向日葵叶醇提取物不同溶剂部位活性成分含量及抑制黄嘌呤氧化酶活性研究

用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇对向日葵叶醇提取物进行萃取,测定不同萃取部位中总黄酮、总酚、总皂苷和绿原酸的含量,探究向日葵叶醇提取物不同部位的抑制黄嘌呤氧化酶活性(xanthine oxidase,XOD)的能力。石油醚部位,总皂苷和总黄酮含量最高,乙酸乙酯部位总酚含量最高,三氯甲烷部位的绿原酸含量最高且抑制XOD活性最佳。三氯甲烷部位经大孔树脂纯化后,70%乙醇部位抑制XOD活性最佳,且抑制类型为可逆性抑制。

土茯苓中抑制黄嘌呤氧化酶活性成分提取工艺优化及其酶动力学研究

目的优化土茯苓中抑制黄嘌呤氧化酶活性成分提取工艺,并考察其酶动力学。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、提取时间、提取温度为影响因素,黄嘌呤氧化酶活性抑制率为评价指标,响应面法优化提取工艺。分别通过Lineweaver-Burk图、Dixon图确定其抑制类型、抑制动力学常数K i。结果最佳条件为乙醇体积分数69%,提取时间89 min,提取温度82℃,黄嘌呤氧化酶活性抑制率为62.25%。抑制类型为竞争性可逆抑制,K i为1.92 mg/mL。结论该方法稳定可靠,可用于提取土茯苓中抑制黄嘌呤氧化酶活性成分。

玉米须抑制黄嘌呤氧化酶活性成分的提取工艺研究

以玉米须为原料,采用索氏提取法提取玉米须黄酮类化合物,并研究其体外抑制黄嘌呤氧化酶活性。分别以乙醇浓度、提取温度和液料比为单因素,以黄酮得率和黄嘌呤氧化酶的抑制率为考察指标,以提取总效果值为评价指标,通过正交实验设计优化玉米须抑制黄嘌呤氧化酶活性成分的索氏提取工艺。结果表明,最佳提取条件为乙醇浓度为60%,提取温度为80℃,料液比为30∶1(mL/g),在此条件下进行试验,得到玉米须抑制黄嘌呤氧化酶活性成分的提取总效果值为49.23%

藜蒿茎抑制黄嘌呤氧化酶活性成分提取条件优化及其成分分析

以黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,XOD)抑制活性为监测指标,采用乙醇回流提取法提取藜蒿茎活性成分。首先进行单因素实验,然后以此为基础,通过响应曲面法优化藜蒿茎中抑制XOD活性成分提取条件,最后通过超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱仪(UPLC/Q-TOF-MS/MS)对藜蒿茎乙醇提取液定性分析。结果表明,最佳提取条件为乙醇浓度53%,提取温度79℃,液料比34∶1(mL/g),在此条件下得到提取液的XOD活性抑制率为56.4%。鉴定出藜蒿茎乙醇提取液的主要成分包括新绿原酸(5-CQA)、绿原酸(3-CQA)、异绿原酸b(3,4-diCQA)、异绿原酸a(3,5-diCQA)、1,5-二咖啡酰基奎宁酸(1,5-diCQA)和异绿原酸c(4,5-diCQA)。

体外模拟消化对车前子来源毛蕊花苷抑制黄嘌呤氧化酶活性的影响

研究体外模拟消化各阶段的条件对车前子来源毛蕊花苷抑制黄嘌呤氧化酶活性的影响。结果发现毛蕊花苷含量在模拟消化作用4 h后降低,降低程度最高的是肠菌孵育样液,毛蕊花苷含量减少率为(71.26±0.96)%,其次是累加消化样液,达(28.46±0.50)%。模拟消化后各样液的黄嘌呤氧化酶抑制作用均有所增加,增加程度最大的为肠菌孵育样液(P<0.05),其次为累加消化样液。经高效液相色谱-质谱联用分析发现,各消化样液中均能检出毛蕊花苷的代谢苷元咖啡酸和羟基酪醇,活性实验表明后两者对黄嘌呤氧化酶的体外抑制活性高于前体毛蕊花苷。毛蕊花苷降解成具有黄嘌呤氧化酶体外抑制活性的产物可能是其在体内表现生理活性的途径之一。

