急性血糖波动对心肌细胞核因子κB及其抑制因子IκB表达的影响

目的:探讨急性血糖波动对心肌细胞核因子κB(NF-κB)及其抑制因子IκB表达的影响和临床意义。方法:给Wistar雄性大鼠间断输注50%葡萄糖注射液48h的方法,建立急性血糖波动动物模型。采用比色法检查血清丙二醛、超氧化物歧化酶;免疫组化的方法检测心肌细胞浆中IκB、核中NF-κB表达。结果:急性血糖波动组心肌细胞中NF-κB、IκB、NF-κB/IκB的表达显著升高;急性血糖波动组血清丙二醛、超氧化物歧化酶明显升高。血糖波动组MDA/SOD比值显著高于对照组及持续性高血糖组。结论:急性血糖波动与持续性高血糖都能导致机体的氧化应激水平显著升高,急性血糖波动导致的氧化应激反应更强;增强的氧化应激促进细胞核NF-κB表达,导致心肌炎症反应的发生。

核因子κB抑制物(IκB)家族在人肺腺癌中表达的生物信息学分析

目的生物信息学方法筛选核因子κB抑制物(IκB)家族基因在肺腺癌(LUAD)中的差异表达基因(DEG),探究其在LUAD中的临床意义。方法采用R语言筛选出IκB家族基因的差异表达基因,并进行生存分析;R语言分析IκB家族基因表达与临床病理学特征的相关性;基于LinkedOmics对差异表达基因进行基因本体论(GO)富集、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集;肿瘤免疫评估资源(TIMER)分析差异表达基因与免疫细胞浸润的相关性;比例风险(COX)分析差异表达基因与LUAD预后的关系。结果IκB家族中核因子κB抑制物δ(NFKBID)基因和核因子κB抑制物ζ(NFKBIZ)基因在LUAD组织中表达显著降低,且NFKBID和NFKBIZ低表达的LUAD患者具有更短的生存期;NFKBID、NFKBIZ与肺腺癌T分期显著相关;富集分析显示NFKBID、NFKBIZ可能参与能量代谢、蛋白质表达和运输;NFKBID、NFKBIZ的表达与B细胞、CD4~+T细胞、中性粒细胞、树突状细胞(DC)的浸润呈正相关;COX分析提示NFKBIZ基因或可作为LUAD的独立预后因子。结论NFKBID、NFKBIZ在LUAD组织中低表达,且患者生存期短;NFKBID、NFKBIZ可能通过调节糖代谢和多种免疫细胞浸润参与LUAD的发生发展;NFKBIZ可能是LUAD的独立预后因子。

雌二醇通过与雌激素受体β结合抑制骨关节炎滑膜细胞的NF-κB通路发挥抗炎作用

目的探讨雌二醇在骨关节炎病程中对滑膜细胞产生抗炎作用的机制。方法分离并鉴定滑膜细胞,利用免疫荧光染色观察滑膜细胞表达雌激素受体β(ERβ)的情况;而后对滑膜细胞进行分组:空白对照组,10 ng/m L白细胞介素1β(IL-1β)处理组、雌二醇处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L的雌二醇培养)、雌二醇联合雌激素受体阻断剂四氢大麻酚(THC)处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L雌二醇和10-5mol/L THC),各组处理36 h。实时定量PCR检测滑膜细胞中核因子κB抑制蛋白α(IκBα)和IL-6的mRNA水平,Western blot法检测滑膜细胞中IκBα和IL-6的蛋白水平。结果骨关节炎滑膜细胞中有ERβ表达;IL-1β组IL-6的mRNA和蛋白水平表达均增高;IκBα蛋白水平降低,而mRNA水平升高,同时磷酸化IκBα蛋白水平升高;与IL-1β组相比,IL-1β联合雌二醇组,IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平下降。用IL-1β、雌二醇、雌激素受体阻断剂三者联合组,则可见IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平较IL-1β处理组无明显变化。结论雌二醇通过结合ERβ抑制NF-κB通路激活从而发挥抗炎作用。

