铁超载调控氧化性低密度脂蛋白诱导泡沫细胞促动脉粥样硬化活化的作用

目的探讨铁超载对泡沫细胞促动脉粥样硬化(AS)活化的影响。方法RAW264.7和MOVAS细胞株扩增培养,分为正常对照(media)组、oxLDL组、oxLDL+柠檬酸铁铵(oxLDL+FC)组、oxLDL+柠檬酸铁铵+去铁胺(oxLDL+FC+DFO)组,分别以氧化性低密度脂蛋白(oxLDL)、柠檬酸铁胺(FC)、去铁胺(DFO)刺激。普鲁士蓝和油红O染色检测铁沉积和泡沫细胞生成。CCK-8测定细胞存活率,DHE探针观察活性氧自由基(ROS)生成,ELISA测定还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4),丙二醛(MDA)含量。RT-qPCR检测ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和ATP结合盒转运体G1(ABCG1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA),平滑肌22a(smooth muscle 22 alpha,SM22a)、骨桥蛋白(OPN),白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达。结果与oxLDL组相比,oxLDL+FC组细胞胆固醇逆向转运分子ABCA1和ABCG1表达降低,细胞泡沫化加重,死亡率上升,且ROS和MDA的表达增加,GPX4表达降低,巨噬细胞M1型标志物及平滑肌细胞合成型标志物升高,炎症因子IL-1β、TNF-α的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论铁超载能促进泡沫细胞生成,使其向促动脉粥样硬化表型转化,加重脂质过氧化及炎症反应。

血清小而密低密度脂蛋白胆固醇和总抗氧化能力水平与脑梗死患者认知功能障碍的相关性分析

目的:探究脑梗死患者血清小而密低密度脂蛋白胆固醇(small dense low-density lipoprotein cholesterol, sdLDL-C)和总抗氧化能力(total antioxidant capacity, T-AOC)水平变化及其与认知功能障碍发生的关系。方法:选择148例脑梗死患者,依据发病后7 d是否出现认知功能障碍,分为非障碍组(n=77)和障碍组(n=71);分别采用过氧化氢酶法和比色法测定两组血清sdLDL-C和T-AOC水平,并进行比较;Pearson相关系数法分析脑梗死患者血清sdLDL-C、T-AOC水平与蒙特利尔认知评估(MoCA)评分相关性;二元Logistic回归分析影响脑梗死患者认知功能障碍发生的危险因素。结果:与非障碍组相比,障碍组血清sdLDL-C水平明显升高(P<0.05),T-AOC水平明显降低(P<0.05)。相关性分析显示,血清sdLDL-C水平与MoCA评分呈负相关(r=-0.516,P<0.05),T-AOC水平与MoCA评分呈正相关(r=0.446,P<0.05)。Logistic回归分析显示,高血压、糖尿病、病情严重程度、血清sdLDL-C和T-AOC是脑梗死患者认知功能障碍发生的独立影响因素(P<0.05)。结论:脑梗死患者血清sdLDL-C水平升高,T-AOC水平降低,二者是影响脑梗死患者并发认知功能障碍的独立影响因素。

氧化型低密度脂蛋白对2型糖尿病合并肺结核患者的风险评估价值

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)对2型糖尿病(T2DM)合并肺结核(PTB)患者的风险评估潜力。方法前瞻性纳入2022年6月至2023年6月门诊就诊的单纯高脂血症组病例60例、PTB组病例100例、T2DM组病例100例和T2DM合并PTB组病例100例,其中PTB组、T2DM组和T2DM合并PTB组再二次分组为血脂正常亚组40例和高脂血症亚组60例,共计360例为病例组;健康人群60例为对照组;入组年龄段为35~70岁。各组均采集静脉血,检测血液中的HbA1C、INS、FSG、TC、TG、HDL、LDL、ApoA I和Apo B,并采用ELISA法检测oxLDL,比较各组间的水平差异。应用多元logistic回归分析oxLDL水平与PTB和T2DM合并PTB的关联。结果T2DM高脂血症亚组的BMI、血糖、血脂和胰岛素抵抗等情况与T2DM合并PTB高脂血症亚组对比差异均无统计学意义(P>0.05);T2DM高脂血症亚组oxLDL水平高于对照组2倍以上,其血脂正常亚组的oxLDL水平显著高于对照组(P<0.05);T2DM合并PTB高脂血症亚组和单纯高脂血症组的oxLDL水平均显著高于对照组2倍以上,但与PTB高脂血症亚组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示,T2DM高脂血症亚组和T2DM合并PTB高脂血症亚组的TG和LDL均与oxLDL呈显著正线性相关(R=0.352,P<0.05),PTB高脂血症亚组人群的CHOL和LDL均与oxLDL呈显著正线性相关(R=0.441,P<0.05);多元logistic回归分析显示oxLDL高于对照组2倍以上水平均是PTB和T2DM合并PTB的独立危险因素(均P<0.05)。结论显著升高的oxLDL水平可能是T2DM和PTB共病的危险因素,建议对oxLDL高于对照组2倍以上水平作为一个有临床意义的病理水平去进一步评估。

