rhBMP-2抑制胶质瘤细胞方式的初步探讨

目的 初步探讨BMP 2抑制胶质瘤细胞的作用方式。方法 在培养的人脑胶质瘤细胞系SHG 4 4中加入rhBMP 2 ,测定生长曲线 ,应用流式细胞仪法分析细胞周期 ,用FITC标记的AnnexinV染色法分析凋亡和坏死的比例。结果 经rhBMP 2作用的SHG 4 4细胞G1期所占比例明显升高 (P <0 .0 1) ;10 μg/ml组中 ,完整细胞 (PI /FITC )比例 (35 .6 % )明显低于 5 μg/ml组 (94 .3% )和对照组 (96 .9% ) (P <0 .0 1) ,坏死细胞(PI+ /FITC + )比例 (5 8.0 % )明显高于 5 μg/ml组 (3.1% )和对照组 (0 .5 % ) (P <0 .0 1)。 结论 在rhBMP \| 2抑制胶质瘤细胞SHG 4 4增殖中 ,诱导其坏死是主要作用 ,其中也有凋亡作用的参与 ;AnnexinV染色法较流式细胞仪法可更加准确的区分正常细胞 ,早、晚期凋亡细胞和坏死细胞。

EGFR反义RNA与p53基因联合转导抑制胶质瘤细胞增殖的体外实验研究

肿瘤的发生、发展是一个多基因参与、多步骤演变的复杂过程。单一的基因治疗的效果并不理想。为此有必要将相互间有叠加或协同效应的基因治疗联合应用。我们发现在恶性胶质瘤中血管内皮生长因子受体（EGFR）过表达及p53基因突变往往并存，为此将反义EGFR—RNA及p53同时转染恶性胶质瘤细胞系，研究两者联合基因转导对胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响，为应用联合基因治疗提供实验依据。

反义-miR221／222上调p27^kip1抑制胶质瘤生长的研究

微小RNA（mieroRNA或miRNA）是长度约21～25核苷酸的非编码RNA，在转录后水平对其靶基因的表达进行负调控。国外已在体外实验中证实miR-221／222可以通过抑制p27^kip1表达促进肿瘤细胞生长。我们通过敲低胶质瘤裸鼠模型中肿瘤细胞的miR-221／222表达，观察miR-221／222可以通过调控p27^kip1的表达抑制胶质瘤生长。

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体抑制胶质瘤生长的研究

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL），是肿瘤坏死因子（TNF）家族成员中的一个新成员，最早由Wiley等从人心肌cDNA文库中克隆获得。与TNF其他成员不同的是，TRAIL仅诱导肿瘤细胞、病毒感染细胞发生凋亡，对正常细胞无凋亡诱导作用。

反义缺氧诱导因子抑制胶质瘤的实验研究

研究表明许多人类肿瘤内都有显著的缺氧区域。处于缺氧状态的肿瘤细胞仍能不断增殖、浸润，许多基因表达的改变依赖于缺氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor，HIF-1）所调节。HIF-1是DNA结合的异质二聚体，由HIF-1α和HIF-1β构成。作者构建了反义HIF-1α（antisense hypoxia inducible factor 1α，aHIF）重组质粒，建立裸鼠C6胶质瘤皮下模型，研究aHIF对胶质瘤血管生成、细胞凋亡和生长的影响作用，并对其作用机理做了初步探讨。

SLC22A18表达抑制胶质瘤细胞增殖的分子机制

有研究表明，SLC22A18表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖和恶性生物学特征^[1-2]，推测SLC22A18调控U251细胞重要细胞周期调控蛋白p21和p27是其抑制U251细胞增殖的主要机制。本研究旨在探讨SLC22A18表达抑制胶质瘤U251细胞增殖的分子机制，揭示SLC22A18的基因功能。

紫杉醇对胶质瘤细胞系C6增殖抑制的影响

目的通过体外实验探讨紫杉醇对胶质瘤细胞系C6的抗增殖作用及其作用机制。方法应用形态学、四甲基偶氮唑蓝实验(MTT)、流式细胞术对紫杉醇诱导的胶质瘤细胞系C6进行检测和观察。结果①紫杉醇1nmol／L剂量组镜下观察细胞形态无明显变化,贴壁状况良好;紫杉醇10、100nmol／L剂量组可见细胞密度减小,少许贴壁生长,偶见坏死细胞;紫杉醇1 000nmol／L剂量组细胞贴壁状况不好, 大部分细胞漂浮于培养液中,部分细胞已坏死;②通过MTT观察到紫杉醇各剂量组与对照组相比抑制率均增高(P<0．05),随着时间的延长,各剂量组不同时间段之间的抑制率增高(P<0．05);紫杉醇对C6的抑制率有剂量和时间的依赖关系;③流式细胞仪分析结果显示细胞有G2-M期阻滞,1 000nmol／L紫杉醇分别作用24、48h后,G2-M期细胞比例分别为63．75％、37．20％(同对照组比较P<0．01)。紫杉醇作用48h时出现凋亡峰,细胞凋亡率为14．31％。结论紫杉醇对胶质瘤细胞系C6具有明显的生长抑制作用,呈时间-剂量依赖性;紫杉醇可以诱导胶质瘤细胞系C6细胞发生凋亡,凋亡与G2-M期阻滞密切相关,G2-M 期阻滞达到一段时间后才诱导细胞凋亡。

