亚麻籽饼粕蛋白提取工艺优化及其水解物抑制α-淀粉酶活性研究

该研究以亚麻籽加工副产物-亚麻籽饼粕为原料制备α-淀粉酶抑制活性肽。采用响应面优化法对亚麻籽蛋白提取工艺进行优化,利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶对所提取亚麻籽蛋白进行酶解,采用3,5-二硝基水杨酸法(3,5-dinitro salicylic acid,DNS)来测定α-淀粉酶活性,比较不同蛋白酶酶解产物的α-淀粉酶抑制活性。根据优化结果与实际条件调整,亚麻籽蛋白的提取条件为pH 9.5,料液比为1∶20(g/mL),温度为50℃,一次浸提时间为120 min以及二次浸提时间为60 min。测得最佳试验条件下亚麻籽饼粕蛋白的提取率为83.27%。α-淀粉酶抑制活性表明,经碱性蛋白酶酶解后得到的酶解产物具有较高的活性,其α-淀粉酶的抑制活性为27%。

白芸豆提取物中α-淀粉酶抑制剂活性检测方法对比分析

本研究基于现有α-淀粉酶抑制剂(α-amylase inhibitor,α-AI)活性检测方法的试验原理,通过验证3,5-二硝基水杨酸法和碘-淀粉显色法2种方法的精度,分析了不同检测方法在检测原理和检测结果准确性2个方面的差异。结果表明,3,5-二硝基水杨酸法是通过测量α-AI对3,5-二硝基水杨酸显色产物的吸光度变化来确定其活性,而碘-淀粉显色法则是利用碘离子与淀粉形成淀粉-碘络合物,通过观察溶液颜色的变化来测定α-AI的活性。从原理上来看,2种方法在测定α-AI活性时采取了不同的测定方式。从检测结果准确性方面来看,2种方法的准确性可能存在差异。3,5-二硝基水杨酸法能够准确测量α-AI对3,5-二硝基水杨酸的抑制能力,从而反映出其活性水平。而碘-淀粉显色法则是通过观察淀粉-碘络合物的颜色变化来判断α-AI的活性,这种方法可能受到其他因素的干扰,从而影响测定结果的准确性。本研究为准确并快速测定白芸豆α-AI产品提供方法,并为精确控制产品质量和生产流程提供参考。

具有α-淀粉酶抑制活性的白芸豆多肽的制备及其热稳定性研究

以白芸豆为原料,酶法制备多肽。以α-淀粉酶抑制率为指标,比较酸性、中性和碱性蛋白酶的酶解效果。结果表明：3.350酸性蛋白酶的酶解效果最好。通过加酶量、酶解p H值、酶解温度和酶解时间的单因素试验和正交试验,得到制备白芸豆多肽的最佳工艺条件为：加酶量3 200 U/g、酶解p H 2.2、酶解温度55℃、酶解时间60 min,此条件下白芸豆多肽α-淀粉酶抑制率为80.82%。热稳定性研究表明,白芸豆多肽的热稳定性高于α-淀粉酶抑制剂（α-amylase inhibitor,α-AI）粗提液,该多肽在85、90℃条件下的α-淀粉酶抑制活性能保持更长时间。凝胶电泳分析表明白芸豆多肽的分子质量为7.53~9.09 ku。

DNS比色法测定白芸豆中α-淀粉酶抑制剂活性的方法研究

目的建立DNS比色法测定从白芸豆中分离纯化α-淀粉酶抑制剂活性的方法。方法通过测定波长、DNS的用量及显色反应时间的试验,确定研究方法。结果确定最佳条件为检测波长470 nm,α-淀粉酶抑制剂与等量α-淀粉酶溶液37℃预温15 min,加入2%可溶性淀粉溶液,准确反应5 min。再加入DNS试剂2 mL,沸水浴5 min后流水冷却。该方法平均回收率为99.95%(n=9),精密度实验RSD=1.01%。结论该方法具有简便、快捷、重复性良好等特点。适用于常规α-淀粉酶抑制剂的活性测定。