双嘧达莫与低分子肝素对肾病综合征患儿凝血功能、肾功能、内皮功能及β_(2)糖蛋白Ⅰ/氧化低密度脂蛋白复合物的影响

目的 研究双嘧达莫与低分子肝素对肾病综合征患儿凝血功能、肾功能、内皮功能及β_(2)糖蛋白Ⅰ(β_(2)-GPⅠ)/氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)复合物的影响。方法 选取广西中医药大学第一附属医院2021年4月至2022年6月收治的90例肾病综合征患儿,按照随机数字表法将其分为对照A组(30例)、对照B组(30例)和观察组(30例)。对照A组给予甲泼尼龙+低分子肝素治疗,对照B组给予甲泼尼龙+双嘧达莫治疗,观察组行甲泼尼龙+低分子肝素+双嘧达莫治疗,三组均连续治疗30 d。比较三组治疗效果;比较三组治疗前后凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)],肾功能指标[尿素氮(BUN)、胱抑素C(CysC)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白定量],内皮功能指标[内皮素1(ET-1)、血管性血友病因子(v WF)]及β_(2)-GPⅠ/ox-LDL复合物;观察组三组不良反应发生情况。结果 观察组与对照A组疗效比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组疗效优于对照B组(P<0.05)。治疗后,观察组APTT、PT水平长于对照A组和对照B组(P<0.05)。治疗后,观察组D-D、FIB、BUN、Cys C、Scr、24 h尿蛋白定量、ET-1、vWF、β_(2)-GPⅠ/ox-LDL复合物水平低于对照A组和对照B组(P<0.05)。观察组与对照A组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组与对照B组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 双嘧达莫联合低分子肝素可提高肾病综合征患儿临床疗效,改善凝血功能及肾功能,且用药安全性高。

血清氧化低密度脂蛋白与多囊卵巢综合征不孕患者临床妊娠结局的相关性研究

目的分析血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)与多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者临床妊娠结局的关系。方法采用前瞻性队列研究方法连续收集2020年1月至2021年12月承德市中心医院诊治的155例PCOS不孕患者作为研究对象。记录患者的妊娠成功率,记录患者入组时临床资料及基线性激素指标、胰岛素抵抗相关指标、血清ox-LDL水平。根据血清ox-LDL水平分为高水平组(n=85)和低水平组(n=70)。分析血清ox-LDL与PCOS不孕患者临床妊娠结局的相关性。结果155例PCOS不孕患者中有34例成功妊娠,临床妊娠率为21.94%。高水平组临床妊娠成功率低于低水平组,稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于低水平组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,PCOS不孕患者血清ox-LDL、HOMA-IR和甘油三酯(TG)表达上调是导致PCOS不孕患者临床妊娠失败的危险因素(P<0.05)。Pearson相关性检验显示,血清ox-LDL水平与PCOS不孕患者HOMA-IR和TG呈正相关(r>0,P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,血清ox-LDL水平预测PCOS不孕患者临床妊娠结局的曲线下面积(AUC)为0.806;当血清ox-LDL临界值达498.09μg/L时,患者发生临床妊娠失败风险较高。结论PCOS不孕患者临床妊娠结局与血清ox-LDL升高有关,早期检测有助于预测临床妊娠失败的风险,其可作为辅助预测指标。

