乳腺癌患者唾液中转铁蛋白、间-α胰蛋白酶抑制因子重链H1、α2巨球蛋白及锌指同源框蛋白4水平测定及临床意义

目的探讨乳腺癌患者唾液蛋白内转铁蛋白(TF)、间-α胰蛋白酶抑制因子重链H1(ITIH1)、α2巨球蛋白(α2M)及锌指同源框蛋白4(ZFHX4)等4个相关蛋白的水平变化规律。方法收集18例乳腺癌患者和18例健康女性作为研究对象,采集其唾液标本,采用酶联免疫吸附试验检测唾液中TF、ITIH1、α2M及ZFHX4等4个蛋白表达水平。通过STRING和KEGG数据库对上述4种蛋白进行生物信息学分析。结果乳腺癌患者唾液中TF、ZFHX4水平分别为(3.092±0.309)mg/L、(0.546±0.084)μg/L,均高于健康女性的(2.231±0.217)mg/L、(0.207±0.059)μg/L,差异均有统计学意义(t=2.281,P=0.030;t=3.310,P=0.003)。乳腺癌患者唾液中ITIH1、α2M水平分别为(0.162±0.105)μg/L、(2.448±0.218)mg/L,均低于健康女性的(1.709±0.384)μg/L、(3.568±0.258)mg/L,差异均有统计学意义(t=3.891,P=0.001;t=3.318,P=0.003)。蛋白相互作用分析发现TF和α2M具有相互作用,TF是一个核心蛋白,还与多个蛋白具有相互作用。TF存在于缺氧诱导因子-1信号通路上,该通路在细胞生长发育和生理应激以及肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。结论唾液中TF、ITIH1、α2M及ZFHX4等4个蛋白的水平变化可能与乳腺癌的发生发展密切相关,为乳腺癌的临床诊断提供一种新的方式。

信号转导及转录激活因子3、垂体同源框1及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义

目的探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)、垂体同源框1(PITX1)及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(Gli-1)在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义。方法选取89例皮肤恶性黑色素瘤患者的肿瘤组织及癌旁组织。对患者进行随访,根据预后情况分为预后良好及预后不良。采用免疫组化法检测STAT3、PITX1、Gli-1蛋白表达情况,分析皮肤恶性黑色素瘤患者预后的影响因素。结果肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织,PITX1阳性表达率明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。预后不良患者肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均高于预后良好患者,PITX1阳性表达率低于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。肿瘤直径≥5 cm、STAT3阳性、PITX1阴性、Gli-1阳性均为皮肤恶性黑色素瘤患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。结论STAT3、PITX1及Gli-l蛋白在皮肤恶性黑色素瘤中存在异常表达,通过检测其水平能为临床治疗及预后提供新的思路与依据。

ZHX3基因沉默对BMSCs中成骨相关因子表达的影响

目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对照组)。荧光显微镜下测定细胞转染率并采用免疫印迹技术鉴定转染是否成功;采用免疫荧光化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时smad3、smad4、RUNX2表达情况。结果(1)复苏培养的细胞具有BMSCs表型。(2)转染后,ZHX3沉默组和载体对照组均表达绿色荧光,空白对照组不表达荧光,且沉默组ZHX3基因表达显著低于载体对照组。(3)免疫荧光结果显示,smad3、smad4的阳性表达位于细胞核和细胞质,RUNX2的阳性表达主要定位于细胞核。3组细胞均可见阳性表达细胞,且空白对照组与载体对照组之间荧光强度未见显著差异,但ZHX3基因沉默组的荧光强度显著低于2个对照组。(4)免疫印迹检测smad3、smad4、RUNX2的条带于空白对照组和载体对照组中无显著差异,但均显著高于ZHX3沉默组(P<0.05)。结论ZHX3基因沉默后BMSCs体外成骨能力延迟,可能通过下调smad3、smad4、RUNX2来发挥作用。

