核转录因子-κB及抑制蛋白IκBα在黄斑前膜中的表达及临床意义

目的研究核转录因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)P65亚基及抑制蛋白IκBα在黄斑前膜中的表达及临床意义。方法用免疫荧光组织染色化学方法结合RT-PCR方法分别从蛋白水平及mRNA水平来研究20例原发性黄斑前膜、49例继发性黄斑前膜患者中NF-κBP65亚基及抑制蛋白IκBα的表达情况,用电镜观察其病理特征。15例正常黄斑区视网膜组织作为阴性对照。结果正常黄斑区视网膜组织中的NF-κBP65和IκB"的免疫荧光组织化学染色方法及RT-PCR方法检测结果均为弱表达。NF-κBP65和IκBα在黄斑前膜组织中的表达明显高于正常黄斑区视网膜组织,差异有显著性(P<0.01);继发性黄斑前膜组织中的NF-κBP65和IκBα的表达高于原发性黄斑前膜,差异有显著性(P<0.05)。结论NF-κBP65和IκBα高表达与黄斑前膜的发生关系密切,参与了黄斑前膜的发生发展和NF-κB的激活,可能调控其他的一些蛋白质,共同作用导致黄斑前膜的发生,因此NF-κB可能是治疗黄斑前膜的新靶点。

亚硒酸钠对哮喘大鼠肺组织核因子-κB和抑制蛋白α表达的影响

目的:观察哮喘大鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)和抑制蛋白α(IκBα)的表达及炎性细胞的浸润,探讨用亚硒酸钠干预后对其的影响及其作用机制。方法:18只健康雄性SPF级W istar大鼠随机分为哮喘组(A组),亚硒酸钠干预组(Se组)和正常对照组(C组),每组6只。A组和Se组用卵清蛋白(OVA)致敏激发复制哮喘模型,Se组每次激发前用亚硒酸钠干预,C组用生理盐水作为对照。免疫组化方法观察NF-κB、IκBα在哮喘大鼠肺组织的表达。结果:哮喘组支气管肺组织NF-κB的蛋白表达(31.96±6.22)%显著高于对照组(5.08±1.92)%,IκBα蛋白的表达(1.64±0.58)%低于对照组(14.01±3.99)%,有统计学差异(P<0.01)。干预组NF-κB(18.09±4.13)%的蛋白表达与哮喘组相比显著降低(P<0.01),IκBα(5.04±0.45)%则增高(P<0.05)。哮喘大鼠肺组织NF-κB与IκBα蛋白表达呈负相关(r=-0.819,P<0.01)。结论:亚硒酸钠能够抑制哮喘大鼠肺组织IκBα的降解和NF-κB的激活,进而抑制气道炎症。

阿魏酸钠对哮喘大鼠肺组织核因子-κB、抑制蛋白α和ICAM-1表达的影响

目的观察哮喘大鼠气道炎症、气道反应性及肺组织中核因子-κB(NF-κB)、抑制蛋白α(IκBα)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达,探讨用阿魏酸钠干预后对其的影响及作用机制。方法18只健康雄性SPF级Wistar大鼠随机分为哮喘组(A组),阿魏酸钠干预组(Fe组)和正常对照组(C组),每组6只。A组和Fe组用卵清蛋白(OVA)致敏激发复制哮喘模型,Fe组每次激发前用阿魏酸钠干预,C组用生理盐水作为对照。测定哮喘大鼠的气道高反应性及支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞数量,免疫组化方法观察NF-κB、IκBα和ICAM-1在哮喘大鼠肺组织的表达。结果阿魏酸钠能降低哮喘大鼠的气道高反应,减少气道嗜酸性粒细胞的募集。A组支气管肺组织NF-κB[(38.03±2.89)%]和ICAM-1[(14.59±0.56)%]的蛋白表达显著高于对照C组[分别为(5.26±0.41)%,(1.89±0.26)%],IκBα蛋白的表达[(1.58±0.34)%]低于C组[(15.49±1.32)%],有统计学差异(P<0.01)。Fe组NF-κB[(18.65±2.25)%]和ICAM-1[(6.75±0.61)%]的蛋白表达与A组相比显著降低(P<0.01),IκBα[(5.58±0.27)%]则增高(P<0.01)。哮喘大鼠肺组织NF-κB与ICAM-1蛋白表达呈正相关(r=0.878,P=0.022),与IκBα呈负相关(r=-0.824,P=0.044)。结论阿魏酸钠能够抑制哮喘大鼠肺组织IκBα的降解和NF-κB的激活,进而抑制ICAM-1的表达,最终抑制气道炎症和气道高反应性。

