上皮细胞转化序列2通过调控p33生长抑制因子1表达影响食管鳞状细胞癌细胞的体外转移活性

目的探讨上皮细胞转化序列2(ECT2)与p33生长抑制因子1(p33ING1)的表达水平对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞转移活性的影响。方法采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测食管鳞癌组织和癌旁组织中ECT2和p33ING1的表达情况。将人食管鳞癌细胞系KYSE140细胞分为4组:空白组、阴性对照组(pcDNA 3.1 NC)组、过表达组(pcDNA 3.1 ECT2)和抑制表达组(si ECT2)。采用MTT法和细胞集落形成实验研究细胞的增殖和生长能力,Transwell实验和划痕实验研究细胞的侵袭和迁移能力,并用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting检测ECT2对p33ING1蛋白的影响。结果在食管鳞癌组织中ECT2表达增加,p33ING1表达降低。过表达ECT2能够显著增加KYSE140细胞的生长、集落形成、迁移以及侵袭能力,并能降低KYSE140细胞的凋亡率和p33ING1的表达;此外,抑制ECT2表达后能够逆转上述变化。结论ECT2高表达能够促进食管鳞癌KYSE140细胞的生长、转移,并抑制其凋亡,其机制可能与ECT2能够抑制p33ING1表达相关。

溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织微小RNA-155和细胞因子信号转导抑制因子1表达与疾病严重程度的相关性

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜组织微小RNA-155(miR-155)、细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)表达水平与疾病严重程度的关系。方法选取2021年9月至2023年6月河北北方学院附属第二医院收治的UC患者130例。按照改良Mayo评分系统将患者分为活动期组(n=85)和缓解期组(n=45);根据改良Truelove和Witts分型标准将UC活动期患者分为轻度组(n=35)、中度组(n=30)和重度组(n=20)。同时选取健康体检行结肠镜检查或结肠单发息肉切除术后复查结肠镜结果正常并排除其他疾病者共90例作为对照组。收集UC患者病变显著的结肠段黏膜组织和对照组距肛门20 cm处正常结肠黏膜组织。采用荧光定量PCR法测定组织中miR-155、SOCS1 mRNA表达水平,免疫组织化学法测定组织中SOCS1蛋白表达情况,分析UC患者结肠黏膜组织miR-155、SOCS1 mRNA和改良Mayo评分的相关性,评价miR-155、SOCS1 mRNA表达水平对UC活动期患者发生重度病情的预测价值。结果与对照组和缓解期组比较,活动期组结肠黏膜组织miR-155表达水平显著升高,SOCS1 mRNA表达水平、SOCS1蛋白阳性表达率显著降低(P均<0.001)。轻、中、重度组UC活动期患者结肠黏膜组织miR-155表达水平和改良Mayo评分依次升高,SOCS1 mRNA表达水平依次降低(P均<0.001)。UC患者结肠黏膜组织miR-155与改良Mayo评分呈正相关,SOCS1 mRNA与改良Mayo评分呈负相关(P均<0.001)。miR-155高表达(OR=2.762,95%CI=1.284~5.944,P=0.009)、SOCS1 mRNA低表达(OR=2.617,95%CI=1.302~5.258,P=0.007)、改良Mayo评分≥12分(OR=3.232,95%CI=1.450~7.204,P=0.004)是影响UC活动期患者发生重度病情的危险因素。miR-155和SOCS1 mRNA联合预测UC活动期患者发生重度病情的曲线下面积为0.920。结论miR-155、SOCS1 mRNA的表达水平与UC活动期患者的病情严重程度存在相关性,两者联合对UC活动期患者发生重度病情的预测效能较高。