驼乳蛋白α-淀粉酶抑制活性肽的制备与鉴定

利用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对驼乳蛋白进行水解,对其酶解工艺、α-淀粉酶抑制活性、氨基酸组成、分子质量分布以及肽段序列进行比较研究,以期获得高活性的α-淀粉酶抑制活性肽。结果表明,酶解可提高驼乳蛋白的α-淀粉酶抑制作用。相对于碱性蛋白酶,在木瓜蛋白酶用量4%、酶解温度55℃、酶解pH 7.0、酶解时间2 h的最佳工艺条件下,水解驼乳蛋白获得的多肽具有更高的α-淀粉酶抑制活性。肽序列分析显示碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解驼乳蛋白制备的多肽分别鉴定出110种和69种肽段,其中IPLPLPLPLP和LPLPLPLR为最有效的α-淀粉酶抑制活性肽。因此,驼乳蛋白可以成为功能性食品或保健品中控制糖尿病有效成分的潜在来源。

结合分子对接技术研究牦牛乳干酪苦味肽RK7和KQ7的α-淀粉酶抑制活性

以牦牛乳干酪苦味肽RPKHPIK(RK7)和KVLPVPQ(KQ7)为研究对象,通过生物信息学方法,使用ExPASy-ProtParam、Innovagen和PepDraw等工具计算RK7和KQ7的理化性质,利用分子对接技术揭示抑制α-淀粉酶的作用机制,结合体外实验测定α-淀粉酶抑制活性。研究表明:RK7和KQ7的分子质量分别为875.07 Da和779.98 Da,疏水性分别为42.86%和71.42%;分子对接显示α-淀粉酶中的His305、Glu233、Trp59和Trp58与RK7和KQ7的结合起重要作用,并且Asp197、Glu233和Asp300是影响α-淀粉酶活性的关键氨基酸;体外活性验证发现,RK7和KQ7α-淀粉酶的IC50分别为0.45 mg/mL和0.86 mg/mL。本研究通过生物信息学方法结合体外活性实验,高效快速获得牦牛乳源α-淀粉酶抑制肽,并通过分子对接技术探究分子间的作用机制,为α-淀粉酶抑制肽的研究提供新思路。

碘试液比色法测定α-淀粉酶抑制剂活性

建立α-淀粉酶抑制剂活性的碘试液比色测定方法,对淀粉基质液浓度、反应温度系列试验条件进行确定。结果显示,最佳测定条件为淀粉基质液浓度为2.5%,酶促反应的最适温度40℃,平均回收率为99.03%(n=6),精密度RSD=1.82%。可见,该测定方法简便、快捷、重复性良好,可作为α-淀粉酶抑制剂活性的常规测定方法。

应用前沿亲和色谱评价5种知母糖苷类化合物的α-淀粉酶抑制活性

以硅胶为载体,制备α-淀粉酶亲和色谱柱,以线扫循环伏安法为检测方法,评价知母提取物的α-淀粉酶抑制活性。首先考察固定化条件对固定化酶的影响以及亲和色谱柱的稳定性。其次利用前沿亲和色谱检测5种知母糖苷类化合物(新芒果苷、芒果苷、知母皂苷AⅡ、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ)的α-淀粉酶亲和力。最后检测化合物的α-淀粉酶抑制活性。结果表明5种化合物的α-淀粉酶结合力大小排序为:新芒果苷(Kd=0.230 5μmol/L)>芒果苷(Kd=0.299 5μmol/L)>知母皂苷BⅡ(Kd=0.312 4μmol/L)>知母皂苷BⅢ(Kd=0.316 2μmol/L)>知母皂苷AⅡ(Kd=0.453 3μmol/L),其排序结果与样品的α-淀粉酶抑制活性一致。说明前沿亲和色谱可以用来定量检测化合物的α-淀粉酶抑制活性,且可根据亲和力的大小将化合物的抑制活性进行排序。

