microRNA-223过表达与抑制表达慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体,并验证其过表达或抑制表达microRNA-223的效率。方法设计针对microRNA-223前体的过表达基因片段及针对microRNA-223成熟体的反义片段,应用聚合酶链反应(PCR)调取目的基因及通过退火反应获得双链DNA寡聚核苷酸片段。并通过基因重组技术将目的基因片段及反义片段分别克隆到GV229及GV232慢病毒载体中,进行PCR鉴定及DNA测序比对分析,构建相应的microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体。利用荧光定量PCR法检测microRNA-223表达水平。结果对阳性克隆进行PCR鉴定及DNA测序证明,microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体构建成功。microRNA-223过表达慢病毒载体能显著提高细胞中microRNA-223表达水平,microRNA-223抑制表达慢病毒载体能明显抑制细胞中microRNA-223表达水平。结论成功构建microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体,为进一步研究microRNA-223对口腔癌发生发展的影响及其机制提供了稳定的细胞转染载体。

心理资本对大学生压力知觉的影响:认知重评的中介效应和表达抑制的遮掩效应

目的:考察心理资本对大学生压力知觉的影响以及认知重评的中介效应和表达抑制的遮掩效应。方法:利用心理资本问卷、情绪调节量表和压力知觉量表对1502名大学生进行问卷调查,采用SPSS 24.0进行描述性统计分析,采用PROCESS进行中介效应分析。结果:1压力知觉与心理资本(r=-0.67,P<0.001)、认知重评(r=-0.48,P<0.001)和表达抑制(r=-0.08,P<0.01)显著负相关,心理资本与认知重评(r=0.65,P<0.001)、表达抑制(r=0.18,P<0.001)显著正相关,认知重评与表达抑制(r=0.37,P<0.001)显著正相关;2中介效应结果表明,控制性别后,认知重评在心理资本对大学生压力知觉的影响间具有中介效应,表达抑制在心理资本对大学生压力知觉的影响间具有遮掩效应。结论:通过提升大学生的心理资本、增加大学生对认知重评策略的使用频率和减少对表达抑制策略的使用频率来降低其感知的压力。

高原军人压力与失眠的关系:亲子疏离的中介作用和表达抑制的调节作用

目的考察在高原军人中压力对失眠的影响,并探究亲子疏离在其中的中介作用和情绪调节策略在其中的调节作用。方法本研究采用横断面研究设计方案。以自编一般资料调查问卷、高原军人压力源量表、亲子疏离量表、失眠严重程度指数量表、情绪调节量表对平均海拔4200 m的2065名高原军人进行问卷调查,通过SPSS 26.0软件对该人群压力、亲子疏离、失眠、情绪调节等进行描述性分析、相关分析、回归分析并建立结构方程模型。结果①年龄大、文化程度较高(P<0.01)以及有/曾有婚史(已婚、离异和丧偶)(P<0.001)的高原军人的压力、亲子疏离和失眠得分均高于其他组。②压力、亲子疏离、失眠、认知重评和表达抑制呈显著两两正相关(r=0.08~0.61,P<0.001)。③压力和表达抑制对亲子疏离存在正向预测作用(β=0.14~0.43,P<0.001),压力、亲子疏离和表达抑制对失眠存在正向预测作用(β=0.04~0.25,P<0.01),认知重评对亲子疏离和失眠预测作用均不显著。④亲子疏离在压力与失眠之间起部分中介作用,占总效应的7.29%。⑤表达抑制调节压力对失眠的影响(β=-0.01,P<0.001),与低表达抑制水平相比,高表达抑制水平可以缓解压力对失眠的不良影响。结论压力显著正向预测高原军人失眠,亲子疏离在其中起到中介作用,而高表达抑制水平能有效缓冲压力对失眠的影响。