首发精神分裂症患者血清肥胖抑制素、摄食抑制因子1水平及临床意义

目的:探究首发精神分裂症患者血清肥胖抑制素(obestatin)、摄食抑制因子1(nesfatin-1)水平与认知功能的关系。方法:选取2018年6月至2021年6月湖州市第三人民医院收治的98例经确诊的首发精神分裂症患者作为患者组,另选取同期社会健康志愿者102例为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测首发精神分裂症患者血清中obestatin、nesfatin-1水平。采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评估患者的临床症状,选取认知功能成套测验-共识版(MCCB)中的连线测验(TMT)、简易视觉空间记忆测验-修订版(BVMT-R)、霍普金斯词汇学习测验-修订版(HVLT-R)、精神分裂症符号编码认知评估(BACS SC)、神经心理学评估(NAB)、持续操作测验-相同配对(CPT-IP)这六个项目评估患者的认知功能。结果:患者组血清nesfatin-1水平以及TMT评分明显高于对照组,obestatin水平、BVMT-R、HVLT-R、BACS SC、NAB、CPT-IP评分显著低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果表明,首发精神分裂症患者血清中nesfatin-1表达与PANSS总分呈显著正相关(r=0.486,P<0.05),obestatin表达与PANSS总分呈显著负相关(r=-0.422,P<0.05);患者血清中nesfatin-1水平与HVLT-R、NAB评分呈负相关关系(r=-0.501、-0.545,P<0.05),obestatin水平与HVLT-R、NAB评分呈正相关关系(r=0.435、0.491,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,NAB评分(OR=1.541,95%CI=1.131~2.100,P=0.006)、obestatin(OR=1.713,95%CI=1.247~2.353,P=0.001)和nesfatin-1水平(OR=1.647,95%CI=1.213~2.236,P=0.001)是首发精神分裂症发生的影响因素。结论:首发精神分裂症患者血清中obestatin表达水平显著降低,nesfatin-1表达水平显著升高,其与患者的认知功能密切相关。

槲皮素抑制小鼠血吸虫病肝组织即早基因和基质金属蛋白酶组织抑制因子1的表达

分别运用槲皮素及吡喹酮治疗小鼠日本血吸虫肝纤维化。槲皮素治疗后小鼠肝纤维化程度减轻,肝组织中即早基因c-fos与c-jun及基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量均明显低于感染对照组;与吡喹酮组相比,c-junmRNA、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显降低,而c-fosmRNA、TIMP1含量无显著改变,提示其远期抗血吸虫肝纤维化效果优于吡喹酮。

骨关节炎时内源性细胞因子及基质金属蛋白酶抑制因子1对关节软骨的影响

背景:研究发现,细胞因子通过影响关节软骨基质的分解代谢和合成代谢的平衡来参与骨关节炎的形成,其中白细胞介素1β、基质金属蛋白酶抑制因子1在其中起重要作用。目的:观察内源性细胞因子白细胞介素1β及基质金属蛋白酶抑制因子1与骨关节炎关节软骨退变的关系。方法:纳入2006-06/2009-09于哈尔滨医科大学附属第五医院就诊的原发性骨关节炎患者37例,在患者行关节镜检时抽取关节液及分离平滑光亮的滑膜组织。另取10例正常关节液标本及平滑光亮的滑膜组织标本作为对照。结果与结论:ELISA法检测结果显示骨关节炎患者关节液和滑膜组织中白细胞介素1β、基质金属蛋白酶抑制因子1水平均显著高于正常水平,且患者骨关节炎越严重,关节液和滑膜组织中白细胞介素1β、基质金属蛋白酶抑制因子1的水平越高。说明关节液中白细胞介素1β、基质金属蛋白酶抑制因子1水平与骨关节炎、关节软骨退变有关。

巨噬细胞抑制因子1在非小细胞肺癌诊断及靶向治疗疗效预测中的临床价值

目的探讨巨噬细胞抑制因子1(MIC-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)诊断及靶向治疗疗效预测中的应用价值。方法选取2013年1月-2015年1月该院收治的Ⅲb期、Ⅳ期NSCLC患者94例、肺部良性疾病78例及体检健康者70例分别作为NSCLC组、良性组及对照组,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验检测MIC-1水平。NSCLC组均接受靶向治疗,单因素和多因素Cox回归分析NSCLC组中位生存时间的影响因素。结果 NSCLC组血清MIC-1水平高于良性组和对照组,且良性组高于对照组(P<0.05);NSCLC组不同TNM分期的MIC-1水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同年龄、性别、靶向治疗方案及表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NSCLC组均接受靶向治疗,治疗3和5个月MIC-1水平均较治疗前和治疗1个月降低(P<0.05);治疗前,治疗1、3及5个月组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗5个月时,治疗有效率32.98%;Kaplan-Meier法估计生存率,NSCLC组中位生存时间(MST)为17.9个月。以1 390 pg/ml为临界值,将其分为MIC-1≤1 390 pg/ml组(59例)和MIC-1>1 390 pg/ml组(35例),两组3年生存率分别为33.90%和14.29%(P<0.05)。Cox回归分析显示,TNM分期、EGFR基因突变及MIC-1水平是影响NSCLC组MST的危险因素。结论血清MIC-1水平与Ⅲb期、Ⅳ期NSCLC组TNM分期和靶向治疗效果有关,可用于预测患者预后。