利伐沙班对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的探讨利伐沙班(RIV)对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能损伤的影响。方法根据干预措施,将实验分为空白对照组(A组,常规培养液),Ox-LDL组(B组,100μg/mL Ox-LDL的培养液),Ox-LDL+RIV125组(C1组,100μg/mL Ox-LDL和125 ng/mL RIV的培养液),Ox-LDL+RIV250组(C2组,100μg/mL Ox-LDL和250 ng/mL RIV的培养液)和Ox-LDL+RIV500组(C3组,100μg/mL Ox-LDL和500 ng/mLRIV的培养液),各组细胞均处理48 h。采用CCK-8法检测各组细胞存活率的变化,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用免疫印迹(Western blot)法检测细胞核因子-κB(NF-κB)和尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)蛋白表达水平。结果与B组比较,C1组、C2组、C3组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和uPAR表达水平均显著降低(P<0.05);C3组IL-1β,TNF-α,IL-6水平和p-NF-κB p65表达水平显著降低(P<0.05)。结论RIV能显著恢复细胞活力、减少细胞凋亡和由Ox-LDL引起的炎性反应,可能通过NF-κB和uPAR的调节而发挥作用。

3种中药成分对氧化型低密度脂蛋白诱导人主动脉内皮细胞损伤的影响

目的探讨3种中药成分(姜黄素、连翘苷、白藜芦醇)对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(HAEC)损伤的影响。方法实验设空白对照组(等体积基础培养液),溶剂对照组[等体积含二甲基亚砜(DMSO)的基础培养液],Ox-LDL组(20μg/mL Ox-LDL),姜黄素①②③④组(20μg/mL Ox-LDL+2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L姜黄素),连翘苷①②③④组(20μg/mL Ox-LDL+10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L连翘苷),白藜芦醇①②③组(20μg/mL Ox-LDL+20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L白藜芦醇),采用四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测细胞活性,并计算细胞增殖率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)和环氧合酶2(COX-2)mRNA的表达水平。结果与Ox-LDL组比较,姜黄素、白藜芦醇各剂量组,连翘苷④组细胞增殖率均显著降低(P<0.01或P<0.05);姜黄素③组、连翘苷②③④组、白藜芦醇各剂量组细胞LC3 mRNA表达水平均显著升高,COX-2 mRNA表达水平均显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论姜黄素、连翘苷和白藜芦醇可抑制Ox-LDL诱导下HAEC的增殖,可激发受损细胞自噬,抑制炎性因子COX-2表达。

急性脑梗死患者血清中高迁移率族蛋白、脂联素和氧化低密度脂蛋白的表达水平及其与颈动脉粥样硬化的相关性

目的探讨急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化与血清中高迁移率族蛋白(HMGB)、脂联素和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)表达水平的相关性。方法回顾性选取2021年9月至2023年9月唐山市人民医院收治的80例急性脑梗死患者作为急性脑梗死组,梗死类型:轻度梗死(梗死直径<3.0 cm)30例,中度梗死(梗死直径3.0~5.0 cm)30例,重度梗死(梗死直径>5.0 cm)20例;颈动脉粥样硬化:内膜粗糙28例,稳定斑块36例,不稳定斑块16例;选取80名无脑血管梗死的体检老年人作为对照组。检测两组研究对象血清中HMGB、脂联素和oxLDL的表达水平,并比较不同梗死类型、不同颈动脉粥样硬化急性脑梗死患者的血清中HMGB、脂联素和oxLDL表达水平,分析急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化与血清中HMGB、脂联素和oxLDL表达水平的相关性。结果急性脑梗死组患者的血清中HMGB和oxLDL的表达水平分别为(25.47±5.15)ng/L、(5.22±1.04)mU/L,均明显高于对照组[(3.61±1.21)ng/L、(2.61±0.45)mU/L],脂联素的表达水平为(9.52±1.25)mg/L,明显低于对照组[(17.17±2.16)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。轻度梗死、中度梗死、重度梗死急性脑梗死患者的血清中HMGB和oxLDL的表达水平均逐渐升高,脂联素的表达水平逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。内膜粗糙、稳定斑块、不稳定斑块急性脑梗死患者的血清中HMGB和oxLDL的表达水平均逐渐升高,脂联素的表达水平逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化程度与血清中HMGB和oxLDL的表达水平均呈显著正相关(r=0.503、0.532,P<0.05),与脂联素表达水平呈显著负相关(r=-0.601,P<0.05)。结论急性脑梗死患者血清中HMGB和oxLDL的表达水平明显升高,脂联素的表达水平明显降低,血清HMGB、脂联素和oxLDL的表达水平与颈动脉粥样硬化病情显著相关,将有效依据提供给了临床诊治急性脑梗死。