抗巨噬细胞移动抑制因子单抗对结肠炎小鼠结肠NF-κB、IκB表达的影响

目的探讨抗巨噬细胞移动抑制因子单抗对结肠炎小鼠结肠NF-κB p65、IκBα表达的影响。方法采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导制备小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的模型,应用抗MIF单抗干预,观察抗MIF单抗对小鼠UC发病的干预作用。该实验分为正常对照组、UC模型组、抗MIF单抗干预组和生理盐水组。造模及药物干预期间观察小鼠一般情况并行疾病活动指数(DAI)评分,第8天断颈处死全部小鼠,行结肠大体损伤评分,HE染色光镜下观察结肠病理改变,免疫组化染色观察NF-κB p65、IκBα在结肠组织炎症细胞的表达情况。结果与正常组相比,UC模型组中NF-κB p65的表达显著增加,而IκBα的表达稍增加,在抗MIF单抗治疗后,NF-κB p65的水平明显低于UC模型组,并且IκBα含量增高。结论抗MIF单抗对DSS诱导的急性UC的小鼠具有保护作用,减低了小鼠结肠组织NF-κB p65的表达水平,提高IκBα的表达水平,从而达到抑制UC小鼠结肠组织NF-κB通路的过度激活的作用。

雌二醇通过与雌激素受体β结合抑制骨关节炎滑膜细胞的NF-κB通路发挥抗炎作用

目的探讨雌二醇在骨关节炎病程中对滑膜细胞产生抗炎作用的机制。方法分离并鉴定滑膜细胞,利用免疫荧光染色观察滑膜细胞表达雌激素受体β(ERβ)的情况;而后对滑膜细胞进行分组:空白对照组,10 ng/m L白细胞介素1β(IL-1β)处理组、雌二醇处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L的雌二醇培养)、雌二醇联合雌激素受体阻断剂四氢大麻酚(THC)处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L雌二醇和10-5mol/L THC),各组处理36 h。实时定量PCR检测滑膜细胞中核因子κB抑制蛋白α(IκBα)和IL-6的mRNA水平,Western blot法检测滑膜细胞中IκBα和IL-6的蛋白水平。结果骨关节炎滑膜细胞中有ERβ表达;IL-1β组IL-6的mRNA和蛋白水平表达均增高;IκBα蛋白水平降低,而mRNA水平升高,同时磷酸化IκBα蛋白水平升高;与IL-1β组相比,IL-1β联合雌二醇组,IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平下降。用IL-1β、雌二醇、雌激素受体阻断剂三者联合组,则可见IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平较IL-1β处理组无明显变化。结论雌二醇通过结合ERβ抑制NF-κB通路激活从而发挥抗炎作用。

白芍总苷对巨噬细胞核转录因子-κB活化的影响及其机制研究

目的:研究白芍总苷(TGP)对核转录因子-κB(NF-κB)活化的调节作用及其机制。方法:不同剂量(10,30,100,300μg.mL-1)的TGP作用于大鼠腹腔巨噬细胞2 h后,加入脂多糖(LPS)刺激20 min或1 h,Westernblot方法分别观察NF-κB抑制蛋白IκBα在胞浆中的含量及NF-κB亚基p65在胞核中的含量,同时检测NF-κB与DNA的结合活性。结果:TGP显著增加了LPS刺激后的巨噬细胞胞浆中IκBα蛋白的含量,同时显著减少了胞核中NF-κB p65蛋白含量,并对LPS诱导的NF-κB与DNA的结合活性也有明显抑制作用。结论:TGP可抑制LPS诱导的巨噬细胞NF-κB的活化,其机制与TGP抑制IκBα蛋白的降解,阻遏NF-κB p65蛋白的核转移和抑制NF-κB与DNA的结合密切相关。