当受害者不再沉默:欺凌受害与中学生社会适应的关系——攻击性和表达抑制的作用

为探究欺凌受害对青少年社会适应的影响以及攻击性和表达抑制在其中的作用,采用Olweus受欺凌量表、儿童青少年社会适应问卷、中文版Buss-Perry攻击性问卷和儿童青少年情绪调节问卷中文版对1328名中学生进行问卷调查,结果发现:(1)在控制了性别和年龄后,欺凌受害不仅直接负向预测社会适应,还通过攻击性的部分中介间接预测社会适应。(2)表达抑制调节了中介模型的后半段路径,即当表达抑制水平较低时,攻击性对社会适应的负向预测更强;当表达抑制水平较高时,攻击性对社会适应的负向预测较显著,但作用较小。这提示教育者和监护者,不能一味地将表达抑制视为一种消极的情绪调节策略,要关注欺凌受害是否导致个体的攻击性增强,如果攻击性增强,则要适当培养其表达抑制策略以提升社会适应水平。

儿童期心理虐待对初中生手机依赖的影响:表达抑制与孤独感的链式中介

采用儿童期心理虐待量表、情绪调节量表、手机依赖量表和孤独感量表对873名初中生进行问卷调查。结果显示:儿童期心理虐待正向预测手机依赖(β=0.280,P<0.001),正向预测表达抑制(β=0.105,P<0.01),正向预测孤独感(β=0.166,P<0.01);表达抑制正向预测孤独感(β=0.368,P<0.001),正向预测手机依赖(β=0.311,P<0.001);孤独感正向预测手机依赖(β=0.157,P<0.01)。经中介模型分析,表达抑制与孤独感在儿童期心理虐待与手机依赖中起链式中介作用。结论:儿童期心理虐待经历会增加初中生手机依赖,同时也会通过表达抑制与孤独感的链式中介增加初中生手机依赖。

边防官兵心理应激和心理健康的关系:心理资本的中介作用和表达抑制的调节作用

目的了解心理应激对边防官兵心理健康的影响和作用机制,探讨心理资本的中介作用以及表达抑制的调节作用。方法2020年2月至6月,采用心理健康自评问卷、心理资本量表、心理应激自评问卷、情绪调节量表对777名边防官兵进行现场问卷调查。结果边防官兵心理健康与心理应激(r=0.625,P<0.01)、表达抑制(r=0.113,P<0.01)显著正相关,与心理资本(r=-0.191,P<0.01)、认知重评(r=-0.085,P<0.01)显著负相关。结构方程模型表明心理资本在心理应激和心理健康间起部分中介作用,表达抑制在心理应激对心理健康的影响路径中发挥调节作用。结论心理应激不仅直接影响边防官兵的心理健康,还通过心理资本间接影响边防官兵的心理健康,且受到表达抑制的调节作用。

抑制表达谷氨酰胺合成酶基因对水稻氮代谢和生长发育的影响

从明恢63平衡化cDNA文库中获得水稻GS2基因的cDNA克隆,通过基因克隆和农杆菌介导的水稻遗传转化方法将GS2基因导入中花11进行超量表达.对获得的转基因植株进行生长表型和基因表达、生理生化指标测定与分析.结果显示,T1代转基因植株由于GS2的抑制表达出现黄化现象,生长受到限制;叶片叶绿素含量与GS2基因的表达量紧密相关;植株中大多数氮代谢、叶绿素合成和光呼吸途径中相关基因表达量上升;而植株的氮代谢水平下降,包括GS活性、水溶性蛋白和氨基酸含量。