黄酮类化合物抑制黄嘌呤氧化酶活性的定量构效关系

目的预测黄酮类化合物抑制黄嘌呤氧化酶的活性。方法基于分子电性距离矢量(MEDV-13)表征22种黄酮类化合物的分子结构,应用最佳子集回归与多元回归的方法建立化合物的抑制黄嘌呤氧化酶活性与其分子结构之间的相关定量构效关系模型。结果所建立模型具有较高的相关系数灵敏及LOO(leave-one-out)检验相关系数。结论模型具有良好估计能力与稳定性,可用于高效黄嘌呤氧化酶拟制剂的设计和开发。

山木瓜枝中抑制黄嘌呤氧化酶活性的化学成分研究

目的:研究山木瓜枝中抑制黄嘌呤氧化酶活性的化学成分。方法:通过活性导向分离,筛选山木瓜枝中具有抑制黄嘌呤氧化酶活性的粗提物及组分,采用多种色谱分离技术对活性部位进行系统分离,通过理化常数和光谱分析,结合相关文献确定所得化合物的结构;并对所得化合物进行黄嘌呤氧化酶抑制活性的研究。结果:从山木瓜枝的乙酸乙酯部位分离得到6个化合物,经鉴定分别为桑橙素(1)、4,6,3',4'-tetrahydroxy-2-methoxybenzophenone(2)、2,4,6,3'-tetrahydroxybenzo-phenone(3)、3,6,7-trihydroxy-1-methoxyxanthone(4)、2S,3S-3,5,7,3',5'-pentahydroxyavane(5)、丁香酸(6);实验研究证实化合物1对黄嘌呤氧化酶具有一定的抑制活性(IC50=28.9μM)。结论:从活性部位鉴定的6个化合物均为首次从该植物中分离得到,其中化合物1是主要的活性成分。

槲皮素抑制黄嘌呤氧化酶活性促进环磷酸腺苷发酵合成

利用补救途径发酵生产环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)时,黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)受次黄嘌呤诱导大量生成,将部分次黄嘌呤分解为尿酸,并伴随活性氧的产生,导致次黄嘌呤转化率低下和cAMP产量难以提高等问题。摇瓶发酵实验表明,添加槲皮素和木犀草素可以提高cAMP产量。在7 L发酵罐上,通过添加12 mg/L槲皮素,cAMP发酵产量达到5.33 g/L,与对照相比提高了33.92%,同时次黄嘌呤转化率得到明显提升,发酵性能显著提高。关键酶活性分析结果表明,槲皮素有效抑制XOD活性,减少了次黄嘌呤的分解,进而提高其转化率;6-磷酸葡萄糖脱氢酶、腺苷琥珀酸合成酶与腺苷酸环化酶活性均得到显著提高,更多碳流分配到磷酸戊糖途径用于产物合成。副产物尿酸含量的显著减少也表明次黄嘌呤的分解得到有效抑制。活性氧、丙二醛以及抗氧化酶活性的测定结果表明,槲皮素抑制XOD的活性,显著降低了活性氧含量,缓解氧化胁迫对细胞组分造成的损伤,增强细胞活性,使cAMP产量得到显著提升。

土连翘体外抑制黄嘌呤氧化酶活性研究

目的:研究土连翘体外抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)活性。方法:采用高效液相色谱法检测酶反应生成尿酸的量,以甲醇-20 mmol/L K2HPO4缓冲液(pH7.5)(1∶99)为流动相,检测波长290 nm。测定了土连翘及其不同部位对牛奶和鼠肝来源的XOD活性的抑制作用。结果:牛奶来源XOD反应检测方法的重复性试验RSD为2.97%,平均加样回收率101.77%,RSD为2.87%;鼠肝来源XOD的重复性试验RSD为3.72%,回收率98.23%,RSD为3.26%。土连翘抑制牛奶XOD活性IC50为生药浓度1.569 mg/mL,除水溶部位对牛奶XOD没有抑制活性外,各部位对2种来源XOD均有抑制活性,但活性高低不同,同一部位对2种来源XOD的抑制活性有显著差异。结论:该检测方法快速、简便、专属性强、准确、重复性好。土连翘能显著抑制XOD活性,系多成分起作用。