抵当汤调控深静脉血栓形成大鼠模型IκBα表达的实验研究

目的:观察核转录因子κB(NF-κB)抑制蛋白IκBα在大鼠深静脉血栓形成(DVT)中的表达及其抵当汤的调控作用。方法:以170只Wistar大鼠为研究对象,根据下腔静脉结扎法制备DVT大鼠模型,排除各种原因死亡的实验动物,随机分为5组,假手术对照组(A组)、血栓模型对照组(B组)、穿王消炎片治疗组(C组)、复方丹参片治疗组(D组)和抵当汤治疗组(E组),每组30只,分别于术后1、3、7天取下腔静脉标本。免疫组化法观察IκBα蛋白在不同病程及治疗组DVT大鼠血管内皮细胞的表达。结果:IκBα表达在血栓形成的同一时相,血栓模型组与假手术组比较,有非常显著性差异(P<0.01),说明血栓本身可以降低静脉壁内皮细胞IκBα的表达,用药组较血栓模型组表达明显增强;IκBα表达在血栓形成后存在比较明显的规律,第1天可见表达减弱,第3天表达最弱,第7天开始增强,呈现先下降而后升高的趋势;各治疗组对IκBα的抑制作用,在各同一时相,穿王消炎片组和抵当汤组最强,复方丹参片组最弱。结论:NF-κB在DVT发生发展过程中可能起重要作用;抵当汤能有效抑制DVT大鼠血管内皮细胞中NF-κB的表达。

SIP蛋白调节p65核转位的作用机制

核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)参与转录调控许多与细胞生长、凋亡、肿瘤形成和转移、胚胎发育及炎症反应相关的基因.它的二聚体与抑制蛋白结合,如抑制蛋白κB(IκBα,β或γ),而被滞留在细胞质中处于失活状态.然而NF-κB是否还有其它的抑制因子目前还不清楚.本研究结果表明,SIP(steroid receptor coactivator,SRC,SRC-interacting protein)是NF-κB家族的一个新抑制因子,它通过PEST结构域与NF-κB家族的p65蛋白相互作用.当细胞处于静息状态时,SIP将p65蛋白隔离于细胞质中;当有刺激因子TNFα或IL-1作用时,SIP与p65解离继而使p65进入细胞核启动下游靶基因转录激活.该研究为进一步认识NF-κB介导基因转录调控机制和相关疾病的发生发展提供了重要的理论依据.

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织NF-κB p65,IκBα,IκKβ蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白激酶(IκK)/NF-κB抑制蛋白(IκB)/NF-κB信号通路的影响,探讨参苓白术散改善UC的作用机制。方法:将48只Wistar大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、参苓白术散(15.6 g·kg^-1)组、奥沙拉嗪钠(0.68 g·kg^-1)组,每组12只,脾虚湿困型UC大鼠模型采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠结合环境与饮食干预法复制,给药组连续灌胃14 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-1β(IL-1β)含量,免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠结肠组织中NF-κB p65,IκBα,IκKβ蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠结肠组织NF-κB p65,IκBα,IκKβmRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TNF-α,IL-6及IL-1β含量均显著升高(P<0.01),结肠组织NF-κB p65,IκKβ蛋白和mRNA表达显著升高(P<0.01),IκBα蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,参苓白术散组和奥沙拉嗪钠组大鼠血清TNF-α,IL-6及IL-1β水平均显著下降(P<0.01),结肠组织NF-κB p65,IκKβ蛋白和mRNA均显著下降(P<0.01),IκBα蛋白和mRNA表达显著升高(P<0.01)。结论:参苓白术散能明显下调脾虚湿困型UC大鼠结肠组织NF-κB p65,IκKβ,蛋白和mRNA表达,上调IκBα蛋白和mRNA表达;参苓白术散抑制UC大鼠IκK/IκB/NF-κB信号通路活化是其发挥肠黏膜保护作用的重要机制。

