mCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测CRE和CRPA产酶表型的方法学评价

目的综合评估改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)和碳青霉烯酶抑制剂增强试验对碳青霉烯酶检测和分型能力。方法采用mCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测中山大学肿瘤防治中心2019~2022年临床分离并保存的47株耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)和42株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA)的产酶表型,胶体金法对检测结果进行验证比对,通过卡方检验进行统计分析,并从多角度综合评价。结果mCIM检测CRE和CRPA的阳性率分别为70.2%和35.7%,碳青霉烯酶不确定占比为25.5%和11.9%。增强试验检测47株CRE:44.7%产B类金属β内酰胺酶,17.0%产A类碳青霉烯酶,不产A或B类碳青霉烯酶的菌株占38.3%;增强试验检测42株CRPA:2.4%产B类金属β内酰胺酶,90.4%产A类碳青霉烯酶,同时产A类碳青霉烯酶和B类金属β-内酰胺酶的菌株占4.8%,不产A或B类碳青霉烯酶的菌株占2.4%。两种方法检测CRE差异有统计学意义(χ^(2)=17.803,P=0.01),检测CRPA差异无统计学意义(χ^(2)=4.632,P=0.592)。胶体金法验证:产碳青霉烯酶的阳性符合率为84.6%,产丝氨酸酶的阳性符合率为80%,产金属酶的阳性符合率为100%。结论检测CRE两种方法均适用且差异不大,CRPA更推荐碳青霉烯酶抑制剂增强试验,胶体金值得推广,临床实验室应根据实际条件选择检测方法。

基于改良碳青霉烯灭活试验(mCIM和eCIM)对耐碳青霉烯肠杆菌目(CRE)表型及分布研究

分析对耐碳青霉烯肠杆菌目(CRE)表型及分布进行改良碳青霉烯灭活试验(mCIM和eCIM)研究。从我院的患者中收集了103例,时间跨度为2021年1月至2023年1月。在进行临床细菌分离时,排除了同一患者同一部位的重复菌株,最终筛选出了138株CRE菌株。使用全自动细菌鉴定仪进行细菌分离试验,采用PCR法检测CRE耐药基因,分析了mCIM/eCIM与碳青霉烯酶抑制剂增强试验的结果。结果 我院2021年1月-2023年1月共纳入103例患者,从138株CRE菌株中分离出97株肺炎克雷伯菌(占比70.29%),15株黏质沙雷菌(占比10.87%),以及26株大肠埃希菌(占比18.84%)。这些菌株分布在不同的医学科室,其中重症医学科占比最高(56.52%),其次是神经内科重症病房(21.74%)。在这138株CRE菌株中,检测到101株产KPC-2,7株产KPC-3,23株产NDM-1,5株产NDM-5,以及2株同时产KPC-2和NDM-1。对于产KPC的108株菌株,mCIM/eCIM检测准确率为98.15%,与PCR结果的一致性为高。而对于产NDM的28株菌株和同时产KPC和NDM的2株菌株,mCIM/eCIM也能够准确鉴定,但无法区分同时产KPC和NDM的情况。与PCR结果相比,方法 的一致性Kappa值分别为1.000和0.560。在对108株产KPC的菌株进行碳青霉烯酶抑制剂增强试验时,准确鉴定了105株,敏感性为97.22%,特异性为100%。与PCR比较,一致性Kappa值为0.972。对于28株产NDM菌株,该试验准确鉴定了27株,敏感性为96.43%,特异性为100%。与PCR比较,一致性Kappa值为0.976。因此,mCIM和eCIM对CRE型检测敏感性较高,可快速准确鉴定CRE表型,操作简单,且干扰因素较少,具有较高的临床价值。