人胶质瘤抑制候选基因2-GLTSCR2稳定表达HEK293细胞株的构建

为构建人GLTSCR2基因HEK293细胞稳定表达株,在HEK293细胞中获取c DNA,以c DNA为模板扩增GLTSCR2基因蛋白质编码区,经双酶切后连接入pBABE-GFP载体的多克隆位点,测序鉴定后将pBABE-GFP-GLTSCR2稳定转染至HEK293细胞,之后采用荧光显微镜观察与Western blot免疫印迹鉴定表达情况。结果为:扩增得到GLTSCR2基因蛋白质编码序列长度1 437 bp,与NCBI提供的序列信息100%匹配;GLTSCR2定位于HEK293的核仁;Western显示外源GLTSCR2正常表达。pBABE载体稳定表达体系可在HEK293中稳定表达flag-GFP-GLTSCR2,为后续的实验奠定了基础。

pEGFP-ING4抑制裸鼠皮下人U87移植瘤生长及肿瘤血管生成

目的探讨pEGFP-ING4对裸鼠体内人U87细胞移植瘤生长及对肿瘤血管生成的影响。方法将成功构建的18只人U87细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为pEGFP-ING4和pEGFP-C2转染组及PBS空白对照组3组,测量各组肿瘤的体积变化,荧光显微镜观察转染瘤体内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达情况,免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD)。结果荧光显微镜下pEGFP-ING4组和pEGFP-C2组均观察到GFP表达,接种后第21d、28d、35d各组皮下肿瘤体积(mm3)为:PBS组(201.8±19.3,418.9±26.4,622.1±51.3),pEGFP-C2组(197.6±18.9,398.4±20.4,593.7±48.7),pEGFP-ING4组(138.9±8.4,198.7±21.5,293.2±31.6),肿瘤接种后在同一时间点内,pEGFP-ING4组肿瘤体积明显小于另外两组(P<0.05);MVD检测(个/mm2):PBS组(15.83±0.98),pEGFP-C2组(15.83±1.62),pEGFP-ING4组(4.17±1.17),与另外两组比较,pEGFP-ING4组MVD明显降低(P<0.01)。结论 ING4基因能够明显抑制人U87细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制胶质瘤血管的生成可能是其抗肿瘤的重要机理之一。

神经胶质瘤微血管内皮细胞膜上VEGF-2受体的分布和密度

神经胶质瘤是一种血供丰富的恶性神经系统肿瘤。丰富的血供给胶质瘤的增殖和侵袭提供了必需的营养和氧气。抑制胶质瘤血管的形成是一种有前景的治疗策略,因此目前世界范围内都在研究靶向抑制胶质瘤的血管形成的治疗手段。在胶质瘤的形成过程中,

反义表皮生长因子受体cDNA转染抑制胶质母细胞瘤生长的机制研究

目的 探讨反义表皮生长因子受体(EGFR)cDNA转染抑制胶质母细胞瘤细胞株U87MG生长的机制。方法 反义EGFR cDNA转染胶质母细胞瘤细胞株U87MG后,筛选出低表达EGFR的细胞株;通过观察肿瘤细胞的形态和Western蛋白印迹免疫化学方法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,来研究反义EGFR cDNA转染对胶质母细胞瘤分化的影响;通过流式细胞仪进行细胞周期分析及免疫组织化学方法检测细胞周期调控蛋白p53、Rb、p16和CDK4等,以研究反义EGFRcDNA转染对细胞周期的影响及机制;用telomeric repeat amplification protocol(TRA分析)检测肿瘤细胞的端粒酶活性。结果 反义EGFR cDNA转染胶质母细胞瘤U87MG后,肿瘤细胞的突起延长,细胞的GFAP表达增高;肿瘤细胞的G_0/G_1期细胞百分率明显增高,而S期细胞百分率明显减少;肿瘤细胞的野生型p53蛋白表达明显增高,而Rb、p16和CDK4等的蛋白表达水平未发生明显改变;肿瘤细胞的端粒酶活性明显降低。结论 反义EGFR cDNA转染可以通过诱导胶质母细胞瘤细胞分化、诱导野生型p53的表达、G_1细胞周期阻滞及抑制端粒酶活性等机制而抑制肿瘤细胞生长,而且这些作用机制之间是相互作用、相互协调而共同发挥抑制肿瘤细胞生长作用的。

SLC22A18基因转染对胶质瘤细胞G2期阻滞的影响

近年来研究结果表明SLC22A18可能在肿瘤发生中起着抑制作用。在前期研究中发现SLC22A18基因表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖，该研究进一步探索SLC22A18抑制U251细胞的增殖的分子机制。