微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

喉癌患者细胞凋亡抑制蛋白1的表达情况及预后影响因素

目的探讨喉癌患者喉癌组织细胞凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)的表达情况及影响患者预后的因素。方法回顾性分析60例喉癌患者的临床资料,采集患者术后喉癌组织与癌旁组织病理切片,采用免疫组织化学法测定c-IAP1的表达情况。比较喉癌患者喉癌组织与癌旁组织中c-IAP1的表达情况,以及不同预后患者喉癌组织中c-IAP1的表达情况。采用多因素COX回归模型分析影响喉癌患者预后的因素。结果喉癌组织中c-IAP1高表达率高于癌旁组织(P<0.05)。本组60例患者中,预后不良42例(70.00%),预后良好18例(30.00%),预后不良患者喉癌组织c-IAP1高表达率高于预后良好患者(P<0.05)。多因素COX回归分析结果显示,c-IAP1表达情况、组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移情况、临床分期是喉癌患者预后的影响因素(均P<0.05)。结论喉癌患者喉癌组织中c-IAP1阳性表达率升高,c-IAP1表达情况、组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移情况、临床分期是喉癌患者预后的影响因素。

金粉蕨素抑制氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡

研究金粉蕨素对氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡的影响及可能机制。用过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞株ECV304,制备内皮细胞凋亡模型。应用四甲基偶氮唑盐还原法观察细胞活性;流式细胞术和Tunel法检测细胞凋亡率;用Western blot检测细胞天冬氨酸凋亡蛋白酶3活性。结果发现,金粉蕨素(0.3、1和3 μmol/L)呈浓度依赖性地增加内皮细胞活性,显著降低细胞凋亡率(15.5％±1.2％、12,6％±0.9％、8.2％±0.8％比22.7％±3.9％,P<0.05);同时金粉蕨素(3 μmol/L)抑制过氧化氢诱导天冬氨酸凋亡蚤白酶3的活化,与阳性对照药金雀异黄酮作用强度相似。结果提示,金粉蕨素拮抗氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡可能与抑制天冬氨酸凋亡蛋白酶3活化有关。

地塞米松对脑缺氧缺血新生大鼠细胞凋亡抑制蛋白1 mRNA及Caspase-3活性的影响

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后细胞凋亡抑制蛋白1(cIAP1)基因表达、Caspase-3活性的变化及地塞米松(DEX)对其影响,阐明DEX预处理对HIBD神经保护的可能机制。方法7日龄SD大鼠24只,随机分成DEX组、9g/L盐水组(NS组)、HIBD组、健康对照组。DEX、NS、HIBD组大鼠采用Rice方法制备HIBD模型。DEX和NS组在缺氧缺血前12h腹腔内分别注射DEX、等量9g/L盐水。取HIBD动物模型实验侧大脑半球,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测cIAP1基因表达,比色法测定Caspase-3活性。结果与健康对照组比较,HIBD组大鼠cIAP1基因表达明显下降(P<0.01),Caspase-3活性明显上升(P<0.01)。与HIBD组比较,DEX组cIAP1基因表达明显上升,而Caspase-3活性明显下降。结论脑缺氧缺血可导致cIAP1基因表达下调,Caspase-3活性升高。DEX能通过上调cIAP1基因表达,抑制Caspase-3活性,抑制细胞凋亡,起到神经保护作用。

肝癌及其癌旁组织中细胞凋亡抑制蛋白survivin的表达

目的:分析细胞凋亡抑制蛋白survivin在原发性肝癌(HCC)及其癌旁组织中的表达,探讨其在肿瘤血管形成和抵抗肿瘤血管内皮细胞凋亡中的作用。方法:采集HCC癌组织、癌旁组织和正常肝组织标本,通过免疫组织化学方法分析survivin蛋白表达阳性率与HCC病理参数的关系,采用流式细胞术分析survivin蛋白在不同组织中的表达水平,用荧光定量PCR方法分析不同组织中survivin基因的表达水平。结果:survivin蛋白在肝癌组织中表达水平与门静脉癌栓的形成有关联(P<0.05),与肿瘤大小、包膜、甲胎蛋白(AFP)水平及HCC病理分期均无关联(P>0.05);流式细胞术结果,肝癌组织中survivin蛋白表达水平高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.05),癌旁组织中survivin蛋白表达水平高于正常肝组织,但差异无统计学意义(P>0.05);荧光定量PCR检测,survivin基因只在肝癌组织中表达,在癌旁组织和正常肝组织中无表达,其表达水平组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:细胞凋亡抑制蛋白survivin在肝癌组织中表达水平较高,但在癌旁组织中检测不到其基因的表达,survivin蛋白可能是通过旁分泌作用从肝癌病变处进入癌旁组织细胞中发挥抑制细胞凋亡的功能。

