抑制性削减杂交鉴别早期人胎肝细胞乙型肝炎病毒感染相关基因

乙型肝炎的宫内感染涉及乙型肝炎病毒(HBV)受体问题,其机制尚不明确,一般认为胎肝细胞仍然是主要靶细胞.虽有多篇报道表明晚期(孕22～24周)胎肝细胞可在体外被HBV所感染,但目前鲜见涉及人类胎肝细胞HBV受体的研究报道.设想早期胎肝细胞由于分化程度较低,未能表达某些特定分子,因此缺乏对HBV的易感性;通过特定条件进行体外培养,在细胞分化过程中这些特定分子表达而获得易感性.鉴别出新表达的基因,从中可能发现HBV感染相关基因.此方法以HBV实际感染成功与否为标准,可分析并找到多种可能相关的基因.

西农萨能羊泌乳高峰期和初期乳腺组织差异表达基因研究

利用抑制性削减杂交和实时定量PCR研究西农萨能羊泌乳高峰期差异表达基因，结果表明成功构建泌乳高峰期和泌乳初期乳腺组织差异表达削减eDNA文库，以GAPDH为指标检测文库削减效率为2^5倍，共获得78个阳性克隆，PCR检测插入片段主要分布在150～1000bp，挑选插入片段不等的30个克隆测序，获得25个有效序列，代表18个基因。对文库中所包含的血清淀粉样蛋白A3（SAA3），ATP结合盒亚家族G成员2（ABCG2），心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）和黄嘌呤脱氢酶（XDH）进行实时定量PCR检测，发现上述4个基因在泌乳高峰期乳腺组织中的表达水平分别是泌乳初期的17．0，7．7，16．3和1．7倍。结论：构建的消减文库可用于筛选泌乳高峰期差异基因，已鉴定的4个基因很可能是调控产奶量和乳成分变化的候选基因。

麦洼牦牛初乳期乳腺中2个特异表达EST片段的克隆与分析

为研究牦牛初乳期乳腺特异表达的基因,采用抑制消减杂交和斑点杂交法对麦洼牦牛初乳期(产犊后2 d)和常乳期(产犊后18 d)特异表达的基因进行了分离鉴定。结果发现2个在初乳期间特异表达的EST片段,并命名为LAO和COL1α1。测序结果LAO片段长698 bp,GenBank比对,其核苷酸序列与西藏黄牛(Bos taurus)、小家鼠(Mus musculus)、家犬(Canis familiaris)等的L-氨基酸氧化酶基因有较高的序列相似性,其序列一致性分别达到96%、73%、72%;COL1α1片段长337 bp,比对结果,其序列与Bos taurus、马鹿(Cervus elaphus)、家犬(Canis lupus fa-miliaris)等的Ⅰ型胶原蛋白α1有较高的序列相似性,其序列一致性分别为100%、100%、99%。2个序列与牛基因组的Blast分析表明,LAO片段定位于3号染色体LOC782545区,该区域编码1个L-氨基酸氧化酶基因;另一片段定位于19号染色体LOC615867区,该区域编码1个Ⅰ型胶原α1基因。研究表明,L-氨基酸氧化酶基因和Ⅰ型胶原蛋白α1基因是牦牛初乳期乳腺特异表达蛋白,这2个基因在牦牛初乳期乳腺组织中较高的表达水平可能与初乳期乳腺特殊的生理状态有关。

西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺组织差异基因的筛选

旨在利用抑制性削减杂交（SSH）技术筛选西农萨能奶山羊泌乳中期和后期的差异表达基因,并用实时定量PCR（Q-PCR）分析差异基因的表达丰度,探讨奶山羊不同泌乳阶段乳腺组织的基因表达规律。本研究以西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺组织的mRNA互为检测子（Tester）和驱动子（Driver）构建cDNA消减文库（M-L和L-M）,随机挑选克隆测序,进行序列比对分析,并检测部分差异基因在乳腺组织中的表达丰度。结果,成功构建了泌乳中期和后期的cDNA文库,随机挑选30个克隆测序,得到M-L和L-M文库中与细胞凋亡、抗氧化、脂类代谢、能量代谢等生理过程相关的差异基因,对其中的6个基因进行实时定量分析,发现5个均为阳性克隆,表达水平增加了1.3~5.5倍不等。结果表明,利用SSH技术成功构建了泌乳中期和后期乳腺组织正反向消减cDNA文库,筛选出24个差异基因,为进一步研究奶山羊乳腺组织基因调控机理奠定了基础。

基因差异表达研究方法的进展及其在肾脏科学研究中的应用

代表性差异分析、抑制性削减杂交、DAN芯片技术等研究基因表达改变的新方法较传统的类似方法有诸多的优越性 ,但也存在着一些缺点。本文就这些方法的原理、技术要点、优缺点和在肾脏发育。

西农萨能羊两个泌乳阶段差异表达基因SAA3的克隆和序列分析

为了研究不同泌乳期乳腺组织中差异表达基因,利用抑制性削减杂交技术构建西农萨能羊泌乳60 d乳腺组织及泌乳28 d乳腺组织中差异表达基因文库,用Real-Time PCR技术验证阳性克隆血清淀粉样蛋白A 3(SAA3)基因,通过RT-PCR方法克隆西农萨能羊乳腺组织SAA3,并进行序列比对和功能预测。结果成功构建了西农萨能羊不同泌乳期乳腺组织中差异表达基因文库,筛选克隆了乳腺组织SAA3基因,GenBank登录号为:DQ839400,编码区长度为396 bp,含有131个氨基酸。西农萨能羊乳腺组织中SAA3与牛(GenBank:NM_181016)、兔(GenBank:M64696.1)、人(GenBank:BC020795)、鼠(GenBank:NM_011315)核苷酸同源性分别为95%、84.3%、81.3%和81.9%,氨基酸同源性为93%、76%、72%、72%;在编码区261-287位较人、兔、鼠SAA编码区多27个碱基,连续大于5个氨基酸的保守区域有6个,较人SAA多3个潜在功能基序。

差异表达基因分离技术研究进展

研究不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下(正常状态、发育、衰老、损伤及疾病)差异基因的表达状况,将有助于了解调控细胞分化的机制,为分析生命活动过程提供重要信息。而分离与克隆差异表达的基因是了解这些生命过程的基础。1990年以来,出现了mRNA差异显示技术、代表性差异分析、抑制性削减杂交、cDNA微阵列技术等多种分离差异表达基因的手段,本文对以上方法的优缺点、发展趋势及其应用前景作了简要综述。

细胞因子IL-1β/IFN-γ对骨骼肌成肌细胞基因表达的影响

目的:研究细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)/干扰素-γ(IFN-γ)对鼠骨骼肌成肌细胞基因表达的影响。方法:鼠骨骼肌成肌细胞在IL-1β/IFN-γ混合液中孵育12h,用抑制性削减杂交法克隆差异表达基因。随机挑取抑制性削减杂交所得克隆制备质粒,进行PCR扩增,选取不同长度片断的产物,测序分析。结果:发现1种骨骼肌结构蛋白基因(原肌球蛋白-4)表达下调,另发现2种凋亡相关的基因和2种功能不明基因的表达上调。结论:①IL-1β/IFN-γ下调骨骼肌结构蛋白基因,调节凋亡相关基因表达,推测可能是骨骼肌功能失调的原因之一;②2种功能不明基因的表达为进一步研究骨骼肌功能失调的原因提供了新线索。