蛋白激酶C-β抑制剂LY333531对1型糖尿病大鼠肾功能的影响

目的:观察蛋白激酶C(PKC)-β抑制剂LY333531对1型糖尿病大鼠肾功能的保护作用。方法:27只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和LY组,每组各9只。后两组采用一次性尾静脉注射60mg/kg链脲佐菌素(STZ)成功构建1型糖尿病模型。LY组大鼠给予PKC-β抑制剂LY333531(10mg/kg/天)灌胃治疗8周。抽取各组大鼠颈动脉血并留取24h尿液,测量血糖、内生肌酐清除率和24h尿蛋白。之后处死各组大鼠,摘取肾脏称重并计算肾重/体重。统计学分析各组上述指标的差异。结果:与正常对照组比较,糖尿病组和LY组大鼠的体重均明显减轻,而肾重、肾重/体重、血糖及24h尿蛋白均显著升高(P<0.05);LY组大鼠的肾重/体重、内生肌酐清除率及24h尿蛋白水平均低于糖尿病组(P<0.05),两组肾重、体重和血糖差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PKC-β抑制剂LY333531有利于改善1型糖尿病大鼠内生肌酐清除率和减少蛋白尿的产生。

PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞中S期激酶相关蛋白2表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对体外培养的人晶状体上皮细胞(LECs)增生和细胞周期S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达的影响。方法 MTT比色法检测25μmol/L的LY294002处理人LECs细胞株SRA01/04后12h和24h细胞的增生情况;流式细胞仪检测LY294002作用24h后细胞周期的分布情况;Westernblot和real-timePCR法分别测定LY294002处理24h后细胞中Skp2及其mRNA的表达情况。结果 25μmol/L的LY294002作用于SRA01/04细胞0～24h,SRA01/04细胞的增生受抑制,且作用24h时对SRA01/04细胞的抑制作用最明显。LY294002组中处于G1期和S期的细胞占总细胞数的百分率分别为(66.15±2.63)%和(27.34±6.58)%,对照组为(56.73±1.35)%和(37.32±5.54)%,LY294002组细胞Skp2及其mRNA的表达量明显减少。结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增生,使部分细胞停滞于细胞周期的G1期,LY294002抑制人LECs的增生可能与Skp2的表达下调有关。

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002对李斯特菌感染的影响

为检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,L.monocytogenes)在小鼠脑微血管内皮细胞内存活的影响。将不同浓度抑制剂LY294002与细胞共同孵育,MTT法检测不同浓度抑制剂LY294002对细胞活性的影响,然后将L.monocytogenes分别感染细胞,利用菌落计数法计算L.monocytogenes的胞内细菌数量,检测LY294002对L.monocytogenes介导的小鼠生存曲线的影响,利用试剂盒检测抑制剂LY294002对L.monocytogenes介导的LDH和IFN-γ分泌的影响。抑制剂LY294002在5μmol/L、10μmol/L或20μmol/L浓度时不影响细胞活性,LY294002显著抑制了L.monocytogenes的胞内和脏器内细菌数量,提高L.monocytogenes介导的小鼠存活率,分别显著提高和降低L.monocytogenes介导的IFN-γ水平和LDH水平(P<0.05)。本研究表明,LY294002可调控细胞内Lm的存活,为L.monocytogenes引起脑膜炎的致病机制提供科学依据。

抑制剂LY294002调控胞内布鲁氏菌的存活

[目的]检测PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002(LY)对巨噬细胞和小鼠体内羊种布鲁氏菌16M(16M)存活的影响。[方法]将抑制剂LY(20μmol/L)与细胞共同孵育1 h,并将其腹腔注射小鼠(20 mg/kg/day),然后16M感染巨噬细胞和小鼠,细菌菌落计数法计算细胞内和小鼠体内的细菌数量,MTT法检测抑制剂LY对细胞活性的影响,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抑制剂LY对TNF-α分泌的影响。[结果]抑制剂LY在20μmol/L浓度时不影响细胞活性,抑制剂LY显著抑制了布鲁氏菌在巨噬细胞和小鼠体内的存活(P<0.05),抑制剂LY显著提高了布鲁氏菌介导的TNF-α水平(P<0.01)。[结论]研究表明,PI3K/Akt信号通路抑制剂LY可调控巨噬细胞和小鼠体内羊种布鲁氏菌16M的存活,为布鲁氏菌致病机制提供科学依据。

PI3K抑制剂LY294002对弥漫大B细胞性淋巴瘤细胞株化疗增敏作用的研究

目的 研究PI3K抑制剂LY294002对弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞株ly1、ly8、ly10的化疗增敏作用.方法 采用LY294002、阿霉素及两者联合、序贯使用分别作用于ly1、ly8、ly10细胞;采用Western blot法观察LY294002处理后ly1、ly8、ly10细胞中磷酸化AKT/PKB（pAKT）的改变;采用流式细胞术结合Brdu法分析LY294002对细胞增殖和细胞周期分布的影响,采用流式细胞术结合AnnexinV-FITC染色检测各组细胞凋亡率.结果 LY294002可显著降低DLBCL细胞中磷酸化AKT的表达水平;并导致S期细胞比例显著降低（P＜0.05）;LY294002预处理序贯使用阿霉素组中细胞凋亡的发生率比单独使用LY294002、阿霉素或同时联合使用LY294002、阿霉素组均明显提高,在24、48、72 h（ly1）或48、72 h（ly8）或24 h（ly10）差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.结论 PI3K抑制剂LY294002对阿霉素诱导DLBCL细胞凋亡的促进作用提示其可能是DLBCL治疗中潜在的具有较好化疗增敏作用的分子靶向药物.

