基于酶抑制实验与网络药理学探讨核桃楸皮总黄酮治疗2型糖尿病的作用机制

目的:通过酶抑制实验考察核桃楸皮总黄酮的降糖作用,并利用网络药理学与分子对接的方法研究核桃楸皮总黄酮治疗2型糖尿病的潜在作用机制。方法:提取纯化核桃楸皮总黄酮部位后采用DNS法测定核桃楸皮总黄酮对α-淀粉酶的抑制作用。将文献报道的核桃楸皮的27种黄酮类成分输入中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP)进行筛选。将筛选后的活性成分导入Swiss Target Prediction数据库进行靶点预测。将核桃楸皮黄酮类活性成分与相关靶点导入Cytoscape 3.9.1软件构建“化合物-靶点”网络,并筛选主要活性成分。在Genecards、TTD、DisGeNET数据库中搜集2型糖尿病相关的靶点,利用在线工具Venny 2.1得到活性成分靶点和疾病靶点的交集靶点,并绘制Venn图。在STRING数据库中输入交集靶点得到网络关系,利用Cytoscape 3.9.1软件构建PPI网络并进行拓扑分析。通过Metascape分析平台对交集靶点进行基因本体(gene ontology, GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)信号通路富集分析。利用AutoDock Vina 1.2.0对关键成分和核心靶点进行分子对接。结果:核桃楸皮总黄酮粉末纯度为93.85%,核桃楸皮总黄酮对α-淀粉酶具有明显的抑制作用(P<0.05),IC_(50)值为0.776 g·L^(-1)。从TCMSP数据库筛选得到9种活性成分,获得223个活性成分相关靶点。“化合物-靶点”网络分析得到山柰酚、木犀草素、杨梅素、柚皮素、槲皮素可能是发挥作用的主要活性成分。在Genecards、TTD、DisGeNET数据库获得疾病靶点1 360个。利用在线工具Venny 2.1进行取交集处理,得到交集靶点99个。PPI网络分析得到蛋白激酶B1(protein kinase B1,AKT1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)等为核心靶点。GO富集得到5 706个条目。KEGG分析可知磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases, PI3K)-AKT信号通路、Ras信号通路、Rap1信号通路等可能是核桃楸皮总黄酮治疗2型糖尿病的主要通路。核桃楸皮总黄酮活性成分与核心靶点均具有一定的相互作用。结论:核桃楸皮总黄酮可通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗2型糖尿病的作用,为核桃楸皮总黄酮治疗2型糖尿病的深入研究提供了理论依据。

重金属污染土壤毒性的斜生栅藻生长抑制实验诊断

应用斜生栅藻 (Scenedesmusobliquus)对重金属污染土壤的毒性进行诊断 ,结果表明 ,斜生栅藻的增长率与土壤中的重金属含量明显相关 ,并且随重金属投加量的增加 ,其增长率逐渐降低 .对两种测试参数进行比较 ,发现采用细胞数增长率作为土壤毒性的检测指标要比采用光密度增长率更为敏感 .当采用细胞数增长率作为检测指标时 ,4种重金属的EC50 顺序为 :Pb >Cu >Zn >Cd ;采用光密度增长率作为检测指标时 ,4种重金属的EC50 顺序为 :Pb >Cu >Cd >Zn .复合污染情况下 ,由于金属间的协同作用 ,使土壤的毒性比单一重金属污染时有明显增强 。

应用斜生栅藻生长抑制实验对重金属污染土壤的毒性进行诊断

应用斜生栅藻 (ScenedesmusObliquus)对重金属污染土壤的毒性进行诊断 .结果表明 ,斜生栅藻的生长率与土壤中的重金属含量明显相关 ,并且随重金属投加量的增加而逐渐降低 .对两种测试参数进行比较 ,发现采用细胞数生长率作为土壤毒性的检测指标要比采用光密度D(λ)增长率更为敏感 .当采用细胞数生长率作为检测指标时 ,4种重金属的EC50 顺序为 :Pb >Cu >Zn >Cd;采用光密度生长率作为检测指标时 ,4种重金属的EC50 顺序为 :Pb>Cu >Cd >Zn.复合污染情况下 ,由于金属间的协同作用 ,使土壤的毒性比单一重金属污染时有明显增强 ,从而为污染土壤的优先修复提供了理论依据 .图 5表 2参