TP53BP2基因真核表达载体的构建及在人胚肾Expi293F细胞中蛋白表达、纯化及活性鉴定

目的构建人肿瘤抑制因子p53结合蛋白2(tumor suppressor p53-binding protein 2,TP53BP2)的重组真核表达载体,转染人胚肾Expi293F细胞,获得高纯度的重组人全长TP53BP2蛋白并对其进行生物学活性鉴定。方法利用UniProt网站查询TP53BP2基因序列,并进行Expi293F表达系统序列优化,通过同源重组连接至pcDNA3.1(+)-P2Ae GFP载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pcDNA3.1(+)-P2A-eGFPTP53BP2质粒瞬时转染至Expi293F细胞,荧光显微镜观察转染效率,收集实验组及对照组细胞,利用免疫印记试验(Western blot,WB)检测TP53BP2重组蛋白表达水平。通过His标签纯化试剂盒及Superdex 20010/300GL层析柱进行蛋白纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)对纯化后重组蛋白进行鉴定。利用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白结合情况。利用免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白共定位。利用表面等离子体共振(surface-plasmon resonance,SPR)技术,检测纯化后的重组人全长TP53BP2蛋白与TP53BP2抗体的相互作用。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pcDNA3.1(+)-P2A-eGFP-TP53BP2构建成功。经荧光显微镜观察结果显示转染效率约为60%,WB结果表明TP53BP2蛋白在Expi293F细胞中过表达,证明转染成功。SDS-PAGE结果表明纯化后重组蛋白纯度在90%以上,证明纯化成功。Co-IP结果表明,TP53BP2重组蛋白可与p65蛋白相互作用。IF结果表明,His标签蛋白、TP53BP2蛋白及p65蛋白存在共定位,表明三者之间存在相互作用。SPR结果表明,纯化的重组人TP53BP蛋白与TP53BP2抗体具有较好的结合活性。以上结果均证明重组人全长TP53BP2蛋白具有生物学活性。结论成功构建了TP53BP2基因真核表达载体并在人胚肾Expi293F细胞中成功表达出具有生物学活性的重组人全长TP53BP2蛋白,为进一步研究TP53BP2的结构和功能奠定了基础。

情绪调节策略:认知重评优于表达抑制

Gross提出情绪调节产生于情绪发生的过程中,主要有两种普遍的调节策略:认知重评和表达抑制。本文探讨了这两种策略在情绪反应和神经机制上的异同,以及二者对认知活动造成的不同影响。与表达抑制相比,认知重评能更好地降低情绪体验,减少生理反应和交感神经系统的激活,降低杏仁核的激活水平,并对认知活动不产生影响;而表达抑制虽然能够降低情绪行为,但生理反应和交感神经系统的激活却增强,而杏仁核激活水平并未降低,且干扰认知活动的完成。神经病理学的证据进一步表明,相较于表达抑制,认知重评能更好地调节情绪,有利于人们的身心健康。

对恐怖情绪的调节:认知重评和表达抑制的差异——一项ERP研究

本研究采用事件相关电位(ERP)技术,通过测量由视觉诱发的脑电成分晚正波(LPP)来比较情绪调节策略在生理电特征上的差异,探讨认知重评和表达抑制的优劣。实验结果表明:(1)从波幅的角度来比较:在400—600ms时间窗口内,认知重评条件下恐怖图片诱发的LPP波幅显著小于在自由观看条件下的波幅,而表达抑制和自由观看组所诱发的LPP波幅差异较小。(2)从时间进程的角度来比较:认知重评与自由观看组的差异发生在400ms并持续到600ms;而表达抑制和自由观看之间的差异发生在450ms但是只持续到550ms。这表明认知重评相较于表达抑制,对负性情绪起调节作用开始较早,并且持续时间较长。这为认知重评优于表达抑制策略提供了神经生理学上的证据。

成人依恋、情绪调节与主观幸福感:重新评价和表达抑制的中介作用

通过对1163名大学生被试进行成人依恋关系、情绪调节策略的使用以及主观幸福感的测查,该研究从情绪调节这一新的视角,深入探讨了成人依恋对主观幸福感产生影响的可能机制。结果发现:重新评价策略的使用在依恋安全对主观幸福感影响中具有重要的中介作用;依恋回避直接影响个体的主观幸福感;表达抑制对主观幸福感影响不显著。这些结果表明重新评价策略的使用是成人依恋关系影响个体主观幸福感的一个重要途径。

情绪表达抑制功能的文化差异

表达抑制是指当情绪被唤醒的时候,有意识抑制自己的情绪表达行为。诸多研究表明表达抑制并不是一个有用且有效的策略。但不可忽视的是,文化因素是表达抑制与结果变量关系间的一个重要调节因素。即,在个人主义文化中,表达抑制通常发挥着较负面的作用。但在集体主义文化中,表达抑制并非完全是一种不恰当的调节策略。这可能与文化价值观、对"面子"观点的态度以及父母的应对方式有关。未来的研究方向主要在于表达抑制在集体主义文化及不同亚文化中的作用、学业背景下表达抑制的作用及其功能的文化差异以及被试取样的多样化等方面。

