质粒介导的RNAi抑制端粒酶活性

为了探讨靶向人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(s iRNA)表达载体是否具有抑制H eL a细胞端粒酶活性的能力,人工合成2条64个核苷酸(n t)的片段,其中19n t与hTERT基因1789-1807位碱基同源,将其退火、连接到质粒pSU PER中,构建pSU P-hTE。在pSU P-hTE基础上,把该质粒的启动子和64n t插入片段酶切、克隆到质粒pEGFP-C 1中生成pEGFP-hTE,从而获得新霉素抗性筛选质粒。将pEGFP-hTE用脂质体转染H eL a细胞,G 418筛选后获得抗性克隆并将其收获、传代,用不同方法检测hTERT的mRNA和蛋白表达水平、H eL a细胞的端粒酶活性以及细胞的增殖能力。结果显示,pEGFP-hTE转染的H eL a细胞与对照组比较,hTERT的mRNA水平下降及蛋白表达减少、细胞端粒酶活性降低38%,但细胞增殖能力没有明显改变。以上结果表明,pEGFP-hTE能通过RNA干扰(RNA i)途径特异性抑制H eL a细胞hTERT基因的表达,从而有效抑制细胞端粒酶活性,这可能将为肿瘤生物治疗提供一条新的途径。

茶多酚对肝癌细胞生长及端粒酶活性抑制的研究

目的 探讨茶多酚在体外对肝癌细胞 BEL- 740 2生长的抑制作用及抗癌机制。方法 MTT法测定茶多酚的对人肝癌细胞生长抑制作用 ,集落形成实验观察药物的诱导分化作用 ,PCR-ELISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。结果 茶多酚能抑制肝癌 BEL- 740 2细胞的增殖 ,其 IC50 为1 5 0μg/ml,且具有诱导分化作用 ,可降低端粒酶活性的表达 ,对 p5 3具有下调作用。结论 茶多酚具有体外抗肿瘤活性 ,其抗癌机制可能是通过抑制端粒酶的活性而实现的。

针对端粒酶的HDV核酶的设计及其对端粒酶活性抑制研究

设计针对端粒酶的HDV核酶,观察其对端粒酶活性抑制。设计和合成了针对端粒酶组分的HDV核酶的序列,构建了该核酶的体外转录和真核表达质粒,检测了HDV核酶对端粒酶组分的体外切割效力和对端粒酶活性的抑制作用。核酶对底物的最大剪切效率为70.4％。导入细胞后,使端粒酶活性下降90％。HDV核酶(g.RZ57)对端粒酶活性有抑制作用,可望成为有效的肿瘤治疗抑制剂。

端粒酶活性抑制与肿瘤治疗的研究

端粒酶是一种核糖蛋白，包括人端粒酶ＲＮＡ、端粒酶相关蛋白和端粒酶催化蛋白亚单位三个主要组成部分，可向染色体末端添加端粒ＤＮＡ序列。端粒酶在８５％～９５％的恶性肿瘤组织中有阳性表达，而正常体细胞则一般阴性，是进行肿瘤基因治疗的理想靶点。目前以抑制端粒酶活性为划点的肿瘤治疗研究较多，其主要策略有：①阻断人端粒酶ＲＮＡ的模板作用；②抑制端粒酶催化蛋白亚单位；③核苷类似物竞争性抑制反转录过程；④细胞分化诱导剂抑制端粒酶活性；⑤对细胞内调节机制进行调控；⑥其它抑制剂对端粒酶活性的调节。

端粒酶活性抑制与肿瘤研究进展

端粒酶是一种核糖蛋白酶,它主要由人端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白(TELPI)和人端粒酶催化蛋白亚单位(hTERT)三部分组成;端粒酶能够以自身携带的DNA为模板,不断合成新的端粒DNA序列,添加到染色体末端,以弥补端粒的丢失阻止端粒的缩短,使得细胞逃脱程序性死亡(凋亡),或者获得无限增殖能力而永生化[1].因此,端粒酶对维持端粒的长度并保持生理功能作用具有重要意义.目前研究认为:TELPI是端粒酶合成的模板;TPI是端粒酶的蛋白成分之一,其功能尚不清楚,有人认为可能其TELPI基因经转录后修饰可调节端粒酶活性;hTERT作为端粒酶催化亚单位,具有逆转录酶活性,以hTR为模板,向染色体末端添加末端序列,是端粒酶活性调节的重要因子[2].

小牛血清浓度对胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性及端粒酶活性抑制剂实验结果影响

目的 了解小牛血清 (FBS)浓度胃癌SGC - 790 1细胞端粒酶活性及端粒酶抑制剂实验结论影响。方法 取用不同浓度新生小牛血清培养的SGC - 790 1细胞和收集高浓度 (40×IC50 )顺铂分别作用于含 1 0 %、2 0 %新生小牛血清培养 4h、2 8hSGC - 790 1细胞 ,用TRAP—ELISA法测定收集细胞端粒酶活性。结果 含不同小牛血清浓度培养液培养SGC - 790 1细胞端粒酶活性不同 ,高浓度顺铂能抑制不同浓度小牛血清培养的SGC - 790 1细胞端粒酶活性。结论 小牛血清浓度对端粒酶活性有影响 ,端粒酶活性随小牛血清浓度增加而增加 。

端粒酶抑制与肿瘤治疗的研究进展

端粒酶的激活与肿瘤的发生、发展密切相关。尽管端粒酶在癌变过程中作用的分子机制尚未完全阐明,但大量实验证实端粒酶是一个理想的肿瘤治疗靶点。近年来人们尝试了许多方法抑制肿瘤细胞端粒酶活性,所产生的肮肿瘤作用并不完全一致。抑制肿瘤细胞端粒酶活性诱导细胞周期阻滞和(或)凋亡主要表现为两种形式即迟发型和即发型。此外,端粒酶活性抑制可以增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。阐明端粒戴帽状态及端粒酶作用分子机制,建立针对端粒酶的高通量药物筛选法以及应用人癌动物移植模型进行体内药物抗瘤活性评价是端粒酶抑制剂开发中的三大方面。

对羟基苯甲酸-4-β-D-2’,3’,4’,6’-四乙酰葡萄糖甙-1-D-2’,3’,4’,6’-四乙酰葡萄糖酯的合成研究

端粒酶被认为是恶性肿瘤诊断和治疗的新耙标 ,对端粒酶有强抑制活性的对羟基苯甲酸 4 β D 2’ ,3’ ,4’ ,6’ 四乙酰葡萄糖甙 1 D 2’ ,3’ ,4’ ,6’ 四乙酰葡萄糖酯的合成进行了研究 .通过采用丙酮法和相转移催化进行比较 ,可知相转移催化法收率更高 ,以葡萄糖计总收率可达到 2 1% .所得的产物结构经元素分析、红外光谱、核磁共振谱所证实 .