血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1、胶质纤维酸性蛋白检测在新生儿缺血缺氧性脑病病情严重程度中的诊断价值

目的:探讨血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)病情严重程度的关系。方法:选择80例HIE患儿作为观察组,另选择90例健康新生儿作为对照组,收集所有患儿一般资料,并检测两组患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平,分析HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP与病情严重程度的相关性及预后不良的影响因素。结果:对照组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平低于观察组(均P<0.05)。重度组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平高于中度组、轻度组和对照组(均P<0.05)。Pearson相关分析显示,疾病严重程度与HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平呈正相关(均P<0.001)。随访预后良好患儿59例,预后不良21例,经多因素Logistic回归分析显示,产程异常、病情重度、S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP为影响HIE患儿预后的危险因素(均P<0.05)。结论:HIE患儿病情严重程度和预后与血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平有关,监测其水平变化有利于临床早期完善干预方案改善预后。

达格列净减轻氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡和功能障碍

背景:达格列净是钠-葡萄糖共转运蛋白2的抑制剂,可以通过调节糖代谢和抑制炎症改善内皮细胞功能,从而延缓动脉粥样硬化的进展。目的:观察达格列净对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡和内皮功能障碍的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞分为3组:对照组不进行任何干预,模型组加入氧化低密度脂蛋白处理24 h,达格列净组在加入氧化低密度脂蛋白的基础上给予达格列净干预24 h,CCK-8检测内皮细胞增殖活性,ELISA检测细胞培养上清液中细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1和单核细胞趋化蛋白1水平;硝酸还原酶法检测细胞一氧化氮水平;Hoechst 33342/PI荧光双染和乳酸脱氢酶释放实验检测内皮细胞焦亡情况和焦亡特征;Western blot检测内皮细胞焦亡因子NLRP3、caspase-1、GSDMD、白细胞介素18和白细胞介素1β蛋白表达。结果与结论:①氧化低密度脂蛋白可以导致内皮细胞焦亡和功能障碍;②与对照组相比,模型组细胞活性和一氧化氮水平下降(P<0.05),而乳酸脱氢酶、细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1以及单核细胞趋化蛋白1显著增多(P<0.05);与模型组相比,达格列净组细胞活性和一氧化氮水平明显增加(P<0.05),而乳酸脱氢酶、细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1以及单核细胞趋化蛋白1显著下降(P<0.05);③与模型组相比,达格列净组细胞焦亡率以及焦亡因子NLRP3、caspase-1、GSDMD、白细胞介素18和白细胞介素1β蛋白表达明显减少(P<0.05);④以上结果表明,达格列净可以抑制氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡并改善内皮细胞功能障碍。

长链非编码RNA NUTM2A-AS1靶向微小RNA-129-5p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至HUVEC后采用100μg/mL oxLDL处理后的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC后采用100μg/mL的oxLDL处理的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组。采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转。lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p。结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤。