抑制EZH2表达对宫颈癌细胞凋亡的影响及机制

目的观察抑制人类Zest同源增强子(EZH2)表达对宫颈癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法选择人宫颈癌细胞系Siha和C33A细胞,采用MTT法确定EZH2抑制剂3-去氮腺嘌呤(DZNep)在两种细胞中的半数抑制浓度(IC_(50))。将两种细胞分为DMSO组、1/2 IC_(50)组和IC_(50)组,分别以DZNep终浓度0、3、6μmol/L处理Siha细胞各组,以0、2、4μmol/L处理C33A细胞各组。培养48 h后收集各组细胞,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,采用Western blotting法检测EZH2蛋白、抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-X基因长片段(Bcl-xL)、促凋亡蛋白Bcl-2家族细胞凋亡相互作用因子(Bim)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果在Siha、C33A细胞中,1/2 IC_(50)组、IC_(50)组早期凋亡率均高于DMSO组,IC_(50)组早期凋亡率均高于1/2 IC_(50)组(P均<0. 05)。IC_(50)组EZH2蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05); IC_(50)组Bcl-xL蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组,Bim和Caspase-3蛋白表达均高于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05)。结论利用DZNep抑制宫颈癌细胞EZH2的表达后,能够诱导宫颈癌细胞早期凋亡,其机制可能与下调Bcl-xL蛋白表达并上调Bim和Caspase-3蛋白表达有关。

PTEN在癌症中的研究进展

第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)是维持正常细胞生存所必需的肿瘤抑制因子,具有磷酸酯酶活性。PTEN通过调节酪氨酸激酶受体(RTK)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB又称Akt)通路调控细胞增殖、细胞凋亡、细胞迁移和侵袭等过程,进而抑制肿瘤的发生发展。PTEN蛋白具有区域特异性功能,可在细胞核和细胞质之间转移。PTEN编码的蛋白的活性受到许多非基因机制的调控,如转录调控、转录后调控、翻译后调控等。人类多种癌症中发现,PTEN的失调可导致其抑癌功能减弱,对于癌症研究有重要意义。PTEN作为PI3K/Akt通路的负调控因子,其缺失使PI3K/Akt通路过度活化,促进肿瘤的发生发展。

AFP、GPC3、ZHX2及ZBTB20基因在小鼠肝脏再生过程中的表达及其意义

目的探讨小鼠肝脏再生过程中甲胎蛋白(AFP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖￣3(GPC3)、锌指和同源框2(ZHX2)、锌指蛋白ZBTB20基因的表达及其意义。方法 30只C57/BL6小鼠,按随机数字表法分成肝脏再生模型组(肝再生组)和肝微量切除组(肝微切组),各15只。肝再生组切除肝组织约占肝脏质量的70%;肝微切组切除肝组织约占肝脏质量的5%。分别取两组小鼠肝切除时(0 h)及切除术后2、4、24、48及72 h的肝脏组织,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR),检测不同时间点甲胎蛋白(AFP)信使核糖核酸(mRNA)表达;同时应用RQ-PCR法检测24、48及72 h的肝脏组织GPC3、ZHX2、ZBTB20 mRNA表达。采用t检验比较各组AFP、GPC3、ZHX2、ZBTB20 mRNA表达变化。结果肝再生组AFP mRNA术后2、4、24、48及72 h分别为0 h正常肝组织基因表达的(70±20)%、(80±20)%、(90±10)%、(240±40)%、(870±120)%。72 h的AFP基因表达变化与24、48 h相比较,差异均有统计学意义(t=11.2、8.6,P=0.001、0.001),术后24 h AFP表达开始上升;术后24、48、72 h的GPC3mRNA分别为0 h正常肝组织基因表达的(50±10)%、(120±20)%、(190±50)%。72 h的GPC3基因表达变化与24 h相比较,差异有统计学意义(t=4.8,P=0.01),术后48 h GPC3表达开始上升;ZHX2、ZBTB20mRNA在术后24、48 h分别为0 h正常肝组织基因表达的(50±10)%,(60±10)%和(70±20)%,(50±10)%。72 h的ZHX2升高(120±30)%,与24、48 h相比,差异有统计学意义(t=3.8、3.3,P=0.04、0.04)。72 h的ZBTB20升高(140±30)%,与24、48 h相比,差异有统计学意义(t=3.4、4.9,P=0.04、0.01)。结论小鼠肝大部切除术后肝脏再生启动,AFP、GPC3基因可能在肝脏再生中参与了细胞增殖的主动调控,转录抑制因子ZHX2、ZBTB20 mRNA在肝脏再生中表达下调,对AFP、GPC3启动子的转录抑制作用下降,从而促进肝组织再生,对肝脏再生具有一定的意义。