人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在Pichia pastoris中的表达

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）基因，与ｐＰＵＣ１８重组，经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析，获得全长人ＰＡＩ－２基因．ＰＡＩ－２基因与表达载体ｐＰＩＣ９重组，构建受乙醇氧化酶１基因（ＡＯＸ１）启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒，转化ＧＳ１１５宿主菌，经表型筛选和ＰＣＲ扩增筛选阳性克隆，用甲醇诱导表达，重组ＰＡＩ－２以分泌型表达，占分泌总蛋白的３０％，具ＰＡＩ－２抗原性，与低分子量尿激酶形成了抗ＳＤＳ复合物，具抑制纤溶的活性（９１．４ＡＩＵ／ｍｌ）．对培养条件也进行了探讨．

银杏蜜环对ACS患者血清基质金属蛋白酶及其抑制物水平的影响

目的 探讨银杏蜜环对急性冠脉综合征(ACS)患者血清基质金属蛋白酶及其抑制物水平的影响,为临床预防及治疗急性冠脉综合征提供新的方向。方法 收集66例急性冠脉综合征患者,随机分成两组,每组各33例,两组患者均接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI),以银杏蜜环口服液治疗组为实验组,未服用上述药物组为对照组,其余治疗均一致,分析两组患者治疗前后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织型基质金属蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)变化情况,探讨银杏蜜环对上诉指标的影响。结果 两组患者行PCI治疗后MMP-9、hs-CRP指标水平较手术前均明显下降,TIMP-2较术前明显升高,实验组使用银杏蜜环口服液后MMP-9、TIMI-2指标较对照组变化更为明显,以上实验结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论 银杏蜜环口服液可以降低MMP-9水平和升高TIMP-2水平,提示银杏蜜环口服液在ACS的预防和治疗中具有一定作用。

PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性

目的 研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法 分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细胞,RT-PCR鉴定,筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株。用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性,并利用计算机同源模建,比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化。结果 突变体PAI-2M能抑制TNF-α诱导的Hela细胞凋亡,而PAI-2D则不能。PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象,而PAI-2D CD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化。结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性,而与PENF结构域(PENF73～76)无关。

PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性

目的 为了进一步了解纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在细胞内的定位对其抗凋亡活性的影响。方法 构建绿色荧光蛋白质(EGFP)与PAI-2入核突变体融合蛋白质的表达质粒;转染HeLa细胞,荧光显微镜下比较野生型PAI-2与PAI-2的入核突变体在HeLa细胞内分布的差异;用MTT法检测PAI-2入核突变体抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导细胞凋亡的活性。结果 在核定位序列的引导下,几乎所有的PAI-2都进入了细胞核,而野生型PAI-2则弥散分布于HeLa细胞内。MTT法检测发现,当PAI-2被定位于细胞核内时,丧失其抗凋亡的功能。结论 PAI-2在细胞内的定位能影响其抗凋亡的活性,并且当用TNF-α诱导HeLa细胞凋亡时,野生型PAI-2在细胞内的分布没有发生明显的改变。

氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织TIMP2 mRNA表达的影响

【目的】研究实验性糖尿病大鼠肾组织 2型金属蛋白组织抑制物 (TIMP2 )mRNA表达的变化及氯沙坦对它的影响。【方法】纯种雄性Wistar大鼠分为 3组 ,正常对照组 (11只 ) ,糖尿病大鼠无干预组 (11只 ) ,糖尿病大鼠氯沙坦 (血管紧张素Ⅱ 1型受体阻断剂 )干预组 (9只 )。链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型。饲养 18周后取出肾以RT PCR检测TIMP2mR NA表达 ,电镜检测大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度 (系膜基质面积 /系膜面积 ) ;收集 2 4h尿测定尿白蛋白排泄(UAE)。【结果】肾组织TIMP2mRNA表达糖尿病大鼠无干预组 (0 73± 0 37)显著高于正常对照组 (0 32± 0 19) (P <0 0 5 ) ,糖尿病大鼠氯沙坦干预组 (0 34± 0 17)显著低于糖尿病大鼠无干预组 (P <0 0 5 )。UAE(2 18± 1 98)mg/d、基底膜厚度 (5 31 6± 10 7 6 )nm及系膜基质密度 5 6± 7,糖尿病大鼠无干预组显著高于正常对照组 (P <0 0 5 ) ;糖尿病大鼠氯沙坦干预组UAE(0 6 5± 0 89)mg/d、基底膜厚度 (316 6± 33 3)nm及系膜基质密度 35± 7均显著低于糖尿病大鼠无干预组 (P<0 0 5 )。【结论】发生糖尿病肾病糖尿病大鼠 ,肾组织TIMP2mRNA表达明显增加 ,氯沙坦干预能延缓糖尿病肾病发生并降低TIMP2mRNA表达 。

氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP及TIMP2 mRNA表达的影响

目的观察糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶(MT3-MMP)及组织2型金属蛋白酶抑制物(TIMP2)mRNA表达的变化及氯沙坦对它们的影响。方法建立糖尿病大鼠模型并将之分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、糖尿病+氯沙坦组(C组)。饲养18周后取出肾脏以RT-PCR法检测MT3-MMP、TIMP2及TGF-β1mRNA的表达,电镜观察大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度(系膜基质面积/系膜面积),收集24h尿检测尿白蛋白。结果B组大鼠肾组织MT3-MMPmRNA、TIMP2mRNA和TGFβ1mRNA表达以及均显著高于A组,C组显著低于B组,但与A组无显著差异。B组尿白蛋白、基底膜厚度及系膜基质密度显著高于A组,C组均显著低于B组。P<0.05。结论氯沙坦治疗可延缓糖尿病肾病的发生,并可抑制糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP及TIMP2mRNA表达。