缺氧诱导因子-1α介导缺氧和氧化低密度脂蛋白环境调控巨噬细胞相关凝集素-1的表达研究

目的探讨在动脉粥样硬化(AS)相关的缺氧和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)环境中,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对巨噬细胞表面髓系DAP-12相关凝集素-1(MDL-1)表达的调控作用,并分析其对巨噬细胞生物学特性的影响。方法本研究于2022年3月在新疆医科大学临床医学研究院心血管病研究所进行。实验将RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞分为四组:空白对照组、缺氧+ox-LDL组、缺氧+ox-LDL+DMOG组和缺氧+ox-LDL+2ME2组。通过WesternBlot技术分析各组巨噬细胞相关凝集素-1(MDL-1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、细胞周期素D1(CCND1)、胱天蛋白酶3(Caspase3)、胱天蛋白酶1(Caspase1)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)的表达差异。利用CCK-8和台盼蓝染色法评估细胞增殖和活力。LDH、IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子的含量则通过ELISA试剂盒测定。结果本研究评估了RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞在不同处理条件下的蛋白表达和细胞功能变化。在缺氧+ox-LDL组中,与空白对照组相比,MDL-1、HIF-1α、Caspase3、Caspase1、NLRP3的表达显著增加,同时CCND1表达显著降低(P<0.05)。此外,该处理组的LDH、IL-1β、IL-6和TNF-α水平也显著增加[(340.267±41.338)U/L比(154.667±20.044)U/L,(89.251±8.488)pg/ml比(49.623±5.070)pg/ml,(36.642±4.730)ng/ml比(20.619±0.884)ng/ml,1104.515±46.411 pg/m比(785.291±40.339)pg/ml,P<0.01],细胞增殖能力和活细胞率显著下降[OD值(0.296±0.065)比(0.570±0.032),活细胞率(69.108±7.816)%比(98.147±0.781)%,P<0.01]。DMOG处理组相较于缺氧+ox-LDL组表现出蛋白表达和炎症标志物的显著下降,细胞增殖和活细胞率得到改善(P<0.01)。相反,2ME2处理加剧了炎症反应和细胞损伤,蛋白表达和炎症指标均有所增加,细胞活性进一步降低(P<0.01)。结论HIF-1α在缺氧和ox-LDL环境下调节MDL-1表达,进而影响巨噬细胞的增殖、存活和炎性因子的分泌功能,该生物学特性可能在AS的病理过程中发挥重要作用。

阿尔茨海默病患者氧化型低密度脂蛋白和胆碱酯酶的水平及临床意义

目的:探究阿尔茨海默病(AD)患者氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)和胆碱酯酶(CHE)检测的临床意义。方法:选取2018年4月~2021年4月广东医科大学附属医院附属医院收治的AD患者36例作为观察组,另选取同期健康者36例作为对照组,分别检测和比较两组血清的ox-LDL和CHE水平差异,并结合患者实际病情进行对照分析。结果:观察组的ox-LDL高于对照组,而CHE低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AD患者病情程度不同其检测因子含量亦不同,CHE呈下降趋势、ox-LDL呈上升趋势。结论:ox-LDL和CHE的血清水平与AD有一定的相关性,并可对AD患者的病情程度进行预测。

人参炔三醇抑制氧化低密度脂蛋白诱导泡沫细胞形成的作用机制研究

目的探讨人参炔三醇(panaxytriol,PXT)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导单核巨噬细胞脂质沉积的作用机制。方法单核细胞THP-1经佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导成巨噬细胞后,采用不同浓度(0、1、5、10、20μmol/L)PXT处理单核巨噬细胞24小时,通过MTT法检测其对细胞存活率的影响。THP-1单核巨噬细胞经PMA刺激后,利用oxLDL诱导脂质蓄积,PXT处理后利用流式细胞仪,荧光显微镜和油红O染色检测巨噬细胞对oxLDL的摄取。采用Western blot检测细胞内白细胞分化抗原36(cluster of differentiation,CD36)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体B1(scavenger receptor class B type 1,SRB1)的蛋白表达水平变化。结果MTT实验结果显示,与正常组比较,20μmol/L PXT处理THP-1单核巨噬细胞24小时后显著抑制了细胞活力(P<0.05),且其他浓度对细胞活力均无显著影响。流式细胞检测、细胞荧光成像和油红O染色结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低巨噬细胞内DiI-oxLDL荧光强度与细胞内脂质蓄积(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低了巨噬细胞中CD36蛋白的表达(P<0.05),而对其他蛋白无显著影响。结论PXT通过抑制清道夫受体CD36的表达,抑制巨噬细胞对oxLDL的吞噬及泡沫细胞的形成,具有潜在的抗动脉粥样硬化活性。