超声辅助酶解制备大米蛋白黄嘌呤氧化酶活性抑制肽的工艺条件优化

以大米蛋白为原料,研究碱性蛋白酶酶解法制备黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,XOD)活性抑制肽,并对其体外功能活性进行评价。研究了蛋白酶种类、底物质量分数、酶解温度、加酶量、酶解pH、酶解时间对大米蛋白水解度(degree of hydrolysis,DH)及酶解产物对黄嘌呤氧化酶活性抑制率的影响,探讨了不同超声处理方式对酶解过程的影响,通过响应面法对实验条件进行了优化结果为:采用碱性蛋白酶,底物质量分数5%,酶解温度为56℃,加酶量为8000 U/g,酶解pH为10,超声功率70 W,超声酶解60 min,对所制备的大米蛋白黄嘌呤氧化酶活性抑制肽的功能活性进行了评价。在最优条件下其黄嘌呤氧化酶抑制活性的IC_(50)为1.55 mg/mL,ABTS自由基清除作用、羟基自由基清除作用、DPPH自由基清除作用的IC_(50)值分别为0.49、12.48、3.88 mg/mL。

平卧菊三七黄嘌呤氧化酶活性抑制提取物的成分分析和降尿酸作用

抑制黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)活性降低尿酸生成是预防和治疗高尿酸血症的有效手段。为获得安全性高的天然来源XOD活性抑制剂,该文以XOD活性抑制率为指标,优化超声波提取条件获得食药兼用资源平卧菊三七XOD活性抑制提取物(Gynura procumbens(Lour.)Merr.extract,GE),利用液质联用技术鉴定其物质组成,并检测其降高尿酸血症小鼠血尿酸作用。经超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱分析发现,GE主要含有4个单咖啡酰基奎尼酸、6个二咖啡酰基奎尼酸等绿原酸类物质和槲皮素及3个糖苷、山奈酚及1个糖苷等黄酮类物质。GE经乙酸乙酯萃取(GEA)和正丁醇萃取(GEB)后,XOD活性抑制率均提高。动物实验表明,GE、GEA和GEB均有效降低血清尿酸水平和肝XOD活性(P<0.01),显著降低肝丙二醛水平(P<0.01)、升高超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性,降低促炎因子IL-6和TNF-α含量(P<0.05)、恢复抑炎因子IL-10水平(P<0.01),从而减轻肾脏尿酸盐沉积和炎症,且GEA和GEB效果好于GE。研究结果可为开发食药资源降尿酸护肝肾产品提供理论基础。

槐米提取物对黄嘌呤氧化酶活性抑制评价及作用机制研究

为了探究槐米醇提物药效物质对体外黄嘌呤氧化酶(XOD)活性抑制的作用机制,本研究采用体外XOD促动力学模型对槐米醇提物及其潜在活性成分芸香叶苷、槲皮素及白桦脂醇进行XOD活性抑制评价,以分析其天然成分芸香叶苷热-酸性水解作用对XOD活性抑制的影响。试验结果表明,槐米提取物A在药剂浓度100~700μg/mL,对体外XOD活性抑制具有良好作用,其最大抑制率可达36.68%,与对照药剂别嘌呤醇(90μg/mL,抑制率61%)相比,抑制率较弱。槐米中主要化学成分芸香叶苷、槲皮素及白桦脂醇在一定药剂浓度范围内,芸香叶苷抑制率不明显,槲皮素表现出优异的XOD抑制作用(抑制率61.64%,IC_(50)值为203.6μmol/L),白桦脂醇次之。在酸性水解作用的条件下,芸香叶苷酸性水解混合物抑制XOD活性作用较热水解作用混合物较高。研究认为槐米醇提物对体外XOD活性抑制的药效物质可能为槲皮素。