转化生长因子β1和纤溶酶原激活物抑制因子1促进创伤性深静脉血栓形成的实验研究

目的研究深静脉血栓(DVT)大鼠模型股静脉内皮组织中转化生长因子(TGF)-β1和纤溶酶原激活物抑制因子1(Serpine1)的表达变化,及在血栓形成中的作用。方法将60只SD大鼠随机分为对照组(A组,10只)和实验组(50只)。实验组采用股静脉钳夹联合下肢石膏制动构建大鼠DVT模型。于不同时间点(创伤后2.5 h和25 h)解剖股静脉观察血栓发生率、严重程度,并将实验组分为B组(血栓形成前组,创伤后2.5 h)、C组(血栓形成组,创伤后25 h)和D组(血栓不形成组,创伤后25 h)。分离股静脉内皮组织,提取总RNA,采用Genechip Rat Genome 230 2.0基因芯片筛查差异表达的基因,进而采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)验证这些基因的表达变化,并针对上述基因进行Pathway等生物信息学分析。结果基因芯片分析及实时PCR结果均发现创伤后2.5 h大鼠股静脉内皮组织中TGF-β1和Serpine1表达均上调,且B组高于A组和D组(P<0.05);血栓形成时,两者亦显著上调,且C组高于A、B、D组(P<0.05),而A、D组间的差异无统计学意义(P>0.05)。Pathway分析提示TGF-β1是Serpine1的上游调控基因,可诱导Serpine1的过度表达,抑制纤溶,促进血栓形成。结论局部静脉内皮组织中TGF-β1和Serpine1表达水平上调可能在创伤性DVT形成中发挥重要作用。

肺癌肿瘤抑制因子1和程序性死亡配体1在宫颈脱落细胞中的表达及意义

目的探讨检测不同级别宫颈脱落细胞中肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC-1)及程序性死亡配体1(PDL1)的表达在筛查宫颈癌前病变及宫颈癌中的价值,分析这两个指标的表达与高危HPV DNA负荷量的关系。方法收集宫颈脱落细胞129例,细胞石蜡包埋,采用免疫细胞化学法检测TSLC-1、PD-L1的表达,采用杂交捕获法(HC-Ⅱ)检测高危HPV DNA病毒负荷量,并分析三者之间的关系。结果 (1)TSLC-1在正常宫颈细胞(NILM)、不典型鳞状上皮细胞(ASC)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、宫颈鳞癌(SCC)和腺癌中的阳性表达率分别为92.00%(23/25)、72.72%(24/33)、85.19%(23/27)、26.47%(9/34)、0(0/6)、0(0/4),各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);PD-L1蛋白在NILM、ASC、LSIL、HSIL、SCC和腺癌中阳性表达率分别为20.00%(5/25)、51.51%(17/33)、70.37%(19/27)、100.00%(34/34)、100.00%(6/6)、50.00%(2/4),各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);TSLC-1表达强度与病变级别呈负相关(r=-0.55,P<0.05),而PD-L1的表达强度与宫颈病变的程度呈正相关(r=0.63,P<0.05);(2)TSLC-1的表达与高危HPV DNA病毒负荷量呈负相关(r=-0.463,P=0.000),而PD-L1的表达与高危HPV DNA病毒负荷量呈正相关(r=0.499,P=0.000)。结论 TSLC-1异常可能是宫颈癌进展的早期事件,TSLC-1和PD-L1均与高危HPV感染有关,TSLC-1和PD-L1可作为宫颈癌及癌前病变的筛查指标。