认知重评和表达抑制两种情绪调节策略及其神经基础

以认知重评和表达抑制为例,探讨这两种策略在情绪反应和神经基础上的异同。与表达抑制相比,认知重评能更好地降低情绪体验和行为表达,减少生理反应和交感神经系统的激活,降低杏仁核和内侧眶额皮层的激活水平;而表达抑制虽然能够降低情绪行为,但生理反应和交感神经系统的激活却会增强,内侧眶额皮层的激活程度也会增强。虽然在日常生活中,认知重评能更好地调节情绪,有利于人们的身心健康,但在遭遇极端负性事件时,表达抑制更可能作为保护性因素发生作用,有效维持人们的心理弹性。此外,提出进行无意识层面研究、发展研究范式、拓展研究范围及注重教育神经科学研究视角,将可能成为情绪调节策略及其神经基础的研究趋势。

实验性大脑皮层梗死后丘脑和纹状体突触重构与抑制性蛋白表达

目的探讨实验性大脑皮层梗死后同侧丘脑腹后外侧核和纹状体突触重构与抑制性蛋白的关系。方法采用易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)复制右侧大脑中动脉(MCA)皮层支闭塞模型,分别于术后第1、2、3及4周,取鼠脑行免疫组化检查,检测MCA皮层支闭塞组和假手术对照组大鼠不同时点丘脑腹后外侧核和纹状体突触生长素(SYN)及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、神经黏蛋白(neurocan)表达。结果MCA皮层梗死后1周,同侧丘脑腹后外侧核和纹状体SYN阳性信号较对照组高,至第2周恢复正常,第3、4周逐渐降低,且显著低于对照组。MCA皮层支闭塞后1～4周,同侧丘脑腹后外侧核和纹状体GFAP染色阳性星形胶质细胞数和Neurocan阳性信号均逐渐增多,并显著多于对照组。结论抑制性蛋白表达增加可能是脑皮层梗死后远离梗死灶的神经组织突触重构受阻的原因之一,也是梗死后神经功能恢复困难的一个重要方面。

焦虑调节:接受策略与表达抑制、认知重评策略之比较

情绪调节策略研究已经成为近年来心理学研究的热点课题。回顾近十年来关于焦虑的情绪调节策略研究,重点介绍了其中有着新理念、新视角的情绪调节策略——接受策略,并将其与表达抑制和认知重评两种情绪调节策略进行对比,发现接受策略对于焦虑而言是一种有效的调节策略,而且初步得出其作用效果优于表达抑制策略,但可能不及认知重评策略。最后从情绪调节策略的研究趋势、情绪调节策略对心理治疗和心理健康教育等的潜在价值三个方面进行了探讨。

VEGF基因表达抑制对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的:研究siRNA(small interfering RNA)对人胃腺癌细胞SGC-7901的VEGF基因表达的影响．方法:选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA．以人胃腺癌细胞系SGC-7901为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞．采用Hoechst33258染色观察siRNA作用于SGC-7901细胞中出现凋亡小体的情况．流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR法比较转染前后VEGF mRNA表达水平的变化, ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化．结果:两组siRNA转染后均能有效地抑制 SGC-7901细胞的生长,诱导细胞凋亡产生凋亡小体．siRNA作用于SGC-7901细胞．其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0／G1 期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0／G1期(siRNA1组,siRNA2组G0／G1期VS 对照组G0／G1期:75．04％,76．52％ vs 58．37％, P<0．01;siRNA1组,siRNA2组S期vs对照组S 期:17．82％,16．73％ vs 39．52％,P<0．01),而其他组则无明显变化．VEGF mRNA的表达量大幅度减少(siRNA1组,siRNA2组vs对照组: 0．638±0．078,0．656±0．085 vs 0．941±0．046, P<0．01),相对应的VEGF蛋白水平也显著降低(164．7±22．7,166．3±26．6 vs 414．0±61．5, P<0．01),而其他组siRNA转染后则无上述作用．结论:应用靶向VEGF基因RNA干扰技术可以有效抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖．