γ-谷氨酰基化改善花生粕水解物的呈味效果及黄嘌呤氧化酶抑制作用研究

为提高花生粕的的加工利用价值,以黄嘌呤氧化酶抑制率和感官评价为指标,对花生粕酶解条件及γ-谷氨酰基化条件进行优化,同时分析酶解前后花生粕溶液的蛋白质及氨基酸含量变化,以确定花生粕蛋白的降解情况及γ-谷氨酰肽的合成情况。结果表明,pH 9.0,加酶量0.75%,温度55℃,酶解9 h为最佳酶解条件,黄嘌呤氧化酶抑制率可达(60.42±0.80)%。在谷氨酰胺酶添加量为4%,反应4 h下,对酶解产物进行γ-谷氨酰化修饰,其黄嘌呤氧化酶抑制率提高至(74.12±2.23)%(P<0.05),并能改善滋味特性。酶解前花生粕蛋白质分子质量主要集中在10~66 kDa,肽分子质量>10 kDa占比高达72.42%,经酶解后>10 kDa的蛋白质大幅度下降,5~10、3~5、1~3、<1 kDa都有明显增加(P<0.05)。酶解前总游离氨基酸为(11.38±0.78)mg/g,酶解后和γ-谷氨酰化后游离氨基酸含量分别为(88.82±2.80)、(74.86±7.49)mg/g,推测减少的氨基酸转化成了γ-谷氨酰肽。液相色谱-串联质谱联用分析发现γ-谷氨酰化后酶解液中生成了γ-Glu-Arg、γ-Glu-Leu、γ-Glu-Phe、γ-Glu-Met、γ-Glu-Tyr、γ-Glu-Val等肽段,产量约为25.98 mg/g,证明γ-谷氨酰化修饰可提高花生粕的黄嘌呤氧化酶抑制率,同时改善花生粕酶解物的滋味特性。研究结果为花生粕的再加工和产品开发提供理论依据。

新型黄嘌呤氧化酶抑制剂对痛风治疗的研究进展

目的研究黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)抑制剂与痛风治疗的进展。方法从母核结构、分子对接、药物活性、药代动力学等方面对小分子XO抑制剂以及痛风作用机制进行论述。结果在多种XO抑制剂结构类型中,羧酸类和酰胺类对XO的抑制效果显著,活性与托吡司他相当,可以作为今后XO抑制剂设计的重点。结论以期对羧酸类和酰胺类进行进一步的结构优化,发现更优异的XO抑制剂用于痛风治疗。

土茯苓中黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选鉴定研究

目的采用磁珠固定化酶和LC-MS/MS联用技术快速筛选土茯苓中的黄嘌呤氧化酶抑制剂,明确土茯苓中的降尿酸活性成分。方法以羧基磁珠作为载体通过共价偶联制成固定化黄嘌呤氧化酶。以固定化酶的特异性吸附作用对土茯苓中的黄嘌呤氧化酶抑制剂进行亲和筛选,以LC-MS/MS和对照品进行分析对比,并对筛选鉴定出的成分进行抑制活性和抑制类型进行考察。结果扫描电镜和红外光谱表征了固定化黄嘌呤氧化酶的成功合成,酶固载量为70.50μg/mg,相对活力为79.44%。从土茯苓提取物中共筛选出13个活性化合物,并鉴定了11个成分。酶活性试验表明黄杞苷和异黄杞苷的抑制活性最强,与阳性对照别嘌呤醇接近,其IC_(50)值和抑制类型分别为32.25μg/mL、混合型抑制,35.12μg/mL、竞争性抑制。结论本方法直接从土茯苓提取物中筛选鉴定具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的成分,简单、快速、准确,适用于复杂中药体系中黄嘌呤氧化酶抑制剂的高通量筛选。

黄嘌呤氧化酶抑制剂微胶囊的制备

目的:为提高黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制剂稳定性和生物可及性,采用喷雾干燥法制备XOD抑制剂的微胶囊。方法:以接枝度为指标,单因素实验优化糖基化反应产物的制备工艺,通过傅里叶红外光谱、紫外光谱、荧光光谱等对糖基化产物进行结构表征,探究不同反应时间对功能性质的影响。以大豆分离蛋白(SPI)和普鲁兰多糖的糖基化反应产物为壁材,包埋XOD抑制剂,利用SEM、XRD衍射、差示扫描量热分析等对微胶囊进行结构表征。研究微胶囊在模拟消化液中的释放率及贮藏稳定性。结果:糖基化产物最优制备工艺:蛋白含量1.5%,蛋白和糖的质量比1∶2,反应时间20 min,接枝度最高达35%以上。表征结果表明SPI糖基化改性成功,而且溶解度提高40%,乳化活性和乳化稳定性分别提高2倍和4倍,表面疏水性指数降低225,有利于作为微胶囊壁材。包埋对羟基肉桂酸(HCA)和橙皮素(HES)后,通过SEM观察到微胶囊大小均匀、表面光滑。XRD衍射光谱和差示扫描量热分析验证了HCA和HES被成功包埋。微胶囊使抑制剂的生物利用率提高了50%,且微胶囊的贮藏稳定性较好。结论:本试验成功研发了基于乳酸菌代谢物的XOD抑制剂微胶囊制剂。高效包埋的XOD抑制剂微胶囊为HCA和HES作为生物活性物质用于功能性食品的开发和利用提供了依据。