敲低高迁移率族蛋白B1(HMGB1)抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨敲低高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响及机制。方法培养大鼠GMC,分为正常组、高糖处理组、阴性对照小干扰RNA联合高糖处理组(siRNA-NC-高糖组)、HMGB1小干涉RNA联合高糖处理组(siRNA-HMGB1-高糖组)。正常组GMC用正常DMEM培养基培养;高糖处理组GMC换用高糖DMEM培养基培养;siRNA-HMGB1-高糖组GMC转染siRNA-HMGB1序列6 h后,用高糖培养液培养24 h;siRNA-NC-高糖组GMC转染siRNA-NC序列6 h后,用高糖培养液培养24 h。实时荧光定量PCR检测GMC中HMGB1 mRNA水平,MTT法检测GMC增殖情况,流式细胞术检测GMC凋亡情况,Western blot法检测GMC中HMGB1、核因子κBp65(NF-κBp65)和核因子κB抑制物α(IκBα)蛋白水平,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果与siRNA-NC-高糖组或单纯高糖组相比,siRNA-HMGB1-高糖组GMC中HMGB1 mRNA水平降低,在处理24、48、72、96 h,GMC增殖活性和细胞凋亡率降低;敲低GMC的HMGB1水平后,细胞NF-κBp65蛋白水平降低、IκBα蛋白水平增加,且上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低。结论敲低GMC的HMGB1水平抑制高糖诱导的GMC增殖,并促进其凋亡,可能与抑制NF-κB/IκBα通路有关。

葛根素对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤时听功能和IκBα的影响

目的探讨葛根素在豚鼠椎基底动脉缺血/再灌注耳蜗损伤中的保护作用及分子机制,为葛根素治疗耳蜗缺血再灌注损伤提供理论依据。方法纯白雄性豚鼠32只,随机分为4组;正常对照组、缺血再灌注7d组、生理盐水组(即缺血再灌注7d加生理盐水对照组)和用药组(即缺血再灌注7d加葛根素保护组)。除正常对照组外,所有豚鼠均进行手术造模。用药组在缺血再灌注开始时即腹腔注射葛根素150mg·kg-1·d-1,每天1次,连用6天,于再灌注7天时处死。生理盐水组操作同用药组,但以等容量生理盐水代替葛根素。应用听觉脑干反应评价听功能。采取石蜡包埋免疫组织化学技术,对各组耳蜗近中轴位切片行IκBα免疫组织化学染色以观察葛根素IκBα的影响。结果用药组动物ABR各波潜伏期、Ⅰ～Ⅲ波间期明显缩短,阈值降低。各组各波潜伏期、Ⅰ～Ⅲ波间期和阈值比较差异均有统计学意义(P<0.01)。正常对照组与用药组比较,Ⅲ、Ⅳ波潜伏期、Ⅰ～Ⅲ波间期和阈值差异无统计学意义(P>0.05)。用药组IκBα表达与缺血再灌注7d组比较活性明显上调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论葛根素具有保护耳蜗缺血再灌注损伤的作用,其作用机制可能与上调IκBα表达活性有关。

miR-18a通过阻断TLR4/NF-κB通路减轻小鼠过敏性鼻炎的炎症和组织损伤

目的探究微小RNA-18a(miR-18a)在小鼠过敏性鼻炎发病过程中的作用。方法22只BALB/c小鼠被随机分为空白组、模型组及miR-18a组。模型组和miR-18a组小鼠采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)混悬液的方法制备过敏性鼻炎模型,miR-18a组小鼠同时给予过表达miR-18a的慢病毒载体质粒。采用行为学评分及HE染色评价各组小鼠过敏症状及形态学变化,ELISA检测血浆白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,免疫荧光组织化学染色检测小鼠鼻黏膜组织CD45^(+)细胞浸润情况,流式细胞术检测鼻腔灌洗液CD45^(+)细胞数量,荧光定量PCR检测鼻黏膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平,Western blot法检测鼻黏膜组织Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)、NF-κB抑制物α(IκBα)、磷酸化的IκBα(p-IκBα)的蛋白表达。结果与空白组相比,模型组小鼠血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著增高,鼻黏膜组织及鼻腔灌洗液CD45^(+)细胞数量增多,鼻黏膜组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平及TLR4、NF-κB p65、p-IκBα表达水平升高;与模型组相比,miR-18a组小鼠血浆中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低,鼻黏膜组织及鼻腔灌洗液CD45^(+)细胞数量减少,鼻黏膜组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平及TLR4、NF-κB p65、p-IκBα表达水平降低。结论miR-18a能够通过阻断TLR4/NF-κB通路抑制小鼠过敏性鼻炎的发生和发展。