孕妇血清提取物的花结抑制实验

以花结抑制试验检测250名妊娠3～8周妇女静脉血混合血清及其经DEAE纤维素离子交换柱层析、ConA-Sepharose亲和层析和Sephadex-G-100凝胶过滤后所得各阶段提取物的花抑滴度,并检测其hCG和蛋白含量。对照组为37名非孕妇女混合血清。结果证明:混合孕血清经DE—52柱层析后未吸附蛋白部分DE-Ⅰ;ConA-Sepharose亲和层析后,DE-Ⅰ-ConA-Ⅰ、DE-Ⅰ-ConA-Ⅱ和SephadexG-100过滤后的GⅡ、GⅢ、GⅣ均具花抑活性;DE-Ⅰ和DE-Ⅰ-ConA-Ⅱ的hCG检测均为阳性;而DE-Ⅰ-Con-A-Ⅰ和GⅡ、GⅢ、GⅣ的hCG均为阴性。提示GⅡ、GⅢ、GⅣ为具花抑活性而hCG为阴性的EPF提取物。

胃癌高发区民用鱼露致突变性及抑制实验研究

本文应用微核试验方法测定了胃癌高发区长乐县的民用鱼露，结果表明鱼露具有明显致突变作用，并发现绿茶、维生素Ｃ、β－胡萝卜素、大蒜素和香菇多糖对鱼露的致突变作用有显著抑制效果，为胃癌防治提供科学依据。

狂犬病毒新型快速荧光斑点抑制实验方法的建立

目的建立一种新型的快速荧光斑点抑制实验用于狂犬病毒抗体的检测。方法本研究以携带绿色荧光蛋白基因的嵌合狂犬病毒HEP-GFP株为基础毒株,建立了一种新型快速荧光斑点抑制实验(RFFIT-GFP);并对多份人、犬、猫的血清进行了检测,还将该检测结果与传统的RFFIT,ELISA相比较。结果与结论RFFIT-GFP和RFFIT,ELISA测定的结果基本相一致,特异性都比较高,而且RFFIT-GFP是一种比它们更为简便、经济的检测方法。

青蒿油乳抗人肝癌细胞增殖生长抑制实验

目的 :探讨青蒿油乳抗肿瘤作用。方法 :采用MTT法检测青蒿油乳对人肝癌SMMC - 772 1细胞株的杀伤作用。结果 :三次重复实验表明 ,青蒿油乳浓度在 2 5 0 μg/ml时 ,对肝癌细胞最高抑制率达 87.0 % ,其IC50 为175 μg/ml。结论 :青蒿油乳有抗肝癌细胞的作用。

外感受抑制实验在紧张型头痛中枢调控机制研究中的应用

目的探求不同亚型紧张型头痛中枢调控机制。方法对三个亚型的病例及对照组进行外感受抑制实验,测定第一外感受抑制期(ESP1)和第二外感受抑制期(ESP2)的潜伏期及时程。结果偶发性紧张型头痛组ESP2潜伏期、时限与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);频发性紧张型头痛组及慢性紧张型头痛组与对照组比较,ESP2潜伏期延长、时限缩短(P<0.05);慢性紧张型头痛组与频发性紧张型头痛组比较,ESP2潜伏期延长、时限缩短更为显著(P<0.05)。结论偶发性紧张型头痛病人无明显中枢调控异常存在,频发性及慢性紧张型头痛病人均存在中枢性疼痛调控机制异常,慢性型程度甚于频发型。