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时细胞凋亡抑制蛋白1的变化

目的 探讨在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)细胞凋亡抑制蛋白 1(cIAP1)的变化。方法 建立新生大鼠HIBD动物模型 ,采用RT PCR技术检测缺氧缺血 (HI)后不同时间点缺血侧脑组织中cIAP1基因表达的变化。结果 正常组中有cIAP1基因表达 ,HI组cIAP1基因表达明显下调 ,且随HI后时间的延长 ,cIAP1基因表达在HI后 6h开始下调 ,2 4h下调最明显 ,4 8～ 72h有所回升。

2-氨基噻唑衍生物的设计、合成及对细胞凋亡的抑制活性

目的研究2氨-基噻唑衍生物对神经细胞凋亡的抑制作用和构效关系。方法以PFTα-为先导物,设计并合成出相应的2-氨基噻唑衍生物,利用MTT法和FCM法测定其对由过氧化氢诱导产生的PC12细胞凋亡的抑制作用,利用Cerius2的QSAR+模块,求出其QSAR方程。结果合成了11个新型含2氨-基噻唑母环的Sch iff碱化合物II,利用IR,MS,1H NMR,13C NMR等法对上述化合物进行表征。细胞实验结果表明,2氨-基噻唑衍生物对PC12细胞具有一定的保护作用并对由过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡具有一定的抑制作用。优化QSAR方程为Activity=6.947 68-0.088 72דLUMO”-0.043 018דA logp98”-0.128 752דRad0 fG ration”+0.018 246דD ipole-m ag”,上述方程的相关统计参数如下,r2=0.970,F-test=49.149,r=0.985,Lse=0.001。结论2氨-基噻唑衍生物对由过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡具有较为明显的抑制作用,部分化合物如I-6,I-9和II-6对于PC12细胞具有细胞保护和细胞凋亡抑制双重活性。QSAR方程提示降低化合物的旋转半径以及化合物最低空轨道的能量有利于提高化合物的活性。

细胞凋亡抑制基因免疫对小鼠生长及生长激素的影响

本实验用细胞凋亡抑制基因 (bcl- 2 )JLV重组质粒 (JLV -bcl)免疫小鼠 ,测定免疫后小鼠的生长及血浆GH浓度。结果表明 ,经bcl- 2免疫后实验组小鼠体重均低于对照组 ,在 7～ 8周龄时实验A组小鼠体重与对照组存在显著差异 (P <0 .0 5)。用RIA双抗法检测血浆中生长激素 (GH)浓度 ,发现在首免后 3周实验A组小鼠的GH浓度显著低于对照组 (P <0 .0 5)。这些结果均提示bcl- 2基因与小鼠生长有关 ,如果用基因治疗的方法增加bcl-

宫颈癌患者miR指标与细胞凋亡促进因子、抑制因子表达的关系探究

目的:探究宫颈癌患者miR指标与细胞凋亡促进因子、抑制因子表达的关系。方法:选取2019年6月-2020年7月本院收治的60例宫颈癌患者作为观察组,同时期60例子宫肌瘤患者作为对照组。检测与比较两组组织miR指标(miR-19a、miR-34a)与细胞凋亡促进因子(Bax、caspase-3及caspase-7)、抑制因子(Bcl-2、Fas及FasL),并比较观察组不同分期、病理分级及淋巴结转移情况患者的检测结果,采用Pearson相关性分析miR指标与上述细胞凋亡促进因子、抑制因子的关系。结果:观察组组织miR-19a、细胞凋亡抑制因子均显著高于对照组,组织miR-34a、细胞凋亡促进因子均显著低于对照组,观察组不同分期、病理分级及淋巴结转移情况患者检测结果比较,差异均有统计学意义(P<0.001),Pearson相关性分析显示,宫颈癌组织miR-19a与细胞凋亡抑制因子呈正相关,与细胞凋亡促进因子呈负相关(P<0.05);宫颈癌组织miR-34a与细胞凋亡抑制因子呈负相关,与细胞凋亡促进因子呈正相关(P<0.05)。结论:宫颈癌患者组织miR指标与细胞凋亡促进因子、抑制因子均呈现异常表达的状态,且其之间有密切的关系,因此在宫颈癌患者中的检测价值较高。

细胞凋亡抑制因子在老年慢性心力衰竭中的变化及临床意义

目的观察细胞凋亡抑制因子(Fas/APO-1)在老年慢性心力衰竭(CHF)患者中的变化及血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)苯那普利(商品名:洛丁新)治疗对Fas/APO-1的影响。方法选择CHF患者54例,随机分为:A组(26例)即常规治疗组,给予常规抗心力衰竭治疗;B组(28例)在常规治疗基础上加用洛丁新(10 mg,qd)治疗2周,分别于治疗前后采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA法)测定血清Fas/APO-1水平,采用超声心动图诊断方法测定左心室收缩末径(LVESD)、左心室舒张末径(LVEDD)和左心室射血分数(LVEF)等。另设健康对照组(C组)20例。结果心力衰竭患者血清Fas/APO-1水平明显高于健康对照组,洛丁新治疗2周后,较常规治疗组血清Fas/APO-1水平明显下降,LVESD和LVEDD明显减低,SV和LVEF明显升高,差异均有显著性;Fas/APO-1水平与LVEF呈负相关。结论洛丁新可明显改善CHF患者心肌重塑与心功能,其作用机制可能与降低血清Fas/APO-1水平有关。

