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牛脑皮层G_i的纯化及其与AC的偶联
1
作者
罗柏
杨小毅
+2 位作者
罗志勇
范高峰
黄有国
《生物化学杂志》
CSCD
1997年第3期350-355,共6页
用1%胆酸钠和20%饱和度的硫酸铵抽提牛脑皮层细胞膜得到含G蛋白和腺苷酸环化酶(AC)的制剂,通过Sepharose6B柱将两者分开,再将含G蛋白的级分用庚胺-Sepharose4B疏水柱、羟基磷灰石柱将其它亚型的G蛋白(主要是Gs和Go)从抑制型G蛋...
用1%胆酸钠和20%饱和度的硫酸铵抽提牛脑皮层细胞膜得到含G蛋白和腺苷酸环化酶(AC)的制剂,通过Sepharose6B柱将两者分开,再将含G蛋白的级分用庚胺-Sepharose4B疏水柱、羟基磷灰石柱将其它亚型的G蛋白(主要是Gs和Go)从抑制型G蛋白(Gi)中除去,获得纯化的高活力的Gi,其GTP结合活力为17.6nmol/mg,比细胞膜Gi活力提高50倍;并具有较高的产率,从1g膜蛋白中可获得0.66mg的Gi,同时可获得无G蛋白污染的AC和少量的Gs蛋白.SDS-PAGE显示分子量为41000和36000的两条蛋白带,证实是Gi的α基和β亚基.进一步用重建脂酶体的方法检测Gi对AC的抑制作用,结果显示Gi对AC活力的抑制达40%左右,表明CAMP信息跨膜转导通路中Gi与AC之间具有较好偶联功能.
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关键词
抑制型g蛋白
腺苷酸环化酶
牛脑
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职称材料
题名
牛脑皮层G_i的纯化及其与AC的偶联
1
作者
罗柏
杨小毅
罗志勇
范高峰
黄有国
机构
中国科学院生物物理研究所
出处
《生物化学杂志》
CSCD
1997年第3期350-355,共6页
文摘
用1%胆酸钠和20%饱和度的硫酸铵抽提牛脑皮层细胞膜得到含G蛋白和腺苷酸环化酶(AC)的制剂,通过Sepharose6B柱将两者分开,再将含G蛋白的级分用庚胺-Sepharose4B疏水柱、羟基磷灰石柱将其它亚型的G蛋白(主要是Gs和Go)从抑制型G蛋白(Gi)中除去,获得纯化的高活力的Gi,其GTP结合活力为17.6nmol/mg,比细胞膜Gi活力提高50倍;并具有较高的产率,从1g膜蛋白中可获得0.66mg的Gi,同时可获得无G蛋白污染的AC和少量的Gs蛋白.SDS-PAGE显示分子量为41000和36000的两条蛋白带,证实是Gi的α基和β亚基.进一步用重建脂酶体的方法检测Gi对AC的抑制作用,结果显示Gi对AC活力的抑制达40%左右,表明CAMP信息跨膜转导通路中Gi与AC之间具有较好偶联功能.
关键词
抑制型g蛋白
腺苷酸环化酶
牛脑
Keywords
Inhibitory
g
TP-bindin
g
protein (
g
i), Adenylate cyclase (AC), Incorporation, Bovine brain
分类号
Q510.3 [生物学—生物化学]
Q557.103 [生物学—生物化学]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
牛脑皮层G_i的纯化及其与AC的偶联
罗柏
杨小毅
罗志勇
范高峰
黄有国
《生物化学杂志》
CSCD
1997
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