放射过敏原吸附抑制实验评价过敏原提取液的总效价

目的用放射过敏原吸附抑制实验评价过敏原提取液的总效价。方法制备蒿属花粉过敏原提取液室内参考品(IHR).并依据相同的操作规程制备蒿属花粉提取液 A,以及 A 的10倍稀释液 B。分别进行放射过敏原吸附抑制实验.绘制抑制曲线,计算50%抑制所需过敏原稀释度。结果蒿属花粉 IHR 以及提取液 A 和 B 的抑制曲线斜率差异无显著性。达到50%抑制所需 IHR 稀释度为10^(-3.61),50%抑制所需提取液 A、B 的稀释度分别为10^(-3.57)、10^(-2.62),与 IHR 比较,提取液 A、B 的相对效价分别约为1和0.1。结论放射过敏原吸附抑制实验可评价过敏原提取液的总效价.通过与标准品或室内参考品的比较可进行过敏原的质量控制。

钙调蛋白拮抗剂W-7对人Tenon囊成纤维细胞的抑制实验

目的观察钙调蛋白拮抗剂W-7对培养的人Tenon囊成纤维细胞的抑制作用。方法1)人Tenon囊成纤维细胞离体培养及生长抑制实验:取对数生长期的Tenon囊成纤维细胞接种于96孔培养板中,分别加入不同浓度的W-7及丝裂霉素C(MMC),培养不同时间,用MTT法检测细胞增生抑制情况。2)药物对人Tenon囊成纤维细胞形态及线粒体代谢的影响:将人Tenon囊成纤维细胞接种在96孔培养板中,同时加入不同浓度的W-7及MMC,分别培养不同时间,观察细胞形态变化;同时加入MTT,观察细胞线粒体代谢变化。结果1)W-7依剂量及时间依赖方式明显抑制离体培养的人Tenon囊成纤维细胞增生。2)MTT显示W-7作用的细胞线粒体代谢存在,而MMC作用后细胞死亡,线粒体代谢消失。结论W-7可抑制人Tenon囊成纤维细胞增生。其对细胞线粒体代谢的影响较MMC小,不引起细胞膜完整性的破坏,可减轻炎症反应,是具有良好应用前景的抗斑痕药物。

恶性疟原虫体外抑制实验方法的改进

以恶性疟原虫融合抗原 Pf CP- 2 .9免疫兔血清为待测血清 ,将起始原虫率从 1 %降至 0 .2 %～ 0 .5 % ,采用 2种方法作对比 ,即一组每 2 4 h更换培养液、加入免疫血清 ,另一组 72 h内不更换培养液也不加免疫血清试验方法。培养至 72 h,涂片 ,油镜下计数 ,计算原虫感染率和抑制率。结果 2组的抑制率相近 ,经统计分析无显著差异。测定不同剂量抗原免疫血清的抑制率 ,结果显示抑制率与免疫血清中特异抗体滴度呈正相关 ,2种方法的结果无显著差异。研究表明通过降低起始原虫率可将常规体外抑制实验由需每天换液改为 72

几种常用的过敏原提取溶液对户尘螨放射过敏原吸附抑制实验荧光值的影响

目的探讨几种常用的过敏原提取溶液对户尘螨(Dermatophagoides pterronyssinus)放射过敏原吸附抑制实验(RAST抑制实验)荧光值的影响.方法将20例户尘螨过敏患者血清等量混合成阳性血清.其RAST实验荧光值为12505～24776.提取溶液分别是:SDS、PBS、NH4HCO3 和Coca's液.采用UniCAP 100过敏原检测系统进行RAST实验.结果当SDS浓度为≥0.25%时,户尘螨过敏原RAST荧光值下降＞5%;当PBS浓度为1 mol/L,0.1 mol/L,0.01 mol/L时,户尘螨过敏原RAST荧光值分别下降9.2%,2.9%和0.9%;用0.125 mol/L NH4HCO3时,户尘螨过敏原RAST荧光值下降4.5%;使用Coca's液时,户尘螨过敏原RAST荧光值下降3.4%.结论在进行过敏原提取后,使用助溶剂复溶过敏原沉淀进行RAST抑制实验时,应当重视表面活性剂(如SDS)对RAST抑制实验的影响.另外,常用的0.1 mol/L和0.01 mol/L PBS,对RAST抑制实验无显著影响.Coca's液和NH4HCO3对RAST抑制实验影响也不大.