基质金属蛋白酶1/组织金属蛋白酶抑制因子1在常染色体显性遗传性多囊肾组织中的表达

目的:探讨基质金属蛋白酶1(MMP1)/组织金属蛋白酶抑制因子(TIMP1)在正常肾脏、常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)肾脏以及肾移植平均(2.5±1.2)年后切除的ADPKD肾组织中的表达差异。方法:用基因表达谱芯片筛选正常肾脏、ADPKD肾脏及肾脏移植后ADPKD肾脏的差异表达基因;以RT-PCR法验证其中差异表达的MMP1/TIMP1。结果:基因芯片筛选发现在正常肾组织与ADPKD肾组织中存在463条差异表达基因,肾移植后ADPKD肾组织对比ADPKD肾组织存在130条差异表达基因。筛选结果表明ADPKD以及肾移植后ADPKD肾脏MMP1/TIMP1表达较正常肾组织明显上调(P<0.05),而前两者间无显著差异。RT-PCR法证实MMP1/TIMP1在ADPKD肾脏以及肾移植后ADPKD肾组织中的表达均明显上调,明显高于正常肾脏组织(P<0.05),而前两者间无显著差异。结论:ADPKD的病理改变可能与MMPs/TIMPs基因表达失衡有关,MMPs抑制剂可能会对其有一定的治疗作用。

赤芍总苷对高血压大鼠血管重构基质金属蛋白酶9、金属蛋白酶组织抑制因子1和血管壁氧化应激的干预作用

目的探讨赤芍总苷（TPG）对自发性高血压大鼠（SHR）血管重构基质金属蛋白酶9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP-1）和血管壁氧化应激的干预作用。方法 30只8周龄雄性SHR大鼠随机分为3组：低剂量TPG组（低剂量组,n=10）、高剂量TPG组（高剂量组,n=10）、对照组（n=10）;另外以Wistar大鼠作为空白组（n=8）。低剂量组、高剂量组分别以100、200 mg/（kg·d）的TPG灌胃,对照组、空白组以2 mL生理盐水灌胃。8周后,酶联免疫吸附测定法测定血清MMP-9、TIMP-1水平;活性氧（ROS）荧光探针检测胸主动脉壁细胞氧化应激水平;免疫组织化学染色检测主动脉MMP-9、TIMP-1蛋白表达。结果与空白组比较,对照组MMP-9、TIMP-1血清水平及血管壁MMP-9、TIMP-1蛋白表达均明显升高（P〈0.05）。TPG治疗后,MMP-9有所下降,高剂量组与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;但TIMP-1在低剂量组、高剂量组、对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。对照组胸主动脉ROS水平明显高于空白组,而低剂量组、高剂量组ROS水平较对照组下降。结论高血压血管重构存在血管氧化应激和MMP-9水平升高;TPG能够抑制动脉氧化应激和MMP-9水平,改善高血压血管重构,可作为高血压治疗的辅助药物。

分化抑制因子1对鼻咽癌细胞增殖的影响及其途径

目的探讨分化抑制因子1(Id1)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法体外培养人鼻咽癌细胞NP69、CNE1。合成Id1小分子干扰RNA(siRNA),构建Id1表达载体并分别转染鼻咽癌细胞NP69、CNE1。收集Id1siRNA及对照质粒Scramble转染72h的NP69细胞(分别命名为NP69si-Id1、NP69-NC),pcDNA3.1-Id1及对照pcDNA3.1转染48h的CNE1细胞(分别命名为CNE1-Id1、CNE1-Vector),采用RT-PCR及Western blotting检测Id1的表达情况。采用MTT法比较顺铂(DDP)对NP69si-Id1、NP69-NC和CNE1-Id1、CNE1-Vector增殖的影响。采用CalcuSyn软件计算各组细胞对DDP的IC50值。将1μg/ml DDP与鼻咽癌细胞共同孵育24h后,采用Western blo ing检测凋亡蛋白Caspase-3、Bax、Bad的表达及蛋白激酶B(Akt)Thr308和Ser473的磷酸化情况。结果与NP69-NC比较,NP69si-Id1的Id1 mRNA和蛋白水平明显降低;与CNE1-Vector比较,CNE1-Id1的Id1 mRNA及蛋白水平明显升高。NP69si-Id1细胞对DDP的IC50值(0.207±0.008μg/ml)明显低于NP69-NC(0.405±0.009μg/ml,P<0.05),CNE1-Id1细胞对DDP的IC50值(0.671±0.012μg/ml)明显高于CNE1-Vector(0.445±0.008/ml,P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与NP69-NC比较,NP69si-Id1的Caspase-3断裂带增多,Akt Thr308和Ser473磷酸化减少;与CNE1-Vector比较,CNE1-Id1的Caspase-3断裂带减少,Akt Thr308和Ser473磷酸化增加。结论 Id1可促进鼻咽癌细胞的生长,抵抗DDP诱导的细胞凋亡,其机制可能与增加Akt磷酸化有关。