烧伤血清对内皮细胞核因子-κB核移位的影响

目的 了解烧伤血清对内皮细胞核因子 κB (NF κB)异二聚体 p5 0 /p6 5核移位 ,以及核抑制因子κB(IκB)α降解的影响 ,进一步探讨烧伤血清对内皮细胞的活化作用。方法 采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV 30 4 ,分别用正常人血清、烧伤患者血清、烧伤患者血清 +吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 (PDTC)刺激内皮细胞 ,并以正常培养的内皮细胞为对照。应用激光共聚焦显微镜观察刺激 30、6 0、12 0、4 80min后内皮细胞 p5 0 /p6 5核移位情况 ,采用Western印迹法检测刺激 30、6 0、90、12 0min后内皮细胞IκBα蛋白降解的情况。 结果 与对照组比较 ,烧伤血清刺激内皮细胞 30min后 ,p5 0、p6 5即发生核移位 ,30～ 6 0min达高峰 ,2h后恢复至刺激前状态 ;而烧伤血清刺激 30min后 ,IκBα发生降解 (P <0 .0 1) ,刺激 4 5～ 6 0min后最为明显 ,2h后表达逐渐恢复。PDTC能有效抑制烧伤血清作用 30、6 0min后 ,p5 0、p6 5的核移位和IκBα降解。 结论 烧伤血清可导致内皮细胞NF κBp5 0、p6 5发生核移位 ,并使IκBα降解 ,进而活化NF κB ,诱导内皮细胞分泌细胞因子。

加味黄芪鳖甲汤联合耳穴压豆治疗糖尿病周围神经病变气阴两虚证的疗效及对血清MyD88/IκB信号通路的影响

目的:观察加味黄芪鳖甲汤联合耳穴压豆治疗糖尿病周围神经病变气阴两虚证的疗效及对髓样分化因子(MyD88)/核转录因子-κB抑制蛋白(IκB)信号通路的影响。方法:140例患者随机分为观察组和对照组,各70例。均给予患者饮食指导,控制空腹血糖、血压等基础治疗,观察组给予加味黄芪鳖甲汤联合耳穴压豆治疗,对照组给予甲钴胺治疗,疗程均为4周。治疗前后分别观察两组多伦多临床神经病变量表(TCSS),中医证候,运动及感觉神经(正中神经、腓总神经、胫神经、尺神经)传导速度,糖代谢指标[空腹血浆葡萄糖(FPG),餐后2 h血浆葡萄糖(2 hPG),糖化血红蛋白(HbA1c)],肠道菌群(毛梭菌、布劳氏菌、拟杆菌、粪杆菌),血清MyD88/IκB信号通路[MyD88,IκBα,磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白α(p-IκBα)]的水平。比较两组临床疗效及安全性。结果:观察组总有效率85.3%(58/68),高于对照组的48.5%(32/66)(χ^(2)=6.143,P<0.05)。与对照组治疗后比较,观察组TCSS,中医证候,FPG,2 hPG,HbA1c,毛梭菌,布劳氏菌,MyD88,p-IκBα降低(P<0.05),运动及感觉神经(正中神经、腓总神经、胫神经、尺神经)传导速度加快(P<0.05),拟杆菌,粪杆菌,IκBα升高(P<0.05)。观察组不良反应发生率1.5%(1/68),低于对照组的12.1%(8/66)(χ^(2)=4.328,P<0.05)。结论:加味黄芪鳖甲汤联合耳穴压豆可明显改善糖尿病周围神经病变气阴两虚证患者的临床疗效,其作用机制可能与调节血清MyD88/IκB信号通路有关。