TFPI基因转染对血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白的调控

目的研究组织因子途径抑制物(TFPI)基因转染对大鼠血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白(IAP)表达的影响,探讨TFPI诱导细胞凋亡的可能机制。方法将含有人TFPI基因的重组腺病毒或含β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的重组腺病毒或DMEM在体外分别转染大鼠血管平滑肌细胞,用ELISA方法测定转染后细胞中TFPI蛋白的表达水平,用RT-PCR方法测定基因转染后不同时间点细胞中c-IAP1mRNA的表达,用Western-blot方法检测基因转染后不同时间点细胞中survivin的表达。结果基因转染后1天在血管平滑肌细胞中即可检测到TFPI蛋白表达,峰值出现在转染后第3天;基因转染后3天和7天,TFPI组c-IAP1 mRNA的表达与对照组相比明显减少(P<0.05);基因转染后3、5、7天,TFPI组survivin的表达与对照组相比明显减少(P<0.05),且具有明显的时间依赖性。结论 TFPI可能通过抑制IAP的表达来发挥诱导平滑肌细胞凋亡的作用,从而抑制冠状动脉介入治疗后再狭窄发生。

细胞凋亡抑制因子在心肌梗死急性期的动态变化

目的:观察并分析心肌梗死急性期,细胞凋亡抑制因子(Fas/APO-1)的动态变化和临床意义.方法:41例急性心肌梗死患者,分别于发病24小时内、7天和2～4周3个时间段采血.34例年龄和性别相匹配的健康人作为对照.并以60岁为界分两个年龄组,比较不同时间段Fas/APO-1水平的差异.应用ELISA的方法,检测血清中Fas/APO-1的水平.结果:心肌梗死急性期3个时间段的Fas/APO-1水平均明显高于对照组(P<0.05),但以梗死后24小时Fas/APO-1的水平为最高.60岁以上组Fas/APO-1的水平高于60岁以下组,但只有梗死后24小时,两组的结果有统计学意义(P<0.05).结论:在心肌梗死急性期中血清Fas/APO-1的变化趋势与心肌细胞凋亡的变化规律相近.年龄对心肌急性期血清中Fas/APO-1水平有一定影响,这种影响以心肌梗死24小时为著.

细胞凋亡抑制基因bcl-2在牙源性病损中表达的研究

目的 观察凋亡相关基因bcl- 2在成釉细胞瘤 (Ameloblastoma,AB)和牙源性角化囊肿 (OdontogenicKeratocyst,OKC)中的表达 ,探讨其与AB和OKC的生物学意义。方法 应用免疫组化法 (S -P)检测 75例AB(原发 31例 ,复发 37例 ,恶变 7例 ) ,35例OKC及 9例口腔正常粘膜。同时采用原位杂交法检测了 2 0例AB(12例原发 ,8例复发 ) ,12例OKC中的bcl- 2mRNA。结果 88% (6 6 / 75 )AB ,74.2 % (2 6 / 35 )OKC ,44 .4% (4 / 9)正常口腔粘膜有bcl- 2蛋白表达 ,三组间相比差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。同样在原发组AB 77.4% (2 4/ 31) ,复发组AB94.5 % (35 / 37) ,恶性组AB10 0 % (7/ 7)。bcl- 2阳性率及阳性强度随着组织学分级变化而增加 ,组间统计 (P <0 .0 5 )。在 2 0例AB及 12例OKC中bcl- 2mRNA表达趋势与bcl- 2蛋白的表达是相一致的 (P <0 .0 1)。bcl- 2阳性表达与AB不同组织学分型 ,病损发生部位 ,肿瘤生长方式 (单房与多房 )无关 (P >0 .0 5 )。bcl- 2在病变中表达的特征为AB的外周层细胞为强表达 ,星网状层有阳性表达 ,随着细胞增殖分化呈实性片状时bcl- 2表达增强 ,角化退变样细胞 ,颗粒性变细胞表达缺失。OKC中多在基底层细胞中表达。结论 ①bcl- 2在AB及OKC的发生、发展及细胞分化与增殖中起着重要作用。