小柴胡汤对CFA大鼠滑膜组织NF-κB信号通路作用的探讨

目的:观察小柴胡汤治疗后弗氏完全佐剂(CFA)大鼠滑膜组织核转录因子(NF)-κB信号通路中肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TARDD),NF-κB抑制蛋白α(IκBα),IκB激酶-α(IKKα),NF-κB p65蛋白的表达。方法:将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备CFA动物模型。根据随机数字表,将大鼠随机分为正常组、模型组、小柴胡汤低、中、高剂量组、雷公藤多苷组。各组于造模后7 d开始灌胃给药,正常组及模型组均予注射用水,小柴胡汤低、中、高剂量组(5. 94,11. 88,23. 76 g·kg-1),雷公藤多苷片(0. 006 3 g·kg-1),分别2 mL/次,每天3次灌胃,连续给药28 d后观察实验大鼠踝关节组织病理学及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠右后踝关节组织病理评分显著增加(P <0. 01),NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达显著增高(P <0. 01)。与模型组比较,随着小柴胡汤剂量的增加,实验大鼠右后踝关节组织病理评分显著减少(P <0. 01),在大鼠踝关节组织标本NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65关键蛋白的表达上,小柴胡汤低剂量组蛋白表达明显减低(P <0. 05),而小柴胡汤中剂量组、小柴胡汤高剂量组、雷公藤多苷组蛋白表达显著减低(P <0. 01)。结论:研究显示小柴胡汤随着剂量的增加,可以有效地改善滑膜炎症,抑制NF-κB炎症信号通路中关键蛋白的表达,从而阻止炎症而抑制骨侵蚀。

加味黄芪鳖甲汤联合耳穴压豆治疗糖尿病周围神经病变气阴两虚证的疗效及对血清MyD88/IκB信号通路的影响

目的:观察加味黄芪鳖甲汤联合耳穴压豆治疗糖尿病周围神经病变气阴两虚证的疗效及对髓样分化因子(MyD88)/核转录因子-κB抑制蛋白(IκB)信号通路的影响。方法:140例患者随机分为观察组和对照组,各70例。均给予患者饮食指导,控制空腹血糖、血压等基础治疗,观察组给予加味黄芪鳖甲汤联合耳穴压豆治疗,对照组给予甲钴胺治疗,疗程均为4周。治疗前后分别观察两组多伦多临床神经病变量表(TCSS),中医证候,运动及感觉神经(正中神经、腓总神经、胫神经、尺神经)传导速度,糖代谢指标[空腹血浆葡萄糖(FPG),餐后2 h血浆葡萄糖(2 hPG),糖化血红蛋白(HbA1c)],肠道菌群(毛梭菌、布劳氏菌、拟杆菌、粪杆菌),血清MyD88/IκB信号通路[MyD88,IκBα,磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白α(p-IκBα)]的水平。比较两组临床疗效及安全性。结果:观察组总有效率85.3%(58/68),高于对照组的48.5%(32/66)(χ^(2)=6.143,P<0.05)。与对照组治疗后比较,观察组TCSS,中医证候,FPG,2 hPG,HbA1c,毛梭菌,布劳氏菌,MyD88,p-IκBα降低(P<0.05),运动及感觉神经(正中神经、腓总神经、胫神经、尺神经)传导速度加快(P<0.05),拟杆菌,粪杆菌,IκBα升高(P<0.05)。观察组不良反应发生率1.5%(1/68),低于对照组的12.1%(8/66)(χ^(2)=4.328,P<0.05)。结论:加味黄芪鳖甲汤联合耳穴压豆可明显改善糖尿病周围神经病变气阴两虚证患者的临床疗效,其作用机制可能与调节血清MyD88/IκB信号通路有关。