氧化低密度脂蛋白通过PCSK9/LRP1信号途径促神经细胞凋亡的双向调节

目的阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是多种危险因素引起的中枢神经系统退行性疾病,其中神经细胞凋亡是其主要病理基础之一。高脂血症是AD发生的高危因素,可导致脑组织内氧化低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)水平增高。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9)是一个与血脂代谢密切相关的蛋白酶,但有研究显示其与AD发生可能相关。本研究旨在探索PCSK9在介导ox-LDL促神经细胞凋亡中的作用及其机制,进一步阐述高脂血症导致AD等神经退行性疾病的发生机制。方法首先用不同浓度ox-LDL(0、25、50、75、100 mg/L)处理PC12细胞24 h,油红O染色检测PC12细胞脂质蓄积,Hoechst33258染色和流式细胞术检测PC12细胞凋亡,ELISA检测PC12分泌的β淀粉样肽(amyloidβ-peptide,Aβ)含量,蛋白质印迹(Western blot)法检测SREBP2、PCSK9和LRP1的表达。然后用75 mg/L ox-LDL处理PC12细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),Western blot检测SREBP2、PCSK9和LRP1的表达情况。最后,100 nmol/L PCSK9 siRNA转染PC12细胞48 h后,用75 mg/L ox-LDL处理PC12细胞24 h,Hoechst33258染色和流式细胞术检测PC12细胞的凋亡率,Western blot检测PCSK9、LRP1、PI3K、AKT、P-PI3K、P-AKT、NF-κB、Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达,ELISA检测PC12细胞的Aβ分泌量。结果ox-LDL可以增加PC12细胞脂质蓄积,促进PC12细胞凋亡和Aβ分泌,同时增加PC12细胞中SREBP2和PCSK9的表达,减少LRP1的表达。敲低PCSK9的表达可以通过PI3K/AKT通路和NF-κB-Bcl-2/Bax-Caspase-9/3通路减弱ox-LDL诱导的PC12细胞凋亡,同时增加PC12细胞中Aβ的分泌。结论ox-LDL通过诱导PC12细胞中PCSK9表达增加,降低LRP1的表达,进而影响下游的不同信号途径,从而在ox-LDL诱导PC12细胞凋亡中发挥双向调节作用。

氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖及circRNA-CER表达的影响

目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后环状RNA circRNA-CER(circRNA-100876)的表达及其对HUVEC增殖的影响。方法分别以不同浓度ox-LDL(40、60、80、100及200 mg/L)刺激HUVEC 24 h,以及以100 mg/L ox-LDL刺激HUVEC 6、12、24及48 h,利用实时荧光定量PCR验证circRNA-CER在细胞中的表达水平;构建circRNA-CER特异性过表达质粒并进行细胞转染,采用CCK8实验研究circRNA-CER在血管内皮细胞增殖中的作用;荧光定量PCR检测circRNA-CER对miR-136表达的影响;Western blot检测过表达circRNA-CER后血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平,荧光素酶报告基因验证circRNA-CER与miR-136、miR-136与VEGF-3′UTR的相互作用。结果随ox-LDL处理浓度增加,circRNA-CER在HUVEC中的表达量呈下调趋势,并在100 mg/L时差异有统计学意义(P<0.05);在用该浓度ox-LDL以时间梯度刺激HUVEC后,circRNA-CER表达随刺激时间的延长而下调,在24 h处差异有统计学意义(P<0.05);上调circRNA-CER表达可抑制ox-LDL(100 mg/L、24 h)对HUVEC增殖的抑制作用,上调miR-136的RNA及VEGF的蛋白表达水平,同时干预miR-136表达可阻止circRNA-CER对VEGF表达的调控;荧光素酶报告基因实验证实circRNA-CER与miR-136、miR-136可与VEGF 3′-UTR直接结合。结论circRNA-CER可阻止ox-LDL对HUVEC增殖的抑制效应,机制为circRNA-CER通过“海绵样”作用调控miR-136后,影响其对下游靶基因VEGF的转录后调控。

氧化低密度脂蛋白及脂联素在动脉粥样硬化中的作用研究进展

血管内皮细胞可在血管和组织之间形成屏障,其功能受损是动脉粥样硬化的起始环节,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)可以通过多种途径介导血管内皮细胞损伤,促进动脉粥样硬化的发生与发展。因此,保护血管内皮细胞,减少其遭受氧化低密度脂蛋白损伤,是预防和治疗动脉粥样硬化的关键。脂联素(APN)是一种由脂肪细胞分泌的糖蛋白,可以通过调控内皮细胞炎症反应、保护血管内皮细胞形态与功能等多个方面来发挥抗动脉粥样硬化效应。文章就ox-LDL引起的血管内皮细胞损伤及脂联素对血管内皮细胞的保护作用进行综述,以期为抗动脉粥样硬化提供新的研究思路。

