环状RNA_0003028靶向微小RNA-498调控生殖器形成抑制基因-1/p53信号通路对人肝癌细胞系Huh7的影响

目的探讨环状RNA(circ)_0003028对人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法人肝癌细胞系Huh7分为小干扰RNA(si)-NC组、si-circ_0003028组、微小RNA(miR)-NC组、miR-498模似物(mimics)组、si-circ_0003028+anti-miR-NC组、si-circ_0003028+anti-miR-498组;Real-time PCR检测肝癌组织及各组细胞中circ_0003028和miR-498表达水平;MTT检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭数;Western blotting检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circ_0003028和miR-498的靶向调控关系。结果肝癌组织中circ_0003028表达水平升高(0.98±0.02 vs 1.36±0.01),miR-498表达水平降低(0.98±0.02 vs 0.63±0.02)(P<0.05)。抑制circ_0003028表达或miR-498过表达后,Huh7细胞中Ki-67(0.85±0.02 vs 0.41±0.02或0.95±0.11 vs 0.37±0.02)、基质金属蛋白酶(MMP)-2(0.71±0.02 vs 0.43±0.03或0.83±0.02 vs 0.41±0.03)、MMP-9(0.74±0.02 vs 0.37±0.02或0.78±0.02 vs 0.39±0.02)蛋白表达水平降低,细胞活性(1.53±0.03 vs 1.05±0.02或1.68±0.02 vs 1.11±0.02)降低;迁移(111.40±2.12 vs 77.22±2.38或108.90±2.30 vs 78.44±1.46)和侵袭(87.89±2.18 vs 49.78±1.98或80.22±1.79 vs 38.22±1.52)细胞数减少,生殖器形成抑制基因-1(SMG-1)(0.76±0.02 vs 1.39±0.02或0.79±0.02 vs 1.39±0.02)、p53(0.77±0.02 vs 1.24±0.03或0.82±0.03 vs 1.45±0.03)、p53-ser15(0.78±0.03 vs 1.50±0.02或0.82±0.02 vs 1.49±0.04)蛋白表达水平升高(P<0.05)。Circ_0003028靶向调控miR-498,沉默miR-498逆转了抑制circ_0003028表达对Huh7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论抑制circ_0003028表达通过靶向miR-498影响SMG-1/p53信号通路而抑制人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

p53、Id-1在不同病理分级宫颈组织中的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因p53及分化抑制因子-1(Id-1)在人类宫颈组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR及免疫组化(IHCA)SP二步法方法,分别检测64例子宫颈鳞状上皮癌(SCC)、34例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织及30例正常宫颈组织p53和Id-1 mRNA及蛋白表达水平,分析两者在宫颈癌组织中表达的相关性。结果 p53 mRNA在SCC组织中表达量是正常宫颈组织的2.638倍,是CIN组织中的1.611倍,在CIN组织中的表达量是正常宫颈组织中的1.605倍,差异有统计学意义(P<0.05);p53蛋白在正常宫颈组、CIN组及SCC组阳性表达率分别为0%、52.9%、71.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。Id-1 mRNA在SCC组织中的表达量是正常宫颈组织中的3.22倍、是CIN组织中的1.137倍,在CIN组织中的表达量是正常宫颈组织中的1.862倍,差异有统计学意义(P<0.05);Id-1蛋白在正常宫颈组、CIN组及SCC组阳性表达率分别为0%、50.0%、73.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。对p53及Id-1的mRNA表达量做Spearman等级相关分析,差异有统计学意义(P<0.05);对p53及Id-1的蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p53、Id-1与宫颈癌的发生发展密切相关,且两者表达具有相关性。