髓系白血病细胞中细胞因子信号转导抑制因子1基因启动子去甲基化对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨髓系白血病(ML)细胞中细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)基因启动子去甲基化对细胞增殖、凋亡的影响。方法收集78例ML患者的骨髓标本(实验组)以及人ML细胞系U937、HL-60、K562为研究对象,另外收集50例健康捐献者的骨髓标本作为对照组。甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测ML患者骨髓标本中SOCS-1基因启动子甲基化状态,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ML患者骨髓标本以及人ML细胞系中SOCS-1 mRNA表达;Western blot检测ML患者骨髓标本以及人ML细胞系中SOCS-1蛋白表达。用0、0.8、1.6、3.2μmol/L地西他滨(DCA)分别处理U937细胞,并分别命名为空白组、DCA-L组(DCA低剂量)、DCA-M组(DCA中剂量)、DCA-H组(DCA高剂量)。MS-PCR检测各组细胞中SOCS-1基因启动子甲基化状态;qRT-PCR检测各组细胞中SOCS-1 mRNA表达;Western blot检测各组细胞中SOCS-1蛋白表达;CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果SOCS-1在ML患者中呈高甲基化状态,SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白在ML患者中的表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);人ML细胞系U937、HL-60、K562中SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白表达低于人骨髓基质细胞HS-5,差异有统计学意义(P<0.05),且U937细胞中SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白表达水平最低,因此,以U937细胞为研究对象进行后续实验。与空白组比较,DCA-L组、DCA-M组、DCA-H组中SOCS-1甲基化水平、450 nm处光密度值(OD_(450 nm))(24、48、72 h)降低,SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白表达水平、细胞凋亡率升高(P<0.05),且随着DCA浓度的升高,上述指标的相应趋势越明显。结论SOCS-1去甲基化可抑制ML细胞增殖、促进细胞凋亡。

转移抑制因子1在结肠癌中的表达缺失及其与临床病理的联系

目的:探讨转移抑制因子1(metastasis suppressor 1,MTSS1)在结肠癌患者组织中的表达情况及其临床意义。方法:应用组织芯片和免疫组织化学技术检测MTSS1在226例结肠癌患者组织中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果:在226例结肠癌患者组织中MTSS1蛋白的阴性表达率为12.8%;MTSS1表达缺失与患者性别、年龄、肿瘤浸润深度、淋巴结癌转移之间差异均无统计学意义(P>0.05),而与肿瘤分化程度、Dukes分期之间差异有统计学意义(P<0.01),并且MTSS1表达的缺失与肿瘤分化程度之间呈负相关(P<0.01,r=-0.248),与肿瘤Dukes分期呈正相关(P<0.05,r=0.137)。二元Logistic回归法显示肿瘤分化程度是影响MTSS1表达的最显著因素(P<0.05)。结论:MTSS1在结肠癌患者组织中的表达缺失与肿瘤的分化程度、分期密切相关,有望成为判断结肠癌预后的新标志。