痰瘀同治调控TLR4/NF-κB/IκB通路对糖尿病大鼠心肌炎症反应的影响

目的:观察痰瘀同治对糖尿病大鼠心肌Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/核转录因子-κB抑制蛋白(IκB)信号通路的干预作用,探讨其改善糖尿病大鼠心肌炎症病变的相关机制。方法:选取清洁级雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、化痰组、化瘀组、痰瘀同治组、阿拉氯胺组、模型组。除正常组外,其余各大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55 mg·kg^(-1)建立糖尿病模型,正常喂养3周后,化痰组、化瘀组、痰瘀同治组每日分别给予小陷胸汤(4.05 g·kg^(-1)),血府逐瘀汤(7.02 g·kg^(-1)),抵当陷胸汤(8.10 g·kg^(-1))灌胃,阿拉氯胺组每日予阿拉氯胺(3 mg·kg^(-1))灌胃,连续给药8周后麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测心肌组织TLR4蛋白及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平;免疫组化法检测NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠心肌TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α的mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,各用药组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平均有不同程度下降(P<0.01);组间比较发现,痰瘀同治组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平比化瘀组和化痰组下降更明显(P<0.05,P<0.01)。结论:痰瘀同治法能够改善糖尿病大鼠心肌炎症病变,且效果优于单独使用化痰法或化瘀法,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/IκB信号通路的激活有关。

消脂汤对FFA诱导NASH细胞模型的影响及其相关机制

目的:探讨消脂汤对游离脂肪酸(FFA)诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)细胞模型的作用及机制。方法:用0.5μmol·L-1FFA诱导Hep G2细胞建立NASH细胞模型,用消脂汤及非诺贝特干预NASH细胞模型;油红O染色观察细胞内脂滴含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子-κB(NF-κB)p65,IκB激酶(IKKβ),IκB磷酸化激酶[Phospho-IKKα/β(Ser176/180)],胰岛素受体底物1磷酸化蛋白[Phospho-IRS-1(Ser^(307))],胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达。结果:FFA刺激24 h后,模型组内脂滴含量,细胞上清液中TNF-α,IL-6含量高于正常组(P<0.01),IKKβ,p-IKKα/β(Ser176/180),p-IRS-1(Ser^(307)),NF-κB(核蛋白)表达明显增加(P<0.01),IRS-1蛋白表达减少(P<0.05),各给药组p-IKKα/β(Ser176/180),p-IRS-1(Ser^(307)),NF-κB p65(核蛋白)表达减少(P<0.01),尤其是消脂汤高浓度组较非诺贝特p-IKKα/β(Ser176/180),p-IRS-1(Ser^(307))蛋白表达显著减少(P<0.01),各给药组IRS-1蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:消脂汤可改善FFA诱导的NASH细胞模型中脂质沉积及炎症反应,其机制可能与抑制细胞内IKKα/β,IRS-1 Ser^(307)的磷酸化及IKKβ,NF-κB p65(核蛋白)表达有关。

桑梅止咳颗粒对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症反应的作用及机制

目的:观察桑梅止咳颗粒对咳嗽变异性哮喘(CVA)大鼠炎症反应的调节作用及机制。方法:6周龄雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组(桑梅止咳颗粒2.48 g·kg^(-1)灌胃);模型组、中药组分别在第1,8天腹腔注射10%卵蛋白(OVA),氢氧化铝混合液+第15天开始1%OVA溶液雾化激发建立CVA模型;第15天各组连续干预2周。实验结束,检测大鼠肺功能,外周血炎细胞计数,血清白细胞介素(IL)-4,IL-5,IL-10含量,肺组织苏木素-伊红(HE)染色;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα),NF-κB蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠0.1 s用力呼气容积(FEV_(0.1)),0.1 s内平均流速(FEV_(0.1)/FVC),呼出50%FVC量时流速(FEF50%)明显降低(P<0.05,P<0.01);外周血白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数显著升高(P<0.01);血清IL-4,IL-5,IL-10含量显著升高(P<0.01)。HE染色显示模型组支气管可见上皮细胞脱落,气道狭窄,黏液腺增生扩张,各层结构紊乱,细胞排列混乱,大量炎细胞浸润。与正常组比较,模型组肺组织NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01),IκBα蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,中药组大鼠FEV_(0.1),FEV_(0.1)/FVC,FEF50%明显升高(P<0.05);外周血白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数显著降低(P<0.01);血清IL-4,IL-5,IL-10含量显著降低(P<0.01);HE染色显示中药组支气管黏膜损伤较轻,炎细胞浸润、腺体增生、上皮变性坏死等明显减轻。与模型组比较,中药组肺组织NF-κB p65蛋白表达明显降低(P<0.05),IκBα蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:桑梅止咳颗粒具有改善CVA大鼠肺功能、抑制气道炎症反应的作用,机制可能与调控大鼠肺IκBα/NF-κB表达相关。