真姬菇菌丝体发酵藜麦产物中多糖的抗氧化和α-淀粉酶抑制活性

利用真姬菇发酵藜麦,通过单因素试验优化发酵物中多糖的提取条件,并将提取的多糖进一步分离纯化,分别测定多糖纯化前后的抗氧化和α-淀粉酶抑制活性。试验结果表明:酶解辅助提取法较优,多糖提取量为(207.67±2.52)mg/g。对提取到的多糖分离纯化后得到4种多糖组分。未纯化多糖(unpurified polysaccharide,UP)对DPPH和羟基自由基清除效果较其他组分显著,最高清除率达到28.95%与43.36%;中性多糖(neutral polysaccharide,NP)对ABTS+自由基清除效果最为明显,最高值达到了51.22%。酸性多糖-0.1(acid polysaccharide-0.1,AP-0.1)对枯草芽孢杆菌来源的α-淀粉酶的抑制效果最强,最高抑制率为60.22%;酸性多糖-0.5(acid polysaccharide-0.5,AP-0.5)对猪胰腺来源的α-淀粉酶抑制能力较显著,最高抑制率为50.36%。结果表明真姬菇与藜麦发酵产物多糖具有一定的抗氧化和α-淀粉酶抑制活性,为其在功能性食品添加剂方向的应用提供了数据基础。

分级醇沉败酱草多糖的理化特征及抑制糖消化酶活性研究

目的探究不同分级败酱草多糖的理化特征、糖消化酶抑制活性以及两者的相关性。方法采用热水提取、不同浓度乙醇(50%、60%、70%、80%)醇沉得到4种败酱草多糖HP-50、HP-60、HP-70和HP-80,使用苯酚-硫酸法、气相色谱、高效凝胶渗透色谱和紫外分光度法分别测定多糖的含量、单糖组成、分子量等理化特征以及对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性,运用双变量相关性分析比较4种多糖抑制糖消化酶的活性与其理化特征的相关性。结果所有败酱草多糖均表现出浓度依赖性的糖消化酶抑制活性,其中HP-80的糖消化酶抑制活性最好;与其他醇沉浓度相比,HP-80葡萄糖摩尔分数较高,鼠李糖和阿拉伯糖摩尔分数较低,相对分子量较小。结论败酱草多糖相对分子量为50~100 kDa、鼠李糖摩尔分数在9.83%以下、阿拉伯糖与葡萄糖物质的量比小于1更有利于败酱草多糖抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的活性。

不同提取方法对黄精多糖理化特性和生物活性的影响

为比较不同提取方法对黄精多糖理化特性和生物活性的影响,该文以黄精根茎为原料,分别用水提法(Water Extraction,WE)、酶解法(Enzyme Extraction,EE)、超声辅助法(Ultrasonic-assisted Extraction,UE)提取黄精多糖(Polygonatum sibiricum Polysaccharides,PP),比较了不同提取方法对黄精多糖得率、化学组成、理化特性(持油力、醇溶性、吸湿性)、生物活性(抗氧化活性、α-葡萄糖甘酶抑制活性、α-淀粉酶抑制活性)、单糖组成及分子量大小的影响。结果表明:酶解法较其他两种提取方法相比,具有较高的得率(8.11%)、总糖含量(52.79%)、持油力(5.67 g/g)、吸湿率(25.28%)和重均分子量(5.343×10^(5) g/mol)。三种提取方法得到的多糖对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS^(+))的半数抑制质量浓度IC_(50)(mg/mL)分别为0.41、0.23、0.25;对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)的半数抑制质量浓度IC50(mg/mL)分别为0.19、0.16、0.18;对α-葡萄糖甘酶的半数抑制质量浓度IC50(mg/mL)分别为2.14、1.98、2.06;对α-淀粉酶的半数抑制质量浓度IC50(mg/mL)分别为0.62、0.41、0.58。三种多糖均为酸性多糖,单糖组成以葡萄糖为主。通过红外光谱检测到3种多糖均具有多糖特征官能团,电镜扫描结果呈现不同的结构特征。综上,不同提取方法对黄精多糖的理化特性、生物活性、单糖组成和微观结构的影响有差异,酶解法是一种可以提高多糖理化性质和生物活性的有效方法,黄精多糖具有一定生物活性和可开发利用价值。