LY294002联合姜黄素对人肾癌细胞的体外抑制作用

目的研究磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002与姜黄素联合对人肾癌细胞的抑制作用。方法应用CCK-8法检测姜黄素单独或联合LY294002对人肾癌细胞786-O的抑制率;TUNEL及免疫荧光法检测caspase-3,观察姜黄素单独或联合LY294002对786-O细胞凋亡的影响。结果 LY294002联合姜黄素能显著增加姜黄素对786-O细胞的抑制率,同时显著增强姜黄素对细胞凋亡的诱导作用(P<0.05)。结论 PI3K特异性抑制剂LY294002通过促进786-O细胞凋亡提高其对姜黄素的敏感性,抑制PI3K/Akt信号转导通路的活性能够提高姜黄素的肿瘤杀伤作用。

PI3K/AKT及MEK/ERK信号通路抑制剂对结直肠癌血管内皮细胞管道形成的作用

目的探讨PI3K/AKT信号通路抑制剂(LY294002)及MEK/ERK信号通路抑制剂(PD98059)对结直肠癌血管内皮细胞管道形成的影响。方法实验分为对照组和实验组,其中对照组分正常组和二甲基亚砜(DMSO)组(0.1%DMSO),实验组分PI3K/AKT信号通路抑制剂组LY294002及MEK/ERK信号通路抑制剂组PD98059(实验组设4个浓度梯度),比较结直肠癌血管内皮细胞在不同抑制剂浓度(2.5、5、10、20μmol/L)作用下在Matrigel胶上管道形成的情况,6 h后观察并取每个孔上、下、左、右、中5个区域中的图片,测其管道形成的总长度,每组均设3个复孔,数据以均数±标准差表示,采用SPSS 16.0软件进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果对照组中正常组与DMSO组两者管道形成总长度之间差异无统计学意义[(4.16±0.26)mm比(4.17±0.18)mm],而实验组管道形成总长度较对照组都有明显减少(P<0.05)。其中LY294002浓度在2.5、5、10、20μmol/L管道形成的长度分别为(3.08±0.51)、(2.65±0.24)、(2.02±0.18)、(1.08±0.13)mm,而PD98059管道形成的长度分别为(3.39±0.18)、(2.98±0.12)、(2.53±0.18)、(1.88±0.12)mm,随着浓度的增加,管道形成长度逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002与PD98059相比,在相同浓度下,LY294002管道形成长度较PD98059减少(P<0.05)。结论PI3K/AKT信号通路抑制剂及ERK/MEK信号通路抑制剂能够明显抑制结直肠癌血管内皮细胞的管道形成,且随着抑制剂浓度的升高,管道形成能力进一步降低,PI3K/AKT信号通路抑制剂抑制肿瘤血管内皮细胞管道形成的能力比ERK/MEK信号通路抑制剂明显。

LY294002逆转KB/VCR细胞多药耐药的作用及机制

目的探讨蛋白激酶抑制剂LY294002对多药耐药细胞KB/VCR的耐药逆转作用及逆转机制。方法采用MTT法检测LY294002对VCR和ADR的耐药逆转作用,流式细胞仪检测Rh123在KB和KB/VCR细胞内的蓄积,Western blot法检测LY294002对P-gp蛋白表达的影响,DAPI染色检测细胞凋亡。结果 LY294002对化疗药物具有协同增效作用,可以显著逆转KB/VCR的耐药性,能明显减少Rh123的外排,同时降低P-gp的表达。结论LY294002能够逆转KB/VCR细胞的多药耐药性,不仅能够抑制P-gp功能,而且能够降低P-gp蛋白表达,使肿瘤细胞内化疗药物的浓度增加,提高化疗药物的杀伤作用。

河南某钼尾矿中白钨的浮选回收试验

为回收河南某钼尾矿中的白钨,采用预先分级—+0.15 mm粗粒级再磨—1粗1扫脱硫浮选—1粗1扫1精常温钨浮选—1粗3扫5精加温钨浮选流程对该尾矿进行了浮选试验,获得了WO3品位为60.14%、WO3回收率为77.78%的钨精矿。仅粗粒级再磨避免了次生矿泥的产生和钨矿物的过粉碎,加温时加入抑制剂LY使含钙类脉石矿物得到了更好的抑制,这些手段为获得较好的试验指标提供了保障。

羊种布鲁氏杆菌16M对PI3K/Akt信号通路的激活

为了检测巨噬细胞内羊种布鲁氏杆菌16M（16M）对PI3K/Akt信号通路的激活,试验将16M侵染巨噬细胞应用Western-blot技术检测巨噬细胞内p-Akt（S473）和p-Akt（T308）表达变化,利用抑制剂LY294002对PI3K/Akt信号通路进行阻断,用MTT法检测抑制剂LY294002对细胞活性的影响。结果表明：16M在0.5-4 h可激活PI3K/Akt信号通路;抑制剂LY294002可阻断16M对PI3K/Akt信号通路的激活,且具有浓度依赖性;抑制剂LY294002在小于或等于20μmol/L浓度时不影响细胞活性。