鲎法检测奥硝唑注射液内毒素的增强抑制实验

目的:通过对鲎试剂的灵敏度试验,确定鲎法检测奥硝唑注射液细菌内毒素的可行性。方法:用鲎法对其细菌内毒素进行检测。结果:奥硝唑注射液对鲎试剂凝集没有增强抑制作用,可用标示灵敏度为0.25Eu·ml-1的鲎试剂检测样品的细菌内毒素。结论:该方法灵敏、简便,可用于检测奥硝唑注射液的内毒素。

814针剂对移植性肿瘤的抑制实验

８１４针剂对移植性肿瘤的抑制实验曾元范，颜克海（暨南大学医学院附属医院药剂科；暨南大学医学院附属医院中医科，５１０６３０，广州）根据中医君臣佐使复方用药的传统，研制成８１４静脉注射液，各项质检指标经检查合格后，进行抗肿瘤动物实验，现将结果报告如下。１...

小白鼠离体回肠收缩抑制实验

本实验,取小白鼠离体小段回肠放入生理盐水中,观察药物对离体回肠自动收缩运动的影响,实验结果表明,药物具有松弛平滑肌的作用。实验方法1.取健康小白鼠1只,20g±,断头处死,立即剖腹取近端回肠16厘米,剪断8等份,放入生理盐水内,保留5分钟。2.取50毫升量杯8个,分两组,实验组和对照组,每组4个,各放入生理盐水20毫升,将各组标号:1、2、3、4,观察记录肠管蠕动次数/分。

浅析影响血凝和血凝抑制实验的原因

血凝和血凝抑制试验是兽医实验室检测鸡新城疫、禽流感免疫后抗体的常用方法之一。它也是检查防疫质量的重要依据。但在实验操作中,经常受到各种因素的影响,带来试验结果误差。

用血凝抑制实验对卵黄抗体和血清抗体监测结果的比较

血清学监测有利于科学的监测疫苗接种方案的效果，预测接种时间及疾病的诊断。基层工作者已将其列入重要工作日程，但采血工作极为繁重且不容易被群众接受。因此，为验证卵黄抗体及血清抗体监测结果的相符性，用血凝抑制实验（HI）对卵黄及血清进行新城疫及禽流感H9抗体监测。

用血凝抑制实验(HI)检测非典型鸡新城疫

非典型鸡新城疫(CND)是近10多年来一些专家、学者应用的新名词,由于现在鸡群普遍进行了新城疫的免疫接种,使得新城疫的发病向非典型化转变。

血凝与血凝抑制实验测卵黄抗体应注意事项

近几年来规模养殖场越来越重视防疫,做疫苗之前把握机体的抗体水平是非常重要的。实验表明鸡蛋中卵黄抗体在鸡排卵前与血清抗体是一致的,但卵黄排入输卵管后,与母体不再有联系,所以卵黄抗体与排卵前血清中的抗体是一致的,

血凝抑制实验中常出现的误差及解决办法

近年来,为了加强动物疫情监测工作,及时掌握疫情动态和免疫效果,有效地防止疫情发生和传播.张掖市禽流感春秋两季和日常监测免疫抗体工作量也逐年增加,血凝和血凝抑制试验是目前实验室检测禽流感中最常用的方法,此方法在实验中虽然操作简单,判定结果方便,却很容易因为操用不规范,技术不正确而影响试验结果的准确性.笔者对影响试验结果准确性的因素进行了简单分析讨论,以供同行参考.