载鲣鱼鱼籽肽微球模拟消化过程中黄嘌呤氧化酶抑制活性变化

在体外模拟鲣鱼鱼籽肽不同消化阶段对黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)的抑制活性,分析不同消化阶段鱼籽肽的分子量分布、氨基酸组成;并利用海藻酸钙对鱼籽肽进行包埋,分析鱼籽肽微球在模拟胃/肠液中的累计释放率及XOD抑制活性变化。结果表明,经胃消化后鱼籽肽XOD抑制活性最高,为(76.09±0.12)%;肠消化后,鱼籽肽XOD抑制活性下降到(53.02±0.48)%;分子量小于3 000 Da的多肽以及疏水性氨基酸在鱼籽肽XOD抑制活性中起重要作用;载鱼籽肽海藻酸钙微球在肠液中的累计释放率为(88.79±0.65)%,肠液中XOD抑制活性为(81.82±0.28)%,利用海藻酸钙包埋鱼籽肽明显提高了其对XOD的抑制活性。

夏枯草和紫苏叶提取物体外黄嘌呤氧化酶抑制活性及体内降尿酸研究

目的:为了研究中药材夏枯草和紫苏叶提取物的降尿酸作用。方法:将中药材夏枯草和紫苏叶总提物及有效部位通过体外黄嘌呤氧化酶抑制实验和体内高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸水平考察实验进行筛选和评价。结果:体外黄嘌呤氧化酶抑制实验结果显示,夏枯草水提物和紫苏叶醇提物及其乙酸乙酯部位体外抑制率均大于50%,其总提物IC\-50分别为36.96μg/mL和45.57μg/mL。体内高尿酸血症小鼠尿酸水平实验结果显示,夏枯草和紫苏叶总提物及其乙酸乙酯部位有显著的体内降尿酸活性。结论:夏枯草和紫苏叶总提物及其有效部位可以通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性进而发挥降尿酸作用。

UPLC-Q Exactive Plus-MS分析高粱壳化学成分及黄嘌呤氧化酶体外抑制活性筛选

采用高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱对高粱壳中的化学成分进行分析鉴定,并通过高效液相色谱法筛选抑制黄嘌呤氧化酶活性成分。该实验使用Hypersil GOLD C_(18)色谱柱(2.1 nm×30 nm,3μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱,流速1.0 m L/min,进样量10μL。质谱分析采用ESI离子源,在正离子模式下采集数据,利用Xcalibur 4.1软件结合数据库对所得数据进行分析,共鉴定出27种化学成分。对刺槐素、葛根素、芹菜素、根皮苷、异鼠李素和3,3’,4’,7-四羟基黄酮6种化学成分进行活性筛选,发现芹菜素和3,3’,4’,7-四羟基黄酮对黄嘌呤氧化酶(XO)表现出较强的抑制活性,IC_(50)分别为18.11和34.59μmol/L。

不同紫薯馒头黄嘌呤氧化酶抑制活性及感官品质比较

该研究采用8种紫薯粉,对比了其制备紫薯面团的pH值、可滴定酸度(Titratable Acidity,TTA)值与发酵能力,分析了8种紫薯馒头活性成分含量、黄嘌呤氧化酶抑制活性、抗氧化活性以及感官品质的差异,阐明了紫薯馒头活性成分与黄嘌呤氧化酶抑制活性和抗氧化活性之间的内在联系,并筛选出一种能制备具有潜在降尿酸功能紫薯馒头的紫薯粉。结果表明,济黑一号紫薯馒头总黄酮和总花色苷含量、黄嘌呤氧化酶抑制活性、超氧阴离子自由基清除活性与还原力分别为195.70 mg RE/100 g、2.16 mg C3G/100 g、11.93μmol AE/100 g、29.07 mmol TE/100 g和2.69 mmol VE/100 g,均显著高于其它7种紫薯馒头(P<0.05)。相关性分析表明,总黄酮和总花色苷是造成不同紫薯馒头黄嘌呤氧化酶抑制活性与抗氧化活性存在差异的主要原因。济黑一号和济黑二号紫薯馒头感官评分相对较高,分别为86.56和88.22。因此,济黑一号紫薯馒头综合品质最优,济黑一号紫薯粉适用于降尿酸紫薯馒头的开发。该研究为紫薯馒头降尿酸活性的深入研究以及功能性紫薯馒头的开发与工业化生产提供理论依据。