川芎嗪通过miR-34a对氧化型低密度脂蛋白诱导的冠状动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨川芎嗪是否通过miR-34a影响氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)损伤。方法:正常培养人HCAECs,作为Con组;用50 mg/L的ox-LDL干预HCAECs,建立细胞损伤模型,作为ox-LDL组。并设立1、10、100 mmol/L组(HCAECs用1、10、100 mmol/L川芎嗪处理+ox-LDL干预),ox-LDL+anti-miR-NC组、ox-LDL+anti-miR-34a组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-34a组、ox-LDL+miR-NC+100 mmol/L组、ox-LDL+miR-34a+100 mmol/L组。分别采用试剂盒、酶联免疫吸附法(ELISA)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HCAECs中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平和微小核糖核酸34a(miR-34a)表达。结果:ox-LDL组HCAECs的MDA含量、TNF-α、IL-1β水平、miR-34a表达水平比Con组显著升高,SOD活力比Con组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组比较,川芎嗪显著降低细胞MDA含量、TNF-α、IL-1β水平以及miR-34a表达水平,显著升高SOD活力,差异有统计学意义(P<0.05)。与ox-LDL+anti-miR-NC组比较,ox-LDL+anti-miR-34a组细胞MDA含量以及TNF-α、IL-1β水平显著降低,SOD活力显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。ox-LDL+miR-34a+100 mmol/L组HCAECs的MDA含量以及TNF-α、IL-1β水平显著高于ox-LDL+miR-NC+100 mmol/L组,SOD活力显著低于ox-LDL+miR-NC+100 mmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:川芎嗪通过抑制miR-34a降低ox-LDL诱导的人HCAECs炎症反应和氧化应激。

中药总蒽醌粗提物对低密度脂蛋白氧化的抑制作用

目的 从单味中药大黄、虎杖、何首乌中提取总蒽醌类化合物 ,观察其对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用。方法 以95%乙醇提取并加用碱提取酸沉淀法提取蒽醌类成分 ,观察其对 Cu2 + 诱导的 LDL氧化的抑制作用 ,以硫代巴比妥酸反应物质法(TBARS)测定丙二醛 (MDA)含量 ,计算药物对氧化的抑制率以及抑制率为 50 %时所需药物浓度 (IR5 0 )。结果 总蒽醌类提取物使氧化动力曲线迟滞相延长 ,峰值降低 ,抑制过氧化脂质生成并有浓度依赖性 ,各种药物的 IR5 0 分别为 8.1 8μg/ ml(大黄 )、1 5.58μg/ ml(虎杖 )、3.0 6× 1 0 9μg/ ml(何首乌 )。结论 三种药物蒽醌类提取物均有抑制 LDL氧化作用 ,但抑制作用强度不同。

丹皮酚对脂质过氧化反应及低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用

目的 :观察丹皮酚 (以下简称Pae)对脂质过氧化反应及低密度脂蛋白 (LDL)氧化修饰的抑制作用。方法 :采用含胆固醇高脂膳食喂养大鼠 6周形成高脂血症模型 ,硫代巴比妥酸 (TBA)比色法和酶标多克隆抗体夹心法分别测定丙二醛 (MDA)和氧化低密度脂蛋白 (ox LDL) ,改良沉淀法分离健康人血清LDL。结果 :Pae(30 0 ,15 0mg·kg-1)可明显抑制高脂大鼠血清、主动脉及肝脏脂质过氧化反应 ;Pae(30 0mg .kg-1)显著减少高脂大鼠血浆LDL的氧化修饰 ;Pae(10 0 0 ,2 0 0 ,40 μg .ml-1)对健康人血清LDL的体外氧化反应有极显著抑制效应。结论 :Pae降低高脂血症大鼠MDA及ox LDL水平 ,抑制健康人血清LDL的体外氧化修饰反应。