认知重评和表达抑制在无意识层面对情绪反应的调整作用

采用有意识任务(与执行性意图结合的指导语)和无意识任务(句子整理任务)启动情绪调节策略,考察无意识认知重评和表达抑制对情绪反应的调整作用。结果发现:无意识启动认知重评和表达抑制具有适应性的情绪性结果,能有效下调个体的负性情绪体验和生理反应;无意识表达抑制在对负性情绪体验和生理反应下调方面优于有意识层面,无意识认知重评在对生理反应下调方面优于有意识层面。以上结果表明无意识层面进行的情绪调节与意识层面同样有效。

不同情绪状态下自动表达抑制对情绪及表情知觉敏感性的影响

预备实验、正式实验的分别以81位、103位大学生为被试。在正性、负性两种情绪状态下,用句子整理任务引发抑制情绪或表达情绪两种情绪调节方式,采用信号检测论的方法测量正、负性表情的表情知觉敏感性。结果表明:(1)在负性情绪状态下,表情知觉敏感性存在情绪一致性效应,即被试对负性表情更敏感;在正性情绪状态下,表情知觉敏感性不存在情绪一致性效应,即被试对正、负性表情的敏感性没有显著差异。(2)在正性(快乐)情绪状态下,三组表达方式的被试对正负表情的知觉敏感性均无显著差异。在负性(悲伤)情绪状态下,表达组、控制组的被试对负性表情的知觉敏感性高于正性表情,而抑制组对正负表情的知觉敏感性没有显著差异。

pemt2-cDNA的转染抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞c-Met及Bcl-2的表达并诱发凋亡

为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (phosphatidylethanolamine N methyltransferase 2 ,PEMT2 )的转染抑制大鼠肝癌CBRH 7919细胞增殖的分子机理 ,构建了带有完整的pemt2 cDNA基因质粒载体 ,经转染和鉴定 ,确知其在大鼠肝癌细胞系CBRH 7919细胞中稳定高表达 .用细胞培养、免疫细胞化学、Western印迹、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳等技术研究c Met(HGF的受体 )及抗凋亡蛋白Bcl 2在此过程中的表达和是否诱发凋亡 .免疫组织化学及Western印迹分析显示在转染高表达细胞中 ,c Met及Bcl 2的表达下调 .流式细胞仪分析表明 ,在转染pemt2 cDNA的高表达细胞中 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 ,并在G0 期出现一个凋亡峰 .琼脂糖凝胶电泳谱显示梯状条带 .结果表明 :pemt2的转染可使大鼠肝癌细胞的c Met及Bcl 2的表达下调 ,并发生凋亡 .

反义核酸抑制血栓素合酶的基因表达

目的与方法：针对大鼠血栓素合酶基因设计并合成的三条反义寡脱氧核苷酸片段（ＯＤＮⅠ，ＯＤＮⅡ，ＯＤＮⅢ）与体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞温育２４ｈ，筛选能有效抑制血栓素合酶及ＴＸＡ２生成的片段。结果：ＯＤＮⅠ组培养基中血栓素Ａ２含量在三个浓度点（４，８，１２μｍｏｌ／Ｌ）（１０４６，９１５，８１５ｐｇ／μｇｃｅｌｐｒｏｔｅｉｎ）均较对照组（１２７０，１２８４，１２１２ｐｇ／μｇｃｅｌｐｒｏｔｅｉｎ低（Ｐ＜０．０１）。ＯＤＮⅡ，ＯＤＮⅢ组培养基中ＴＸＡ２含量与对照组相比无显著差异。细胞ＲＮＡ斑点杂交结果显示：ＯＤＮⅠ组斑点积分光密度较对照组明显降低，而ＯＤＮⅡ，ＯＤＮⅢ组斑点积分光密度与对照组相比无明显差异。