扶芳藤益心方对缺氧/复氧后人心内膜微血管内皮细胞的增殖作用

目的:研究扶芳藤益心方对缺氧/复氧后人心内膜微血管内皮细胞(HUMCE)增殖的影响。方法:取体外培养的第4代HUMCE分为造模组:扶芳藤益心方组(FY)、益心方组(Y)、卡托普利高、中、低浓度组(10-2μmol/L、10-3μmol/L、10-4μmol/L)、对照组(H/R)和非造模组(N)。造模组行缺氧/复氧(H/R)处理,非造模组不做缺氧/复氧处理,两组均添加相应的含药血清干预培养24h后,通过MTT法测定各组OD值,流式细胞仪检测细胞Caspase-3阳性细胞数,酶联免疫法(ELISA)检测各组血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果:与造模组比较,非造模组OD值大(P<0.05),VEGFR-2、VEGF含量与Caspase-3阳性细胞数均高于造模组(P<0.05)。与对照组比较,扶芳藤益心方组OD值高(P<0.05);Caspase-3阳性细胞数升高9.87%(P<0.05);VEGFR-2、VEGF浓度升高(P<0.05)。与扶芳藤益心方组比较,益心方组、卡托普利中、低剂量组OD值低,卡托普利高剂量组OD值高(P<0.05);卡托普利低剂量组VEGFR-2、VEGF浓度低(P<0.05),卡托普利高、中剂量组均高于扶芳藤益心方组(P<0.05);益心方组、卡托普利中、低剂量组Caspase-3阳性细胞数分别较扶芳藤益心方组降低6.77%、2.49%、5.7%,卡托普利高剂量组升高4.39%(P<0.05)。结论:扶芳藤益心方可以提高内皮细胞在缺氧/复氧后的增殖活性,降低内皮细胞的凋亡率,优于益心方组、卡托普利低、中剂量组,且提高缺氧/复氧损伤后内皮细胞VEGFR-2、VEGF浓度,优于卡托普利低浓度组和益心方组,改善内皮功能。

扶芳藤益心方对缺血再灌注损伤后心内膜微血管内皮细胞的保护机制

目的 :研究扶芳藤益心方对人心内膜微血管内皮细胞(HUMCE)缺血再灌注损伤(IR)后的保护机制。方法 :体外培养HUMCE至第3代,将HUMCE分为造模组:扶芳藤益心方组(FY)、益心方组(Y)、卡托普利高(CAP1)、中(CAP2)、低(CAP3)浓度组、模型对照组和非造模组(N)。造模组进行缺氧/复氧(H/R)处理,非造模组不做缺氧/复氧处理,两组均添加相应的含药血清干预培养24 h后,采用硝酸还原酶法测定NO、NOS的含量,蛋白印迹法测定内皮素(ET-1)、内皮素转化酶(ECE)蛋白表达率,荧光定量测定ET-m RNA、i NOS-m RNA基因表达水平。结果:与非造模组对照,造模对照组细胞NO、NOS含量及i NOS-m RNA基因表达降低,ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达明显增加(P<0.05)。与模型对照组比较:扶芳藤益心方组、益心方组NO、NOS含量和i NOS-m RNA基因表达升高,ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达明显降低(P<0.05)。与扶芳藤益心方组比较:益心方组NO、NOS含量及i NOS-m RNA基因表达均明显降低(P<0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达均明显增加(P<0.05);CAP1组NO、NOS含量及i NOS-m RNA基因表达均升高(P<0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达均降低(P<0.05);CAP2组、CAP3组的NO含量及i NOS-m RNA基因表达均降低(P<0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达均升高(P<0.05)。与益心方组比较:CAP1组、CAP2组、CAP3组的NO、NOS含量均升高(P<0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达均降低(P<0.05),CAP3组的i NOS-m RNA基因表达降低(P<0.05);CAP1组、CAP2组的i NOS-m RNA基因表达均升高(P<0.05)。结论 :扶芳藤益心方通过下调人心内膜微血管内皮细胞缺血再灌注后的ET-1、ECE蛋白表达及ET-m RNA基因表达,导致内皮细胞缺血再灌注后ET-1分泌降低,上调i NOS-m RNA基因表达,提高内皮细胞NO、NOS的分泌,从而维持ET/NO平衡关系防止内皮细胞在缺血再灌注后的损伤。

