应用抑制性差减杂交技术克隆小鼠胸腺细胞发育相关新基因

目的 :克隆胸腺细胞发育相关新基因。方法 :应用抑制性差减杂交技术 (suppressionsubtractivehybridiza tion ,SSH) ,构建了胸腺基质细胞系cDNA差减杂交文库 ,结合RACE及RT PCR进一步克隆并验证新基因的cD NA全长序列。结果 :筛选两个不同胸腺基质细胞系的差异表达基因 ,获得了差异表达的cDNA片段 ,克隆后挑选阳性克隆进行测序 ,成功克隆 8个新基因片段。对其中两个新基因克隆C5 5和C91进行Northern杂交分析 ,mR NA转录体长度分别为 1.4kb及 1.5kb ,C5 5的表达在两种胸腺基质细胞系中存在显著差异。进一步克隆了C5 5和C91两个新基因的cDNA全长序列 ,已被GenBank所接受。结论 :抑制性差减杂交技术是克隆新基因片段的有效方法 ;成功克隆