分化抑制因子1和3通过Wnt/β联蛋白和Shh通路共同调节结直肠癌细胞的干性

目的探讨分化抑制因子3(Id3)协同Id1对结直肠癌细胞干性的影响,并阐明其可能的机制。方法应用慢病毒感染系统Id1短发夹RNA(shRNA)质粒构建Id1单基因敲减(sh-Id1)、sh-Id3和双基因敲减(sh-Id1Id3)的肠癌HCT116细胞株,荧光显微镜下观察荧光强度,实时荧光定量PCR和Western印迹法检测敲减效果。实验分为4组:HCT116空载质粒对照组(简称对照组)、sh-Id1组、sh-Id3组和Sh-Id1Id3组。实时无标记细胞检测技术(RTCA)检测细胞增殖信号,克隆形成实验检测细胞克隆形成数量和直径,流式细胞术AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡,体外无血清悬浮培养法检测细胞成球的数量和大小,流式细胞术检测基因敲减的HCT116细胞CD24和CD133表达;Western印迹法检测基因敲减的HCT116细胞及过表达c-myc后CD24、CD133、EpCAM、Oct4、EZH2、Lgr5和β联蛋白表达水平。结果荧光显微镜下可见对照组、sh-Id1组、sh-Id3组和Sh-Id1Id3组细胞绿荧光率均>90%;实时荧光定量PCR和Western印迹结果显示,与对照组相比,sh-Id1组Id1表达降低(均P<0.01),sh-Id3组Id3表达降低(均P<0.01),sh-Id1Id3组的Id1和Id3表达均降低(均P<0.01),说明sh-Id1,sh-Id3和sh-Id1Id3的HCT116细胞株构建成功。RTCA结果显示,与对照组相比,sh-Id1,sh-Id3和sh-Id1Id3组细胞增殖信号比对照组显著降低(P<0.05)。克隆形成实验结果显示,sh-Id1,sh-Id3和sh-Id1Id3组克隆形成的数量及大小均比对照组显著降低(P<0.05)。流式细胞术检测细胞凋亡结果显示,sh-Id1,sh-Id3和sh-Id1Id3组细胞凋亡显著高于对照组(P<0.05);无血清悬浮培养实验结果显示,sh-Id1,sh-Id3和sh-Id1Id3组细胞球性形成率均比对照组显著降低(P<0.05)。流式细胞术结果显示,与对照组相比,sh-Id1,sh-Id3和sh-Id1Id3组中CD133+和CD24+细胞比例均显著降低(P<0.05),且上述结果中,sh-Id1Id3组与sh-Id1和Sh-Id3组相比显著降低(P<0.05)。Western印迹结果显示,与对照组相比,sh-Id1,sh-Id3和sh-Id1Id3组CD24、CD133(CD133/2亚型)、EpCAM、Oct4、EZH2、β联蛋白、Lgr5蛋白表达均显著性下调(P<0.05)。sh-Id1、sh-Id3和sh-Id1Id3组中Wnt通路的下游分子c-myc、周期蛋白D1和凋亡抑制因子蛋白水平均明显下降(P<0.05),同时Shh通路关键分子GLI1,GLI2和Shh蛋白水平明显下调(P<0.05),兔抗人Hedgehes(PTCH)2、融合抑制剂(SUFU)显著升高(P<0.05)。实验过表达c-myc后,sh-Id1,sh-Id3和sh-Id1Id3降低的干性标志物CD133,Oct4,EZH2,EpCAM和Lgr5蛋白表达均重新上调(P<0.05)。结论Id3和Id1通过Wnt/β联蛋白、Shh通路共同调控直肠癌细胞的干性相关蛋白的表达。

腺苷三磷酸合酶抑制因子1在女性生殖系统正常及病变组织中的表达

目的了解腺苷三磷酸（ATP）合酶抑制因子1（IF1）在女性生殖系统正常及病变组织中的表达,为进一步探索其生理功能及治疗女性生殖系统疾病新方法提供依据。方法以近2年内在我院手术切除的女性生殖系统正常及病变组织为研究对象,组织取自25~69岁患者,包括正常子宫内膜38例、异位症在位及异位内膜各33例、子宫内膜腺癌30例、正常子宫肌壁24例、子宫肌瘤30例、正常宫颈18例、宫颈鳞癌30例、正常输卵管11例、输卵管腺癌19例、正常卵巢15例、卵巢腺癌21例、绒毛及蜕膜各30例。采用免疫组化检测IF1在各样本中的表达,采用Western blot和RT-PCR法,检测IF1及其mRNA在正常子宫内膜、异位症在位及异位内膜中的表达。结果 IF1在子宫内膜腺癌（P〈0.01）、宫颈鳞癌（P〈0.01）、输卵管腺癌（P〈0.01）、卵巢腺癌（P〈0.01）组织表达均较对应正常组织显著增强,但在子宫肌瘤与正常子宫肌壁、绒毛与蜕膜间未见显著差异;在正常子宫内膜组织中,IF1在分泌期表达较增殖期显著减少（P〈0.01）。此外,IF1在异位症异位内膜表达较异位症在位内膜（P〈0.05）及正常内膜（P〈0.01）均显著增高,但异位症在位内膜与正常内膜间无显著差异。RT-PCR结果显示,IF1 mRNA表达在正常内膜、异位症在位内膜、异位症异位内膜表达均无显著差异。结论 IF1在女性生殖系统正常及非恶性病变组织中均有不同程度阳性表达,但在恶性肿瘤组织中表达异常增高,该结果提示IF1可作为女性生殖系统恶性肿瘤标记物,有望成为女性生殖系统恶性肿瘤新的治疗靶点。