灵菊七蛋白提取及其降糖活性研究

为了开发降糖药用植物灵菊七,从提取溶剂、加热方式、提取时间、提取温度、料液比5个方面对灵菊七活性蛋白提取工艺进行了研究,并检测了不同工艺获得的提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用,通过响应面法优化了提取条件.结果表明,蛋白提取率最高的提取条件为:提取温度62℃、提取时间3 h、料液比1∶30、提取溶剂PBS缓冲液,蛋白最大提取率可达10.8%;提取液对α-淀粉酶具有最高抑制率的提取条件为:提取温度59℃、提取时间3 h、料液比1∶30、提取溶剂PBS缓冲液,最大抑制率为34.49%;浸提液对α-葡萄糖苷酶具有最高抑制率的提取条件为:提取温度52℃、提取时间5 h、料液比1∶30、提取溶剂PBS缓冲液,灵菊七浸提液对α-葡萄糖苷酶的最大抑制率达到16.04%.浸提液对α-淀粉酶抑制率随着蛋白含量的增加而升高,结合提取液蛋白含量和纯度研究,可以推测灵菊七浸提液含有对α-淀粉酶具有较好抑制作用的活性蛋白.

4株姬松茸胞外多糖含量和生物活性的对比分析

对4株姬松茸菌株进行胞外多糖含量及生物活性对比研究。通过液体深层发酵后提取胞外多糖,采用苯酚-浓硫酸法和3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)法测定其含量,通过滤纸片扩散法和分光光度法分别对其进行抑菌和α-淀粉酶抑制作用研究,利用DPPH法、ABTS法和水杨酸法考察其体外抗氧化活性。结果表明菌株JS06胞外多糖成分的抑菌活性高于其他3株姬松茸菌株,对金黄色葡萄球菌效果最好。菌株JS01对α-淀粉酶的IC50为2.425 mg/mL,优于其他3株姬松茸菌株;4株姬松茸菌株DPPH自由基、ABTS+自由基和羟自由基的清除率均随质量浓度的增大而增大,当质量浓度达到1.0 mg/mL时,菌株JS01对ABTS+自由基的清除率为83.06 %,高于其他3株姬松茸菌株;JS06对DPPH自由基和羟自由基的清除率分别为96.47 %和99.71 %,均高于其他3株姬松茸菌株,且对于羟自由基的清除率高于VC。该研究表明4株姬松茸胞外多糖成分均具有一定的生物活性。

4株羊肚菌胞外多糖含量及其生物活性的研究

为探讨不同羊肚菌菌株胞外多糖的含量及其抑菌、抗氧化活性和对α-淀粉酶的抑制作用是否有差异,以4株羊肚菌(编号为YS-Y、XH-0、XH-2、XH-4)为材料,利用醇沉法提取羊肚菌胞外多糖,并用Sevag法去除蛋白后,测定其胞外多糖含量及其抑菌活性、抗氧化能力和对α-淀粉酶的抑制作用,并将其结果进行对比。结果表明,YS-Y、XH-0、XH-2、XH-44株羊肚菌胞外多糖的含量分别为10.05%、5.80%、19.89%、8.34%;4株羊肚菌具有一定程度的抑菌能力,菌株XH-2的抑菌效果优于其它3株,且对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果最好;4株羊肚菌的还原力、DPPH自由基、ABTS+自由基以及羟自由基清除率都随着质量浓度的增大而增大,当质量浓度达到1.0 mg/mL时,菌株XH-2的还原能力和ABTS+自由基清除能力优于其他3株,其OD700值和EC50分别为0.136和0.56 mg/mL;菌株XH-4的DPPH和羟自由基清除率优于其它3株,其EC50分别为16.68 mg/mL和1.40 mg/mL,且4株羊肚菌的羟自由基清除率均大于VC;菌株XH-2对α-淀粉酶的抑制作用优于其它3株,其EC50为1.55mg/mL。该研究表明羊肚菌胞外多糖具有一定的生物活性,菌株XH-2和XH-4具有更大的药用潜力,可为羊肚菌资源开发提供一定的参考意义。