改良碳青霉烯灭活试验和碳青霉烯酶抑制剂增强试验鉴定肠杆菌目细菌产碳青霉烯酶型别的临床价值

目的评估改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)/乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(eCIM)、碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测肠杆菌目细菌碳青霉烯酶型别的临床价值。方法收集分离自临床样本的肠杆菌目细菌130株,其中碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)100株。首先采用微量肉汤稀释法对分离菌株进行体外药物敏感性试验,然后分别用mCIM/eCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测肠杆菌目细菌碳青霉烯酶并分型。以聚合酶链反应(PCR)结果为标准,评价mCIM/eCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测肠杆菌目细菌碳青霉烯酶基因型的效能。结果100株CRE对替加环素和黏菌素的敏感率>95%,对头孢他啶-阿维巴坦、阿米卡星和复方磺胺甲噁唑的敏感性分别为13.0%、50.4%、55.7%,对其他临床常用抗菌药物的耐药率均>75%,。与PCR结果比较,碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测丝氨酸碳青霉烯酶的敏感性为98.60%,特异性为100%;检测金属β-内酰胺酶的敏感性为100%,特异性为100%。mCIM/eCIM检测丝氨酸碳青霉烯酶的敏感性为97.22%,特异性为100%;检测金属β-内酰胺酶的敏感性为96.30%,特异性为100%;mCIM/eCIM无法检测同时产2种酶的菌株。结论mCIM/eCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验均都能较好地区分不同类型的碳青霉烯酶,其中碳青霉烯酶抑制剂增强试验操作更加简便,结果更易观察。

imCIM检测B类碳青霉烯酶的效果评价

目的评价抑制剂增强改良碳青霉烯失活法(im CIM)在B类碳青霉烯酶检测中的应用价值,并与EDTA纸片增效试验(EDPT)进行比较分析。方法收集碳青霉烯类抗生素不敏感菌株181株,其中肺炎克雷伯菌44株、大肠埃希菌44株、鲍曼不动杆菌43株、铜绿假单胞菌50株;碳青霉烯类抗生素敏感菌株83株,其中肺炎克雷伯菌25株、大肠埃希菌16株、鲍曼不动杆菌25株、铜绿假单胞菌17株。采用im CIM和EDPT对上述264株菌株进行B类碳青霉烯酶的筛查,以PCR结果作为金标准。应用一致性检验、Wilcoxon符号秩和检验、独立样本Kruskal-Wallis H检验及ROC曲线进行统计学分析。结果 181株碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中144株PCR扩增耐药基因阳性,A、B、D类碳青霉烯酶分别为39株、77株、28株;im CIM检测70株阳性,111株阴性,其中166株与PCR结果一致;EDPT检测72株阳性,109株阴性,其中134株与PCR结果一致。碳青霉烯类抗生素敏感菌株83株,PCR扩增耐药基因、im CIM及EDPT检测结果均为阴性。im CIM敏感性和特异性分别为85.71%(66/77)和97.86%(183/187),与PCR结果一致性Kappa值为0.859;EDPT敏感性和特异性分别为66.23%(51/77)和88.77%(166/187),Kappa值为0.561。im CIM抑菌圈差值(Δdim CIM)与EDPT抑菌圈差值(ΔdEDPT)有差别,差异有统计学意义(Z=-6.941,P<0.05)。采用im CIM检测B类碳青霉烯酶的Δdim CIM水平与A、D类酶Δdim CIM总体分布位置不同,差异有统计学意义(χ2=108.887,P<0.05)。im CIM与EDPT的ROC曲线下面积分别为0.988(95%CI:0.977~0.999)和0.936(95%CI:0.909~0.963)。结论 im CIM是一种准确、高效、便捷的碳青霉烯酶表型筛选方法,敏感性、特异性较高,适合用于流行病学监测。

