人抑制素βB亚基单克隆抗体的制备和鉴定

目的：人抑制素βＢ亚基单克隆抗体（单抗）的制备和鉴定。方法：以化学合成人抑制素βＢ（１－ ２８） 和（８５－１１５）多肽片段和粗提猪卵泡抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，经细胞融合与筛选，得到分泌单抗的细胞株，诱生腹水后采用特定的免疫学方法进行鉴定。结果：获得４ 株能分泌单抗的细胞株，ＥＬＩＳＡ 检测腹水效价为１ ×１０－４ ～１ ×１０－ ６，与α、βＡ亚基片段及其他多肽激素无交叉反应，３ 株ＭｃＡｂ（ 抗ＩＮＨβＢ（８５－ １１５）） 识别同一抗原位点。相对亲和力３Ｅ８＞５Ｅ１１＞７Ｂ９。腹水中的抗体能明显地被人卵泡液，猪卵泡液和βＢ（８５ －１１５）ＢＳＡ 中和而呈抑制曲线。

人抑制素βB亚基片段的合成及其单克隆抗体的制备

目的 合成人抑制素 βB亚基两个片段 βB(1 2 8) (GLECDGRTNLC CRQQFFIDFRLIGWNDW ) ,βB(85 115 ) (LSTMSMLYFDDEYNIVKRDVPNMIVEECGCA)并制备其单克隆抗体。方法 应用固相多肽合成法人工合成了 2个 βB亚基片段 ,以化学合成的片段作为半抗原 ,经抗原的制备、单抗的制备获得 4株杂交瘤细胞株。单抗的鉴定及特异性分析实验表明这些单克隆抗体具有特异性 ,敏感性和实用性。对抑制素α,βA ,βB亚基的单抗进行了进一步的纯化。用纯化后的单抗进行了乳腺癌的免疫组化研究。结果 相关肿瘤组织对各亚基单抗的免疫组化反应无明显差异 ;乳腺癌对各亚基单抗的免疫组化反应阳性率无明显差异。

雌核发育一代翘嘴鲌抑制素βB基因SNP筛选及其与生长性状的关联性分析

【目的】抑制素属于转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)超家族成员,该超家族的多个基因均已证明直接或间接与肌肉生长发育相关。研究探讨了翘嘴鲌(Culter alburnus)抑制素βB基因(inhibinβB,INHBB)的多态性及其与雌核发育一代翘嘴鲌群体生长性状的关联性,为揭示抑制素βB基因对翘嘴鲌生长发育的影响奠定基础。【方法】实验通过翘嘴鲌转录组数据库设计引物,扩增抑制素βB基因的外显子序列,利用直接测序法获得2个单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNPs)。然后通过四引物扩增受阻突变体系PCR(tetra-primer amplification refractory mutation system PCR,tetra-primer ARMS PCR)技术,对144个雌核发育一代翘嘴鲌样本的SNP位点进行分型,并将SNP位点基因型与翘嘴鲌7个形态性状(体长、体质量、体厚、体高、全长、尾柄长、尾柄高)进行关联性分析。【结果】优化PCR反应条件后,在退火温度为61.5℃,内、外引物各浓度比例为2∶1时,c.717G>T位点得到良好的分型结果;在退火温度为58.8℃,内、外引物各浓度比例为1∶1时,c.778G>A位点得到良好的分型结果。抑制素βB基因c.717G>T位点和c.778G>A位点不同基因型与7个生长性状之间都存在显著差异(P<0.05)。其中,c.717G>T位点GG基因型和c.778G>A位点GG基因型是与翘嘴鲌生长性状有关的有利突变。一般线性模型分析了这2个SNP位点的3种高频率双倍型(分别为双倍型D1、D2和D3),结果表明双倍型D1和D2的7个生长性状指标均显著高于双倍型D3(P<0.05)。【结论】抑制素βB基因c.717G>T位点和c.778G>A位点均具有作为雌核发育一代翘嘴鲌分子标记辅助选育的潜力,而且c.778G>A位点GG基因型对雌核发育一代翘嘴鲌生长性状的影响更加显著,研究可以为翘嘴鲌分子育种提供新的分子标记。