硒化蒲公英多糖的制备、结构表征及益生菌促增殖活性

本实验以蒲公英根为原料,采用硝酸-亚硒酸钠法制备硒化蒲公英多糖(selenizeddandelionroot polysaccharide,Se-DRP),研究其理化性质、结构、对益生菌增殖的促进作用和对α-淀粉酶的抑制活性。结果表明:Se-DRP是一种分子质量为8 102 Da的杂多糖,由半乳糖醛酸、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖6种单糖组成,物质的量比为0.64∶0.73∶19.36∶0.84∶1.00∶27.41;核磁共振结果表明,组成Se-DRP的主要糖残基为→6-β-D-葡萄糖-(1→、→5)-α-L-阿拉伯糖-(1→、→3)-β-D-半乳糖-(1→和→4)-α-D-半乳糖醛酸-(1→;Se-DRP能促进益生菌的增殖,植物乳杆菌10665和嗜酸乳杆菌可将Se-DRP作为碳源利用;同时,Se-DRP对α-淀粉酶活性具有一定的抑制作用,在质量浓度为4.0 mg/mL时,抑制率为(52.34±1.45)%。以上结果为进一步研究Se-DRP及蒲公英资源的开发利用提供了一定的理论依据。

罗望子壳降血糖活性化学成分的研究

本文测定了罗望子壳醇提取物各个活性部位的降血糖活性,发现其正丁醇相活性最高。接着对正丁醇相的化学成分进行分离鉴定,采用大孔吸附树脂(HP-20),正相硅胶柱层析,反相硅胶柱层析(RP-18),以及葡聚糖凝胶(LH-20)等分离手段分离鉴定其主要化学成分。通过1H NMR,13C NMR技术并结合文献对照对7个化合物的结构进行了鉴定和确认,他们的分别是:槲皮素(A)、山萘酚(B)、桑黄素(C)、芹菜素(D),柚皮素(E)、木犀草素(F)、和杨梅酮(M)。我们通过测定这7个黄酮类化合物对α-葡萄糖苷酶、猪胰液α-淀粉酶(PPA)的抑制活性以评价其降血糖活性,结果显示除了芹菜素之外,其他6个化合物都显示了较好的酶抑制活性。表明黄酮类化合物是罗望子壳降血糖有效成分之一。

人面果叶子、根部、果实提取物体外抗糖尿病活性研究(英文)

为了评价人面果叶子、根部、果实提取物体外抗糖尿病活性，相应测定了其石油醚提取物（PFr．）、乙酸乙酯提取物（EFr．）、正丁醇提取物（BFr．）、水提取物（WFr．）的α-葡萄糖苷酶与仪-淀粉酶抑制活性，以及HepG2细胞的促葡萄糖消耗能力。果实乙酸乙酯提取物（IC50=17．81±1．09μg/mL）、叶子乙酸乙酯提取物（IC50=18．60±1．56μg／mL）、根部乙酸乙酯提取物（IC50=14．05±0．24μg／mL）、根部正丁醇提取物（IC50=13．01±0．38μg／mL）显示了较好的仪一葡萄糖苷酶抑制活性（aearb086IC50〉200．μg/mL）。而根部乙酸乙酯与正丁醇提取物在600μg／mL的浓度下就显示了90％的α-葡萄糖苷酶抑制率，在1．5mg／mL的浓度下显示了90％的α-淀粉酶抑制率。在促葡萄糖消耗试验中，果实乙酸乙酯提取物在浓度为7．5～30mg／mL时显示了很好的促HepG2细胞葡萄糖消耗能力（P〈0．001），叶子乙酸乙酯提取物、根部正丁醇与乙酸乙酯提取物的促葡萄糖消耗率达到了3．08、3．12、1．93，仅次于果实乙酸乙酯提取物（3．91）。此次研究为人面果抗糖尿病活性开发提供一定理论基础。

