扩散序谱(DOSY)实验测定缓冲体系中蛋白质表观分子量

液体核磁共振扩散序谱(DOSY)可以通过测定溶质分子的自扩散系数(D_t)来研究该分子在溶液中的表观分子量(M).Dt与测试体系和分子本身性质相关,蛋白质体系较为复杂,从而增加了蛋白质自扩散系数(D_(t-protein))测定的难度.本文以3-(三甲基硅基)丙磺酸钠(DSS)为内标,以蛋白质分子与DSS自扩散系数的比值(D_r)来表征蛋白质分子在溶液中的表观分子量(M_(protein)),该方法降低了缓冲体系对M_(protein)的影响,使得M_(protein)主要由分子本身的性质决定.在此基础上,测定了不同分子量蛋白质分子相对于DSS的D_r,拟合得到了D_r与M_(protein)的相关关系:lgM_(protein)=-2.6488 lgD_r-0.7863,相关系数(R^2)为0.997.最后测定了通过大肠杆菌表达纯化得到的SARS冠状病毒主蛋白酶C端结构域(M^(pro)-C)分子相对于DSS的D_r,并计算出与文献结果一致的M_(protein),进一步验证了拟合公式的准确性和实用性.

扩散序谱(DOSY)实验中扩散系数维数字分辨率的影响

核磁共振二维扩散序谱(DOSY)实验测定溶液中分子自扩散系数时,扩散系数维的数据点及其数字分辨率直接影响了测定值的精度.在较系统地确定了DOSY实验本身偏差范围的基础上,本文研究了扩散系数维不同的数字分辨率对测定值的影响,包括其引入偏差的来源以及形成偏差的大小.由于不同的溶液条件下分子扩散系数的改变可直接用于表征分子结构或状态的变化,本文提出的相对数字分辨率与扩散系数相对变化值的直接比较,可直观地表明数字分辨率对扩散系数测定值的影响.

核磁共振扩散序谱的研究及应用进展

核磁共振(NMR)是确定分子结构最常用的分析方法之一,扩散序谱(DOSY)拓展了核磁共振波谱分析复杂混合物的能力。DOSY可以通过测量混合物的自扩散系数,"虚拟分离"多组分系统中的各化学实体。而自扩散系数反映了分子的有效大小和形状,因此DOSY也能提供分子尺寸、分子量、分子间相互作用及聚集状态的具体信息。该文综述了DOSY实验的基本原理、脉冲序列发展及相关研究领域的应用进展。首先简述了脉冲场梯度、脉冲序列的发展及应用特点,然后详细介绍了DOSY在鉴别混合物组分、测量分子尺寸、分子量分布、表征分子间作用力等方面的研究进展。通过实例展示了DOSY在化学、药学、食品、生物等领域的广泛应用。

三维混合层中湍流拟序结构对颗粒扩散的影响

对时间发展模式的三维气固两相混合层湍流拟序结构及其对不同尺寸颗粒扩散的影响进行直接数值模拟 .对于气相场 ,应用拟谱方法 (Pseudospectralmethod)直接求解Navier Stokes方程组 ;对于颗粒场 ,应用Lagrangian方法跟踪半场颗粒 .针对不同Stokes数的颗粒 ,分别模拟颗粒场在展向和流向的分布变化 ,进而分析流场三维大涡结构对不同颗粒扩散的影响 ,并引入一系列参数 。

基质辅助NMR中色谱技术的研究进展

被誉为"NMR中色谱技术"的二维扩散排序NMR谱(DOSY)技术是检测混合物溶液中不同分子组分的一种有效手段.但是当面对自扩散系数差别较小的不同分子时,DOSY技术便无法对上述混合物进行基线分离.在NMR魔角旋转转子或NMR样品管中添加一些色谱填料或高分子等基质(或称为虚拟"色谱固定相")是一种行之有效的手段.这些虚拟"色谱固定相"与混合物组分发生相互作用并改变其自扩散系数,从而对混合物实现基线分离.该文综述了近年来基质辅助NMR中色谱技术的研究进展.

复方乙酰水杨酸片中有效成分的DOSY技术分析

复方乙酰水杨酸片是临床常用的解热镇痛消炎药物,目前其有效成分的分析方法存在操作繁琐而分析速度慢等不足.该文利用二甲基硅油（PDMS）辅助的扩散排序（DOSY）技术以及扩散排序-同核相关（DOSY-COSY）联用技术,成功地对复方乙酰水杨酸片中三种有效成分的分子结构进行了快速定性分析,并且利用核磁共振氢谱（~1H NMR）技术进行了相对定量分析.该方法具有方便、快捷等特点,可作为借鉴和参考用于药物的质量评价.

蒽加氢产物的结构指认和定量核磁共振分析

本文利用多种液体核磁共振(NMR)技术,综合分析了在三个不同反应条件下蒽催化加氢反应获得的产物混合物.利用二维扩散排序谱(DOSY)和一维选择性激发谱(selTOCSY)确定了产物中含有的二氢蒽、四氢蒽、对称八氢蒽和非对称八氢蒽;利用^(1)H NMR、^(13)C NMR、DEPT135、^(1)H-^(1)H COSY、^(1)H-^(13)C HSQC实验对二氢蒽、四氢蒽和对称八氢蒽的^(1)H和^(13)CNMR信号进行了详细归属;利用定量核磁共振氢谱(QNMR)计算得到了蒽的转化率和产物的选择性.本研究可用于指导优化催化反应条件,提高产物对称八氢蒽的选择性,同时为稠环类芳烃催化加氢产物的分析提供系统的NMR技术方案.

多重耐药产PER-1型超广谱β内酰胺酶阴沟肠杆菌的研究

目的研究多重耐药阴沟肠杆菌017对β内酰胺类抗菌药物耐药的机制。方法使用双纸片扩散法和改良三相试验对阴沟肠杆菌017进行β内酰胺酶的表型检测,并用聚合酶链反应(PCR)扩增β内酰胺酶基因,对PCR产物进行测序确定基因型别。结果阴沟肠杆菌017经双纸片扩散法证实产超广谱β内酰胺酶(ESBLs),经三相试验证实该菌除了产ESBLs外,还同时产AmpC酶。PCR产物经测序长度为579bp,与GENEBANK的PAPER1A基因序列100%符合,确定为PER1基因。结论阴沟肠杆菌017耐β内酰胺类抗菌药物的主要原因是PER1型ESBLs和AmpC酶所致。

同时产DHA-1型头孢菌素酶和SHV-12型超广谱β内酰胺酶的肺炎克雷伯菌

目的研究头孢菌素酶(AmpC)和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)在临床分离肺炎克雷伯菌中的流行、表型及其基因特性。方法先后用标准纸片扩散法、三维试验、等电聚焦、酶抑制试验以及微量稀释法等进行表型检测。然后用接合试验、多重聚合酶链反应(PCR)以及基因测序等方法进行分子生物学研究。结果受试的86株细菌中有4株三维试验阳性,等电聚焦以及酶抑制试验表明这些菌株都产一种等电点(PI)为7·8并具有AmpC性质的β内酰胺酶,基因测序表明和DHA-1型AmpC酶一致;它们同时伴随产生一种PI为8·2的ESBLs,基因测序表明其来源为SHV-12。微量稀释法检测表明上述菌株不但对多种三代头孢菌素耐药,而且出现了对头孢吡肟耐药,但对碳青霉烯类抗生素仍敏感。结论本研究发现同时产DHA-1型高产AmpC酶和SHV-12型ESBLs的肺炎克雷伯菌及其耐药表型。此类菌株的出现,将为临床抗感染治疗带来新的困难。