分化抑制因子1对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的检测分化抑制因子1(Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响,探讨其在结肠癌增殖中的作用。方法 HT-29转染Id1表达质粒,RT-PCR方法和Western印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况;合成Id-1干扰序列转染HT-29细胞后,RT-PCR及Western印迹检测HT-29细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况,采用MTT法检测各组细胞增殖情况。结果 Id1表达质粒空白组、对照组(空载体组)、过表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.002 99±0.000 687、0.003 49±0.001 34、0.031 3±0.006 05(P<0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.132±0.035 1、0.131±0.053 0、0.245±0.032 6(P<0.01),MTT实验显示相对对照组,过表达组增殖明显快(P<0.01)。Id-1干扰空白组、对照组(空载体组)、抑表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.006 16±0.000 829、0.006 26±0.000 447、0.002 3±0.000 308(P<0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.450±0.039 3、0.464±0.023 1、0.231±0.027 3(P<0.01)。MTT实验显示相对对照组,抑表达组增殖明显减慢(P<0.01)。Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达,提高细胞的生长,Id1抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达,减缓细胞的生长。结论在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1通过Id1↑→VEGF↑途径来影响结肠癌细胞增殖,在肿瘤血管生成中发挥重要作用。Id1有望成为结肠癌治疗的一个新靶点。

罗格列酮对2型糖尿病高血压患者血清基质金属蛋白酶2及其组织抑制因子1的影响

目的观察2型糖尿病合并原发性高血压(DMEH)患者血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其组织抑制因子1(TIMP-1)的水平及罗格列酮(RGZ)治疗后的变化。方法40例DMEH患者随机分成两组:⑴DMEH非RGZ治疗组20例(男10例,女10例);(2)DMEHRGZ治疗组20例(男8例,女12例)。采用酶联免疫吸附法测定MMP-2、TIMP-1及实验室相关指标,观察RGZ治疗前后MMP-2、TIMP-1水平变化及与非RGZ治疗组之间变化的差别。结果应用RGZ治疗组治疗16周后的血清MMP-2、TIMP-1水平分别为(37.9±3.9)μg/L和(410.0±80.9)μg/L,MMP-2水平较治疗前(27.5±4.3)明显升高(P<0.05);而TIMP-1水平较治疗前(468.1±100.6)明显降低(P<0.05)。结论RGZ治疗除能改善血糖及血压外,可升高MMP-2和降低TIMP-1水平。