仙居鸡抑制素/活化素β_B亚基成熟区cDNA的克隆及序列分析

根据发表的哺乳类抑制素 /活化素 βB亚基 c DNA序列设计引物 ,运用 RT- PCR技术从仙居鸡卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素 /活化素βB亚基成熟区序列 ,并进行了克隆和测序。结果显示 ,鸡成熟βB亚基是由 115个氨基酸(aa)残基组成的蛋白质 ,具有 9个半胱氨酸残基 ,与发表的哺乳类相应序列对比 ,其核苷酸序列的同源性为 79.7%～82 .9%,其编码氨基酸序列的同源性为 95 .7%～ 98.3%。 βB亚基成熟区半胱氨酸残基的数目和位置与发表的哺乳类相同。说明该亚基的序列及结构在不同物种间具高度保守性 ,提示抑制素 /活化素 βB亚基可能具重要的生理功能。

抑制素βB在鼻咽癌和肺腺癌中的表达及意义

目的研究抑制素βB(INHBB)在鼻咽癌和肺腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法回顾性收集在湖南省脑科医院(湖南省第二人民医院)经活检病理确诊的39例鼻咽癌组织和16例慢性鼻咽炎组织的石蜡标本,以及经手术切除的30例肺腺癌患者的癌组织和癌旁组织的石蜡标本,采用免疫组织化学SP法检测INHBB在鼻咽癌和肺腺癌组织中的表达,同时分析其与临床病理指标的关系。结果INHBB在鼻咽癌组织中的表达低于慢性鼻咽炎组织(51.28%vs 81.25%,P=0.039),且鼻咽癌患者的INHBB表达与淋巴转移(P=0.026)和临床分期(P=0.039)有关;INHBB在肺腺癌组织的表达水平显著高于癌旁组织(86.67%vs 23.33%,P<0.001),肺腺癌患者的INHBB的表达水平仅与临床分期(P=0.048)有关。结论INHBB的表达可能与鼻咽癌和肺腺癌疾病的进展有关,有望成为新型的诊断生物标志物。

绵羊INHBB、SMAD4和FGF18基因的双荧光素酶载体构建及其与miR-370-3p的靶向验证

为研究绵羊输卵管功能相关的oar-miR-370-3p与抑制素亚基βB(inhibin subunit beta B,INHBB)、SMAD家族成员4(SMAD family member 4,SMAD4)和成纤维细胞生长因子18(fibroblast growth factor 18,FGF18)基因之间的靶向关系,本研究对多个物种(绵羊、人、小鼠、大鼠、猕猴、豚鼠和兔)中miR-370-3p的序列进行了比对,利用RNAhybrid程序预测绵羊miR-370-3p与INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR可能存在的结合位点,随后分别构建INHBB、SMAD4和FGF18基因3′UTR的野生型和突变型双荧光素酶载体,并将其与miR-370-3p mimics、mimics NC共转染至HEK293T细胞,检测双荧光素酶活性。结果表明,绵羊miR-370-3p序列与其他6个物种不同,但具有一定的保守性。RNAhybrid程序预测到oar-miR-370-3p与INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR存在结合位点。PCR扩增结果和测序结果表明,INHBB、SMAD4和FGF18基因3′UTR的野生型和突变型载体构建成功。共转染INHBB、SMAD4和FGF18野生型载体和miR-370-3p mimics的双荧光素酶活性极显著或显著低于相应的对照组(P<0.01;P<0.05);而3种突变型载体和miR-370-3p mimics共转染的双荧光素酶活性均与相应的对照组无显著差异(P>0.05)。表明INHBB、SMAD4和FGF18基因的3′UTR区域均能与miR-370-3p结合并抑制双荧光素酶活性,验证了INHBB、SMAD4和FGF18基因均是miR-370-3p的靶基因,为进一步研究oar-miR-370-3p影响绵羊输卵管功能与绵羊繁殖力的分子机制提供依据。