家生产的试剂盒检测常用常染色体D7S820基因座的稀有等位基因存在有一定误差。

海南地区汉族人群15个STR基因座的遗传多态性

短串联重复序列（short tandem repeat,STR）,又称微卫星DNA或简单重复序列,其长度多态性来源于2~6 bp重复单位拷贝数的个体差异,是目前在法医物证鉴定中应用最广泛的长度多态性遗传标记[1]。

TH01基因座等位基因丢失1例

1案例资料 2010年，本市发生1起入室盗窃案，现场提取血痕2份、烟蒂1枚。采用Chelex法提取检材DNA，使用Identifiler试剂盒10μL体系在AB9700型扩增仪上进行扩增；扩增产物经AB3130型遗传分析仪检测，GeneMappedDV3．2软件进行分析。结果血痕、烟蒂为同一个体所留，其中TH01基因座为纯合子（7）。之后在“全国公安机关DNA数据库应用系统”比中违法犯罪人员张某（除采用PowerPlex16HS试剂盒检验外，其它检验方法同前，12个STR基因座分型相同，容差半对），但TH01基因座分型显示为杂合子（7／10）。