Bcl2转录抑制因子1、E-钙黏蛋白在宫颈鳞状细胞癌不同区域的表达及两者与P16INK4a表达的关系

目的检测宫颈鳞状细胞癌肿瘤出芽区及肿瘤中央区失巢凋亡因子Bcl2转录抑制因子1(Bit1)、上皮-间质转化(EMT)标志物E-钙黏蛋白及P16INK4a的表达情况,探讨Bit1、E-钙黏蛋白在宫颈癌获得高侵袭力过程中的意义及二者与P16INK4a表达的关系。方法收集甘肃省肿瘤医院病理科2014-2018年宫颈鳞状细胞癌石蜡包埋标本77例。采用免疫组织化学法检测宫颈鳞状细胞癌肿瘤出芽区及中央区Bit1、E-钙黏蛋白、P16INK4a的表达情况。以肿瘤中央区及出芽区各蛋白质表达评分的中位数作为分界点,将标本分为高表达组和低表达组,分析在不同P16INK4a表达情况下Bit1及E-钙黏蛋白的表达差异及二者与患者临床病理特征的关系,并进一步分析在肿瘤中央区及出芽区Bit1与E-钙黏蛋白的相关关系。统计学分析采用χ2检验或连续校正χ2检验和Spearman等级相关分析。结果77例宫颈鳞状细胞癌标本中,肿瘤中央区P16INK4a、E-钙黏蛋白、Bit1高表达率分别为32.5%(25/77)、67.5%(52/77)、63.6%(49/77),而在肿瘤出芽区分别为67.5%(52/77)、33.8%(26/77)、37.7%(29/77),差异有统计学意义(χ2=18.935、17.561、10.391,P均<0.01)。无论在肿瘤出芽区还是中央区,P16INK4a高表达组与P16INK4a低表达组Bit1及E-钙黏蛋白的表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。肿瘤中央区Bit1低表达与脉管内癌栓及淋巴结转移有关(χ2=5.053、4.400,P均<0.05),肿瘤出芽区E-钙黏蛋白和Bit1低表达均与淋巴结转移有关(χ2=5.580、7.573,P均<0.05)。Spearman等级相关分析显示,在肿瘤中央区及肿瘤出芽区E-钙黏蛋白与Bit1表达均呈正相关(r=0.287,P=0.011;r=0.236,P=0.039)。结论宫颈癌侵袭力的增高与Bit1及E-钙黏蛋白表达降低及P16INK4a表达增高有关,宫颈癌细胞可能通过抑制Bit1获得失巢凋亡抗性并影响EMT的发生从而获得更高的侵袭能力,但P16INK4a并未参与此过程。

分化抑制因子1蛋白和基因在弥漫大B细胞淋巴瘤的表达及意义

目的观察弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中分化抑制因子1(Id1)蛋白以及骨髓细胞中Id1基因的表达水平,探讨Id1在评价DLBCL患者病情及预后的临床意义。方法收集2011年10月至2014年10月该院收治的初治DLBCL患者40例为观察组,同期淋巴结反应性增生(RH)的初治患者25例为对照组。采用免疫组织化学SP法分别检测Id1在DLBCL组织和RH组织中的表达水平;采用RT-PCR法分别检测Id1mRNA在两组患者骨髓细胞中的表达水平。结果观察组DLBCL组织切片Id1蛋白阳性表达率为75.00%(30/40),而对照组RH组织切片中Id1蛋白阳性表达率为32.00%(8/25)。Id1蛋白在观察组中表达水平明显高于对照组(P=0.001),观察组中的Id1蛋白表达与患者性别、年龄无关(P>0.05),与临床分期、乳酸脱氢酶(LDH)高低、结外器官受累情况等影响患者预后的指标有关(P<0.05)。Id1基因在观察组患者的骨髓细胞中表达水平明显高于对照组患者骨髓细胞(Id1mRNA水平2.80±0.87 vs.1.37±0.51,P<0.05),且也与临床分期、LDH高低、结外器官受累情况有关(P<0.05)。结论 Id1蛋白及Id1mRNA在DLBCL组织以及骨髓中的表达较RH组织均明显增高,与DLBCL病情预后有关,可能作为未来DLBCL治疗的靶点。

复方861含药血清对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶组织抑制因子1mRNA表达的影响

目的:观察复方861含药血清对HSC-T6细胞I型胶原(CoL-I)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)mRAN表达的影响。方法:不同剂量复方861灌胃大鼠制备的含药血清,作用于HSC-T6细胞48h,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC-T6细胞CoL-I、TIMP1 mRNA表达的影响。结果:复方861 0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg、6.0g/kg等不同剂量的含药血清HSC-T6细胞Col-I、TIMP1 mRAN表达水平分别为0.28±0.09、0.29±0.13、0.31±0.18、0.40±0.08,1.28±0.46、1.33±0.40、1.14±0.10、1.22±0.31,与空白对照组(0.58±0.04,2.29±0.67)比较,具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:复方861降低HSC-T6细胞CoL-I、TIMP1mRAN表达水平,是其抗肝纤维化的作用机理之一。