G蛋白β_3亚单位基因C825T多态性与2型糖尿病的关系

目的 观察合肥地区 2型糖尿病患者G蛋白 β3 亚单位C82 5T (GNβ3 C82 5T)多态性 ,探讨其与 2型糖尿病(T2DM)的关系。方法 采用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态技术 (PCR RFLP)来检测单纯T2DM患者 191例 ,T2DM合并高血压患者 (HT) 10 2例和对照人群 70例的GNβ3 C82 5T基因型 ,并进行病例对照统计分析。结果 对照组基因型频率CC、CT、TT为 34 3%、5 0 %、15 7% ,等位基因频率C、T分别为 5 9%、4 1% ;T2DM组基因型频率CC、CT、TT为 32 5 %、4 9 7%、17 8% ,等位基因频率C、T分别为 5 7%、4 3% ;T2DM +HT组CC、CT、TT为 2 6 5 %、5 0 %、2 3 5 % ,等位基因频率C、T分别为 5 1%、4 9% ;三组间基因型频率比较 χ2 =2 6 88,P =0 6 11;三组间等位基因频率比较 χ2 =2 5 86 ,P =0 2 74 ,C82 5T多态性与对照组比较差异无显著性。结论 在本人群中GNβ3 C82 5T多态性与T2DM无关系。

G蛋白β_3亚单位825T等位基因与2型糖尿病及其并发肾病的相关性研究

目的 研究G蛋白β_3亚单位825T等位基因与2型糖尿病及糖尿病肾病的相关性。方法 在单纯2型糖尿病(77例)和并发糖尿病肾病(71例)的患者中采用PCR-RFLP方法研究G蛋白β_3亚单位C825T基因多态性,以正常人及原发性高血压患者为对照。结果 单纯糖尿病人群T等位基因(46.1％)及TT基因型频率(20.8％)稍高于对照组(T等位基因频率40.4％,TT基因型频率14.6％),但未达统计学显著意义,而糖尿病肾病组两种指标均明显高于对照组(P<0.05)。结论G蛋白β_3亚单位825T等位基因与糖尿病肾病相关,可能是糖尿病发病的候选基因。

瑞芬太尼下调大鼠背根神经节和脊髓背角GIRK 2的表达

【目的】观察G蛋白门控内向整流钾离子通道亚单位2(GIRK2)在瑞芬太尼诱导的痛觉过敏大鼠背根神经节和脊髓背角中的表达和分布的变化。【方法】成年雄性SD大鼠尾静脉输注瑞芬太尼4μg/(kg·min)2 h建立痛觉过敏模型。瑞芬太尼注射后6 h、1 d、3 d和5 d,采用免疫荧光化学法观察GIRK2在瑞芬太尼诱导痛觉过敏大鼠的背根神经节(DRG)和脊髓背角中分布的变化。采用免疫印迹法检测大鼠背根神经节和脊髓背角GIRK2总蛋白和膜蛋白的表达。最后,采用行为学评价瑞芬太尼输注后,鞘内注射GIRK2特异性激动剂ML297对痛阈的影响。【结果】免疫荧光结果显示,在背根神经节和脊髓背角I-II板层,GIRK2主要与IB4阳性的小神经元及其神经纤维共定位,而瑞芬太尼注射后GIRK2表达显著降低。免疫印迹结果显示,静脉输注瑞芬太尼1 d后,与对照组相比,背根神经节GIRK2总蛋白(0.47±0.10 vs.1.01±0.17,P<0.001)和膜蛋白(0.47±0.11 vs.1.06±0.12,P<0.001)表达水平均显著减少;与背根神经节结果相一致的是,脊髓背角GIRK2总蛋白水平(0.52±0.09 vs.1.10±0.08,P<0.001)和膜蛋白表达水平(0.54±0.10 vs.1.01±0.13,P<0.001)也显著降低。行为学结果显示,与生理盐水组相比,在瑞芬太尼处理大鼠,ML297延长热撤足潜伏期的作用显著降低(P<0.001)。【结论】持续静脉输注瑞芬太尼可能通过诱导大鼠背根神经节和脊髓背角GIRK2表达下调诱发痛觉过敏。

Gαi1/3对术后认知功能障碍小鼠学习记忆功能的影响

目的通过抑制G蛋白抑制性α亚单位(Gαi)1/3表达,探讨Gαi1/3对术后认知功能障碍(POCD)小鼠学习记忆的影响及可能机制。方法C57/B6小鼠75只,6~7月龄,体重22~27 g,随机分为对照组(C组),POCD组(P组),shGαi1+POCD组(P1组),shGαi3+POCD组(P2组),shGαi1/3+POCD组(P3组)各15只。降C组外,各组均海马区立体定位注射,P组为慢病毒空载体,P1组慢病毒包裹的Gαi1-shRNA,P2组慢病毒包裹的Gαi3-shRNA,P3组慢病毒包裹的Gαi1/3-shRNA。立体定位注射后第6天采用异氟烷吸入构建POCD模型。C组不进行药物及手术干预。立体定位注射后第7天用Western印迹(WB)法测定海马区Gαi1/3表达;用避暗实验,Morris水迷宫试验方法测定小鼠学习记忆功能。结果立体定位注射慢病毒Gαi1/3后小鼠海马区Gαi1和Gαi3蛋白表达明显减少(P<0.05);避暗实验示:与P组比较,P1组和P2组避暗潜伏期无明显变化(P>0.05),而P3组避暗潜伏期显著缩短(P<0.05);定位航行实验显示:与P组比较,P3组潜伏期显著延长(P<0.05)。空间探索实验结果表明:与P组比较,P1组和P2组第一次到达原平台所在位置时间无明显变化,穿越原平台次数无显著差异(P>0.05),而P3组第一次到达原平台所在位置时间显著延长,穿越原平台次数显著减少(P<0.05)。结论同时抑制海马区Gαi1和Gαi3蛋白表达可以加重POCD小鼠认知功能障碍,而单独抑制Gαi1或Gαi3对POCD小鼠认知功能无明显改变。

Gαi2对脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的探讨分析抑制性G蛋白仪2亚单位（Gαi2）在大鼠脑缺血-再灌注损伤模型海马中的表达及其对神经细胞内钙离子浓度和凋亡的影响。方法将90只SD大鼠随机（随机数字法）分为假手术组（ss组，n=30）、脑缺血-再灌注损伤组（IR组，n=30）。脑缺血-再灌注且脑室内微量灌注Gαi2活性抑制剂百日咳毒素（PT）组（胛组，n=30）；用免疫组化、Westernblotting分别测定大鼠脑缺血-再灌注后6h、12h、24h各组中海马神经内Gαi2的表达，采用流式细胞术测定各组中海马细胞内游离Ca^2＋浓度的平均荧光值，TUNEL法检测神经元细胞的凋亡。结果不同时间点，IR组Gαi2含量和Ca^2＋浓度较SS组明显增高（P〈0．01），PT组Ca^2＋浓度较IR组升高（P〈0．01），PT组神经细胞凋亡率较IR组升高（P〈0．05）。结论Gαi2在大鼠脑缺血-再灌注损伤中表达明显增高，并可降低缺血神经细胞内的钙离子浓度，减少神经细胞的凋亡，对缺血神经细胞具有保护作用。