古巴栓孔菌胞内及胞外多糖的体外生理活性

以古巴栓孔菌(Tramtes cubensis)胞内多糖与胞外多糖为研究对象,通过体外抗氧化、α-淀粉酶抑制试验,探讨胞内与胞外多糖的体外生理活性。体外抗氧化试验结果表明,古巴栓孔菌的胞内与胞外多糖对ABTS^(+)自由基、DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子均具有一定的清除能力。其中,2种多糖对ABTS·^(+)的清除能力最为显著,当胞内多糖和胞外多糖浓度分别为2.5 mg·mL^(-1)、10.0 mg·mL^(-1)时,清除率均可以达到100%。α-淀粉酶抑制试验结果表明,古巴栓孔菌的胞内与胞外多糖对猪胰腺来源以及枯草芽孢杆菌来源的α-淀粉酶均具有一定的抑制作用。其中,对枯草芽孢杆菌来源的α-淀粉酶抑制作用较为显著,当胞内多糖与胞外多糖浓度均为5.0 mg·mL^(-1)时,抑制率分别可以达到74.06%与72.30%。亚硝酸盐清除试验结果表明,2种多糖对亚硝酸盐都有较明显的清除作用,浓度为10.0 mg·mL^(-1)时,清除率分别可达到61.29%与58.97%。试验结果为古巴栓孔菌胞内多糖与胞外多糖作为功能性食品或食品添加剂的应用,提供了一定的数据与理论支持。

牡蛎蛋白酶解多肽降糖及抗氧化活性评价

目的:利用化学方法评价9种酶对牡蛎蛋白酶解所得多肽降血糖和抗氧化活性的影响,筛选最佳酶的种类。方法:以牡蛎蛋白酶解多肽对α-淀粉酶抑制率为指标评价其体外辅助降血糖活性,以DPPH·清除率、超氧阴离子抑制率为指标评价牡蛎蛋白酶解多肽的体外抗氧化活性,筛选出最佳用酶。结果:风味蛋白酶得到的多肽对α-淀粉酶的抑制效果最好,5 mg/m L时抑制率达到67.13%,IC_(50)值为3.806 mg/m L;糜蛋白酶酶解得到的多肽对DPPH·的清除率最高,2 mg/m L时清除率为58.09%,IC_(50)值为1.16 mg/m L;同时,糜蛋白酶酶解得到的多肽对超氧阴离子的抑制率也最高,2 mg/m L时抑制率为53.64%,IC_(50)值为1.75 mg/m L。结论:风味蛋白酶和糜蛋白酶酶解所得牡蛎多肽在降糖和抗氧化方面具有较大的潜力,为进一步开展牡蛎蛋白酶解多肽的研究提供参考。

紫娟茶原花青素的组分及活性评价

为研究紫娟茶原花青素组分结构及对α-淀粉酶的抑制活性,本文首先对紫娟茶原花青素进行提取纯化,并采用香草醛硫酸法测定其纯度为93%,之后,利用UPLC-ESI-MS对其原花青素组分进行鉴定,初步鉴定出至少3种单体(包括(E) C,EGC,EGCG)和7种原花青素低聚物体(包括原花青素多聚体m/z 761,m/z 745,m/z 729,m/z 865,m/z881,m/z 609,m/z 593)。并研究了紫娟茶原花青素对α-淀粉酶的抑制活性,表明紫娟原花青素较阿卡波糖及原花青素单体EGCG有更好的抑制活性。这项研究表明,紫娟中原花青素有成为抗糖尿病及减肥药物的潜力。