老年心力衰竭患者核因子-κB活化与细胞凋亡抑制因子的相关性研究

目的探讨充血性心力衰竭(CHF)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中核因子-κB(NF-κB)表达与细胞凋亡抑制因子(CD95)分泌的相关性。方法采用凝胶电泳迁移率变动分析法(EMSA)测定60例心力衰竭患者和20例健康对照组PBMCs NF-κB的表达,用双抗体夹心ABC-ELISA法测定CD95,多普勒超声心动图测定患者的心功能。结果心力衰竭患者PBMCs NF-κB活性和血清CD95含量显著高于健康对照组(P<0.01),且NF-κB和血清CD95含量呈正相关(P<0.05)。结论CHF患者NF-κB表达增高,CD95分泌增多。在CHF,可能通过NF-κB表达的上调促进CD95的分泌。

细胞凋亡抑制因子在心肌病血清中的表达

目的探讨细胞凋亡抑制因子对心肌病的影响和作用机制。方法运用细胞免疫学方法,检测了66例心肌病患者细胞凋亡抑制因子APO-1/Fas和调节因子IL-6,TNFa等指标。结果心肌病各组APO-1/Fas,IL-6,TNFa等指标较对照组有不同程度升高,心功能愈差,升高愈明显。结论APO-1/Fas,IL-6,TNFa等细胞凋亡抑制因子在心肌病细胞凋亡病变中有明显抑制或调节作用。

细胞凋亡抑制蛋白:IAP家族

IAP家族 (InhibitorofApoptosisfamilyofproteins,IAPs)为一类内源性细胞凋亡抑制蛋白 ,在许多物种中起着阻止细胞凋亡的作用。IAPs主要通过抑制caspase ,参与TNFR介导的信号转导 ,与NF κB相互作用发挥抗细胞凋亡作用。IAPs可能与肿瘤发展、神经变性病以及缺血再灌注损伤有一定关系。

乙肝相关性肝癌组织中细胞凋亡蛋白抑制因子2蛋白的表达变化及其意义

目的探讨乙肝相关性肝癌组织中细胞凋亡蛋白抑制因子2(inhibitor of apoptosis protein 2,IAP2)蛋白的表达变化及其意义。方法选取2015年1月至2017年6月河南省传染病医院乙肝相关性肝癌术后组织标本80例(A组)、非乙肝相关性肝癌术后组织标本40例(B组)、乙肝相关性肝癌癌旁组织(C组)40例,采用免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blotting)检测三组标本中IAP2蛋白表达,分析乙肝相关性肝癌组织中IAP2蛋白表达与其病理特征的关系。结果A组的IAP2蛋白阳性表达率为76.25%,高于B组的35.00%和C组的30.00%,差异有统计学意义(P<0.05);A组的IAP2蛋白积分光密度累积值高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05);IAP2蛋白阳性表达与乙肝相关性肝癌病人的临床分期、包膜侵犯、门脉侵袭、发生淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论IAP2蛋白在乙肝相关性肝癌组织中表达显著提高,并且与病人的临床分期、包膜侵犯、门脉侵袭、发生淋巴结转移有相关关系。

细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制

目的:旨在探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠(SF)、五味子乙素(Sch B)、菊花(FC)、车前子(SP)对氧化损伤的晶状体上皮细胞(LEC)内Ca2+、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制. 方法:将四种药物与H2O2造成氧化损伤的体外培养牛LEC共同孵育后,进行以下研究:1、采用四甲基偶氮唑兰(MTT)法观察在不同时间和浓度条件下LEC活性的变化.2、采用荧光分光光度法测定不同时间细胞内钙离子浓度([Ca2+]i).3、采用放射免疫法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量.观察药物的剂量效应与时间效应.

多西紫杉醇对人乳腺癌细胞(MCF-7)的增殖抑制及凋亡诱导的研究

目的研究多西紫杉醇对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的影响。方法:将不同浓度的多西紫杉醇作用于人乳腺癌细胞(MCF-7),用四亚基偶氮唑蓝(MTT)快速比色多西紫杉醇对人乳腺癌细胞(MCF-7)的增殖抑制及诱导凋亡的研究法检测其不同时间的浓度依赖效应及时间依赖效应,在光镜下观察多西紫杉醇作用后细胞形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后细胞凋亡及周期的改变。结果多系西杉醇对体外培养的乳腺癌细胞(MCF-7)有明显增殖抑制作用,有浓度及时间依赖效应,光镜观察到典型的细胞凋亡形态。流式细胞仪测到细胞凋亡率随时间增加明显提高,呈时间依赖性。细胞周期变化显示多西紫杉醇可使得G2/M期细胞增多,G2/M期细胞和S期细胞的比值也随剂量呈递增关系,有丝分裂受阻,导致凋亡。结论多西紫杉醇对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖有明显的抑制作用,呈浓度及时间依赖性,并且能诱导癌细胞凋亡。多系紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡与细胞阻滞有密切关系,为临床用药提供可靠的理论依据。