耐碳青霉烯类抗菌药物革兰阴性杆菌临床分布及耐药基因调查

目的分析甘肃省人民医院2018—2020年碳青霉烯耐药革兰阴性杆菌(CRO)的临床分布、耐药基因携带情况,为医院CRO的防控提供依据。方法采用飞行质谱仪进行细菌鉴定;K-B纸片扩散法和PhoenixTM-100革兰阴性杆菌药敏板进行药敏试验。从临床标本中共分离出CRO菌株60株,用WHONET 5.6软件统计CRO菌株的耐药情况及临床分布。采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)和碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行耐药表型检测,荧光定量PCR进行耐药基因型检测。结果60株CRO菌株经鉴定为肺炎克雷伯菌20株、大肠埃希菌11株、阴沟肠杆菌13株、雷极普罗威登菌5株、弗劳地枸橼酸杆菌2株和铜绿假单胞菌9株;主要来源于重症监护病房(ICU)、神经内科、泌尿科和烧伤科等临床科室。经耐药表型检测检出:A类丝氨酸碳青霉烯酶17株(肺炎克雷伯菌16株、弗劳地枸橼酸杆菌1株),B类金属β-内酰胺酶38株(阴沟肠杆菌12株、大肠埃希菌11株、雷极普罗威登菌5株、铜绿假单胞菌6株、肺炎克雷伯菌4株),4株(铜绿假单胞菌3株和阴沟肠杆菌1株)为阴性;另外1株弗劳地枸橼酸杆菌采用mCIM联合eCIM试验检测为B类金属β-内酰胺酶,而用碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测为混合型(A+B类酶)。经PCR检测检出KPC酶17株、NDM型32株,IMP1型酶6株,KPC+NDM混合基因型1株。结论甘肃省人民医院CRO菌株的表型耐药机制是产A类丝氨酸碳青霉烯酶和B类金属β-内酰胺酶,主要携带KPC、NDM和IMP1基因型。

武警某部医院碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的检测临床碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenemresistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)感染的耐药基因,为治疗和防控提供依据。方法采用回顾性调查方法,收集2017-08至2020-03分离自武警四川总队医院13个科室的32株CRKP,用Microscan.Walk Away96全自动细菌鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合酶抑制剂增强试验判断其产金属β-内酰胺酶和丝氨酸碳青霉烯酶的情况。Gene-Xpert Carba-ⅩⅤⅠR2全自动病原体快速检测系统检测耐药基因。结果药敏结果显示我院CRKP对碳青霉烯类、头孢类、头霉素类、单环类、喹诺酮类、氨基糖苷类等抗菌药物均表现出较高耐药性。32株CRKP mCIM结果30株阳性;酶抑制剂增强试验结果表明,1株肺炎克雷伯菌产A类丝氨酸酶加B类β-内酰胺酶,其余29株产A类丝氨酸酶;GeneXpert检测耐药基因,30株mCIM试验结果阳性的菌株中1株肺炎克雷伯菌产KPC+NDM,其余29株均产KPC,没有产IMP,VIM,OX-48的菌株。结论该院CRKP对常用抗菌药物表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要为KPC型。在没有条件进行基因型分析的基层单位mCIM试验协同酶抑制剂增强试验能够满足临床需要。

两种表型方法检测产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌基因型别的应用价值

目的 评估改良碳青霉烯灭活试验/乙二胺四乙酸(EDTA)改良碳青霉烯灭活试验(mCIM/eCIM)和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌基因型别的临床价值。方法 本研究纳入复旦大学中山医院2020年1-12月耐厄他培南或亚胺培南或美罗培南的190株肠杆菌目细菌,分别用mCIM/eCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测CRE产生的碳青霉烯酶型别,同时使用聚合酶链式反应(PCR)检测结果作为金标准。结果和PCR比较,碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测A类丝氨酸碳青霉烯酶的灵敏度98.16%,特异性为100.00%;检测金属β-内酰胺酶的灵敏度为100.00%,特异性为100.00%。mCIM/eCIM检测A类丝氨酸碳青霉烯酶的灵敏度为95.70%,特异性为100.00%;检测金属β-内酰胺酶的灵敏度93.10%,特异性为100.00%,但eCIM试验无法检测同时产A和B类酶的菌株。结论 碳青霉烯酶抑制剂增强试验和mCIM/eCIM方法检测A类丝氨酸碳青霉烯酶和金属β-内酰胺酶都具有较高的灵敏度和特异性。其中碳青霉烯酶抑制剂增强试验操作性更强,并能区分同时产A和B类碳青霉烯酶的菌株,但测试成本较mCIM/eCIM高。因此不同层级的微生物实验室可以根据自身条件包括成本、人员、场地和设备等客观因素,选择性地常规开展CRE的表型检测。