扶芳藤益心方、益心方及扶芳藤对小鼠急性毒性影响试验

目的:观察扶芳藤益心方、益心方及扶芳藤灌胃的急性毒性反应。方法:将80只小鼠分为扶芳藤益心方组、益心方组、扶芳藤组、正常对照组,每组20只,雌雄各半。扶芳藤益心方组给予2.78g/mL扶芳藤益心方醇提物药液;益心方给予1.79g/mL益心方醇提物药液;扶芳藤组给予3.07g/mL扶芳藤醇提物药液;正常对照组给予蒸馏水。依40mL/kg的给药量(最大给药量)灌胃给药,对小鼠进行一次性灌胃给药的急性毒性试验。观察小鼠异常或不良反应、死亡及主要脏器异常病变。结果:扶芳藤益心方组及扶芳藤组小鼠给药后出现静伏少动、腹式呼吸症状,给药5h后上述症状消失。余2组未见其他异常或不良反应。各组均无小鼠死亡,14d后处死解剖未见主要脏器异常病变。结论:扶芳藤益心方醇提物小鼠一次性灌胃的最大给药量为111.2g/kg,相当于拟临床人用药的115倍,急性毒性小,使用较安全;益心方醇提物小鼠一次性灌胃的最大给药量为71.6g/kg,相当于拟临床日用剂量153倍,急性毒性小,使用较安全;扶芳藤醇提物小鼠一次性灌胃的最大给药量为122.8g/kg,相当于拟临床人用药的246倍,急性毒性小,使用较安全。

基于UPLC-Q-Exactive HRMS对扶芳藤益心方的定性分析

目的:利用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UPLC-Q-Exactive HRMS),建立对扶芳藤益心方成分快速鉴定的分析方法。方法:采用Thermo Gold C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm),以0.1%甲酸乙腈-0.1%乙酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾ESI电离源,正、负离子同时质谱扫描模式。结果:通过化合物精确分子量及高分辨二级碎片离子,结合文献报道及UNIFI 1.8软件从扶芳藤益心方中共鉴定出43个化合物,包括有机酸类10个、黄酮类9个、三萜皂苷类9个、萜类7个、生物碱类3个、氨基酸类2个、蒽醌类1个、香豆素类1个和其他类1个。结论:基于UPLC-Q-Exactive HRMS的高分辨率筛查方法,可快速、准确、系统地识别扶芳藤益心方中的多种组分,为该制剂药效物质基础及代谢过程、质量控制及临床开发提供依据和研究思路。

扶芳藤益心方治疗气虚血瘀型胸痹的疗效观察

目的:观察扶芳藤益心方对气虚血瘀型胸痹的疗效。方法:将60例胸痹气虚血瘀证患者分成治疗组30例及对照组30例,对照组采用常规西药治疗,治疗组在常规西药治疗基础上予扶芳藤益心方(扶芳藤30 g,人参10 g,三七10 g,石菖蒲8 g)口服,每日1剂,分两次温服。2周后观察两组心绞痛症状改善及一氧化氮(NO)、内皮素(ET)水平的变化。结果:治疗组总有效率为96.7%,对照组总有效率为76.7%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。经治疗后,治疗组血清NO水平由50.02±9.93μmol/L上升至66.69±9.02μmol/L,血清ET水平由63.04±19.22 pg/ml下降至40.64±13.82 pg/ml,与同组治疗前及对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:扶芳藤益心方能缓解心绞痛症状,改善心微血管内皮细胞功能,治疗气虚血瘀型胸痹疗效良好。